全 文 :收稿日期:2013 - 06 - 14;修回日期:2013 - 12 - 09
基金项目:“十 二 五”国 家 科 技 支 撑 计 划 项 目
(2012BAD21B0404);“十一五”国家科技支撑计划项目
(2006BAD18B04)
作者简介:段琼芬(1954),女,研究员,博士,主要从事天然
产物加工利用的研究工作(E-mail)qiongfend@ 163. com。
油脂安全
辣木籽油食用安全性毒理学评价
段琼芬,马李一,王有琼,张重权,赵 虹
(中国林业科学研究院 资源昆虫研究所,昆明 650224)
摘要:以 SD大鼠和昆明系小鼠为试验动物进行急性毒性、遗传毒性和 30 d 喂养试验,研究辣木籽
油的食用安全性。结果表明:急性毒性试验未发现动物有明显中毒症状与死亡;遗传毒性试验结果
均为阴性;30 d 喂养试验发现当喂食含有 6%、12%辣木籽油饲料的雌、雄大鼠的血糖水平显著降
低,喂食含有 12%辣木籽油饲料的雄性大鼠的总蛋白水平显著降低,其他各项血液生化指标均无
明显变化。因此,辣木籽油是安全无毒的可食用油脂。
关键词:辣木籽油;毒理学;食用安全性
中图分类号:TS225. 1;TS201. 6 文献标志码:A 文章编号:1003 - 7969(2014)02 - 0048 - 05
Toxicological assessment of Moringa oleifera seed oil as edible oil
DUAN Qiongfen,MA Liyi,WANG Youqiong,ZHANG Zhongquan,ZHAO Hong
(Research Institute of Resource Insects,Chinese Academy of Forestry,Kunming 650224,China)
Abstract:Toxicological assessment of Moringa oleifera seed oil was conducted through acute toxicity test,
genetic toxicity test and 30 - day feeding test with SD rats and Kunming rats as test animals. The results
showed that the rats in acute toxicity test had no death or obviousy toxic symptoms;the results of every
dosage group in genetic toxicity test were negative;the blood glucose levels of female and male rats fed
with forage containing 6% and 12% of Moringa oleifera seed oil reduced significantly,the total protein
level of male rats fed with forage containing 12% of Moringa oleifera seed oil decreased markedly,and the
other blood biochemical indexes had no obvious change in 30 - day feeding test. Therefore,Moringa ole-
ifera seed oil was a kind of edible oil with no toxicity.
Key words:Moringa oleifera seed oil;toxicology;edible safety
辣木(Moringa oleifera Lam.)是一种原产于印度
的木本油料树种[1 - 3],目前在我国云南、四川、海南、
福建、两广等地均有种植[4 - 5]。辣木籽油含有高达
80%以上的不饱和脂肪酸,其中油酸含量在 62% ~
75%[6 - 8],是一种可与茶油、橄榄油媲美的高档植物
油。食用辣木籽油可以护肝[9]、预防肝硬化[10]、解
酒[11]、抗氧化[12]、抗胃溃疡、降血糖等。虽然辣木
籽油在原产地已有上千年的应用历史,但其作为一
种新资源食品,需要进行安全毒理学评价试验,因此
本研究依据 GB 15193. 1—2003《食品安全性毒理学
评价程序》,参考范雪层等[13]的研究,对辣木籽油进
行急性毒性、3 项遗传毒性及 30 d喂养试验,以评价
辣木籽油的食用安全性,为开发新资源食用油提供
科学依据。
1 材料与方法
1. 1 试验材料
1. 1. 1 原料、试剂
辣木籽油由辣木籽经脱壳、粉碎、压榨、过滤、精
炼制得,呈淡黄色油状,相对密度 0. 922 3 g /mL;金
龙鱼牌精炼菜籽油,购于家乐福超市;环磷酰胺、2 -
AF、1,8 -二羟基蒽醌、甲基磺酸乙酯、敌克松、叠氮
钠、吐温 - 80 等均为分析纯。
1. 1. 2 试验菌株
鼠伤寒沙门氏菌 TA97、TA98、TA100 和 TA102:
购于云南大学微生物研究所,经组氨酸缺陷鉴定测
84 CHINA OILS AND FATS 2014 Vol. 39 No. 2
试菌株为均匀组氨酸缺陷型,各项生物学指标检
测合格。
1. 1. 3 活化剂 S9
由课题组选择健康成年 SD大鼠,采用苯巴比妥
钠和 β -萘黄酮联合诱导法制备。所得 S9 组分经活
性鉴定和无菌检测合格,蛋白质含量为 38 mg /mL,临
用时以无菌蒸馏水配成质量分数为 4%的混合液。
1. 1. 4 试验动物
SD大鼠及昆明系健康成年小鼠,由昆明医学院
实验动物中心提供,动物质量合格证号 SCXK(滇)
2008 -0008,体重范围为大鼠 60 ~ 225 g、小鼠 20 ~
30 g。
1. 1. 5 仪器、设备
FY172A型温控榨油机(阜阳市双龙粮油设备
有限公司),WSL - 2A 比较测色仪(无锡科达仪器
厂),AU680 全自动生化分析系统(贝克曼库尔特商
贸(中国)公司),KX - 21 全自动血液分析仪(Sys-
mex公司),采血器,显微镜,电热恒温水浴锅,真空
泵,电动搅拌机等。
1. 2 试验方法
1. 2. 1 急性毒性试验
选用健康 SD 大鼠和昆明系健康成年小鼠各 20
只,雌雄各半,体重范围为大鼠180 ~225 g、小鼠 20 ~
22 g,在相同条件下分笼饲养,禁食 7 ~ 11 h 后采用
最大耐受剂量法,经口灌胃辣木籽油,灌胃剂量均为
10 g /kg,一次性给予,灌胃后观察 4 h,常规饲养 14
d,观察并记录动物的生长活动情况及死亡情况。
同时以植物油做空白对照试验。
1. 2. 2 遗传毒性试验
1. 2. 2. 1 Ames试验
采用平板渗入法(GB 15193. 4—1994)进行试
验。试验分辣木籽油组、溶剂对照组、菜籽油阴性对
照组、阳性对照组(对照物为 2 - AF、叠氮钠、甲基磺
酸乙酯、敌克松、1,8 -二羟基蒽醌),每组做 3 次平
行试验,重复 2 次,计数菌落回变数,当受试物菌落
回变数超过自发回变的 2 倍以上并有剂量反应关系
时判定为阳性。
具体操作:将辣木籽油在 110 ℃高温灭菌后,
用吐温 - 80 与蒸馏水作溶剂将其配制成 8、40、
200、1 000、5 000 μg /皿 5 个剂量组,在相同试验条
件下对 4种试验菌株做活化(加 S9)和非活化(不加
S9)试验,S9的加入量均为 0. 5 mL /皿。溶剂对照组
试验剂量为 0. 5 mL /皿。菜籽油阴性对照组试验均
不加 S9,剂量为 0. 5 mL /皿。阳性对照组中,在加 S9
的 TA97、TA98、TA100 中加入 2 - AF(10 μg /皿);在
加 S9 的 TA102 中加入 1,8 - 二羟基蒽醌(1. 0
μL /皿);在不加 S9 的 TA97、TA98 中加入敌克松
(12. 5 μg /皿);在不加 S9 的 TA100 中加入叠氮钠
(1. 5 μg /皿);在不加 S9 的 TA102 中加入甲基磺酸
乙酯(1. 0 μL /皿)。
1. 2. 2. 2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验
选用昆明系健康成年小鼠 50 只,雌雄各半,体重
范围 22 ~25 g,随机分为 5 组,每组雌雄各 5 只。试
验组分为辣木籽油组、阴性对照组和阳性对照组,辣
木籽油组按照经口灌胃剂量不同分为 3 组,灌胃剂量
分别为 2. 5、5. 0、10. 0 g /kg。菜籽油阴性对照组的灌
胃剂量与辣木籽油低剂量组相同,为 2. 5 g /kg;阳性
对照组为环磷酰胺水溶液,灌胃剂量为 40 mg /kg。
采用 30 h经口灌胃法,第 1 次灌胃后间隔 24 h,第 2
次灌胃后 6 h 颈椎脱臼处死小鼠,取其胸骨骨髓制
片,Giemsa染色后,双盲法镜检,以每鼠 1 000 个微
核嗜多染红细胞数为受检细胞基数,计数微核数,计
算微核发生率,采用 t2检验法检验结果的差异性。
1. 2. 2. 3 小鼠精子畸形试验
选用昆明系健康成年雄性小鼠 25 只,体重范围
26 ~29 g,随机分为 5组,每组 5只。试验组分别为辣
木籽油低(2. 5 g /kg)、中(5. 0 g /kg)、高(10. 0 g /kg)3
个剂量组,菜籽油阴性对照组和环磷酰胺阳性对照
组。除阳性对照组是以腹腔注射法试验外(环磷酰胺
水溶液的注射剂量为 40 mg /(kg·d)) ,其余各组均
采取经口灌胃法进行试验。将辣木籽油与菜籽油按
以上剂量调配后经口灌胃,同时进行阴性对照试验,
每天清晨空腹灌胃,每次灌胃剂量为 0. 2 mL /10 g,连
续灌胃 5 d 后常规喂养 30 d,自由进食并饮用自来
水。喂养结束后用颈椎脱臼法处死小鼠,取双侧副睾
进行精子涂片和染色后镜检精子细胞变化情况,计数
精子畸形数,计算精子畸形率,并用 t2检验法比较其
结果的差异性。
1. 2. 3 大鼠 30 d喂养试验
选用 SD健康大鼠 80 只,雌雄各半,体重范围
65 ~ 80 g,按体重随机分为 4 组,每组 20 只。将辣
木籽油加入主料中,配制成质量分数分别为 3%、
6%和 12%的粉状饲料,单笼喂养大鼠,使其自由进
食和自由饮水。每周按规程称体重,连续称 4 周,记
录大鼠体重的变化情况,观察辣木籽油对大鼠体重
和食物利用率的影响,同时将菜籽油同法配制成质
量分数为 12%的粉状饲料作为阴性对照组,持续喂
养 30 d后采用股动脉放血法处死大鼠,取样进行血
942014 年第 39 卷第 2 期 中 国 油 脂
常规以及末期血液生化指标的检验,研究辣木籽油
对大鼠血液系统的影响。
1. 2. 4 数据处理
采用 PEMS软件对试验数据进行方差分析。
2 结果与分析
2. 1 急性毒性试验
对试验动物进行急性毒性试验结果发现,无论
是 SD大鼠还是昆明系小鼠,空腹经口灌胃辣木籽
油 4 h后均未见死亡,在常规饲养期间大、小鼠的生
长发育、进食量、活动情况与空白对照组相比均未见
异常,LD50均大于 10 g /kg,按照我国《化合物经口急
性毒性分级标准》中的毒性 6 类分级标准分级,辣
木籽油属于实际无毒。
2. 2 遗传毒性试验
2. 2. 1 Ames试验
辣木籽油 Ames试验结果见表 1。试验中加 S9
的记为“+ S9”,不加 S9 的记为“- S9”。
表 1 辣木籽油 Ames试验结果(均值 ±标准差)
组别
TA97
- S9 + S9
TA98
- S9 + S9
TA100
- S9 + S9
TA102
- S9 + S9
溶剂对照组 144. 3 ± 9. 7 140. 3 ± 07. 2 22. 7 ± 3. 2 27. 3 ± 6. 5 102. 3 ± 1. 5 109. 3 ± 4. 2 219. 7 ± 15. 3 237. 0 ± 09. 5
阴性对照组 139. 3 ± 3. 8 20. 7 ± 4. 0 098. 3 ± 4. 2 233. 7 ± 09. 5
辣木籽油组
8 μg /皿 000139. 7 ± 16. 3 132. 7 ± 13. 4 25. 0 ± 6. 0 26. 0 ± 6. 2 0098. 3 ± 6. 5 108. 0 ± 4. 6 204. 3 ± 06. 0 228. 3 ± 03. 2
40 μg /皿 127. 3 ± 10. 1 135. 7 ± 05. 5 23. 3 ± 4. 7 29. 0 ± 2. 0 0100. 0 ± 9. 5 114. 7 ± 6. 0 227. 0 ± 19. 3 236. 0 ± 09. 5
2 00 μg /皿 125. 3 ± 10. 4 129. 0 ± 03. 0 21. 0 ± 8. 7 24. 7 ± 3. 2 00099. 3 ± 14. 2 111. 7 ± 6. 4 218. 3 ± 17. 5 243. 3 ± 09. 3
1 000 μg/皿 134. 0 ± 06. 2 126. 7 ± 10. 7 23. 7 ± 4. 2 26. 3 ± 1. 5 00099. 3 ± 10. 1 110. 7 ± 5. 1 229. 3 ± 21. 1 241. 3 ± 10. 0
5 000 μg/皿 136. 3 ± 22. 9 143. 3 ± 03. 2 24. 7 ± 6. 5 25. 3 ± 4. 7 0098. 0 ± 6. 2 104. 7 ± 8. 4 237. 3 ± 20. 4 242. 7 ± 08. 0
阳性对照组
2 - AF 00 2 218. 7 ± 254. 3 2 291. 3 ± 407. 0 1 402. 3 ± 213. 4
敌克松 1 821. 3 ± 246. 8 1 590. 7 ± 255. 8
叠氮钠 01 648. 0 ± 166. 7
甲基磺酸
乙酯
1 594. 7 ± 527. 0
1,8 -二羟
基蒽醌
1 538. 0 ± 94. 3
由表 1 可知,当辣木籽油的剂量在 8 ~ 5 000
μg /皿之间时,无论加 S9 或不加 S9,各标准菌落回
变数与溶剂对照组及阴性对照组比较,均未见明显
增加,亦无剂量效应关系,显示试验结果为阴性,而
阳性对照组菌落回变数均明显高于辣木籽油各剂量
组。表明在试验剂量范围内,辣木籽油不会引起各
试验菌株的突变。
2. 2. 2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验
表 2 为辣木籽油小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试
验结果,雄、雌鼠受检细胞数均为 1 000 × 5 个。
表 2 辣木籽油小鼠骨髓微核试验结果
组别
微核数(个)
雄性 雌性
微核发生率 /%
雄性 雌性
阴性对照组 8 8 0. 16 1. 60
阳性对照组 25 26 0. 50 0. 52
辣木籽油组
02. 5 g /kg 7 8 0. 14 1. 60
05. 0 g /kg 7 8 0. 14 1. 60
10. 0 g /kg 8 7 0. 16 1. 40
由表 2 可知,无论是对雄性还是雌性小鼠灌胃,
辣木籽油的各剂量组结果与阴性对照组相比,其微
核发生率均无显著性差异,亦无剂量效应关系,但与
阳性对照组相比,辣木籽油所有剂量组都有高度显
著性差异(P < 0. 01),表明在本试验剂量范围内,辣
木籽油不会引起小鼠骨髓微核突变。
2. 2. 3 小鼠精子畸形试验
辣木籽油小鼠精子畸形试验结果见表 3。
表 3 辣木籽油小鼠精子畸形试验结果
组别
动物数
(只)
受检精子数
(个)
精子畸形数
(个)
精子畸形率 /
%
阴性对照组 5 1 000 × 5 74 1. 48
阳性对照组 5 1 000 × 5 178 3. 56
辣木籽油组
2. 5 g /kg 5 1 000 × 5 83 1. 66
5. 0 g /kg 5 1 000 × 5 75 1. 50
10. 0 g /kg 5 1 000 × 5 70 1. 40
由表 3 可知,辣木籽油各剂量组精子畸形率与
阴性对照组相比无显著性差异,与阳性对照组相比
05 CHINA OILS AND FATS 2014 Vol. 39 No. 2
差异性高度显著(P < 0. 01),表明在试验剂量范围
内,辣木籽油对小鼠生殖细胞不具有毒性作用,而且
随着剂量的增大小鼠精子畸形率降低,说明辣木籽
油对小鼠生殖细胞可能有一定的保护作用,这需要
进一步的研究。
2. 3 大鼠 30 d喂养试验
在 30 d 喂养试验过程中观察到大鼠的一般临
床症状表现正常,毛发正常、无中毒症状、无异常行
为表现和无死亡。
2. 3. 1 辣木籽油对大鼠体重、食物利用率的影响
(见表 4)
表 4 辣木籽油对大鼠体重、食物利用率的影响(均值 ±标准差)
性别 组别 动物数(只)
体重 /g
初始 第 4 周 增加
食物利用率 /%
雄性
阴性对照组 10 77. 8 ± 3. 1 225. 7 ± 12. 6 147. 9 ± 10. 5 29. 3 ± 1. 6
辣木籽油组
03% 10 78. 1 ± 3. 8 225. 8 ± 06. 9 147. 7 ± 05. 9 29. 1 ± 1. 0
06% 10 78. 5 ± 3. 1 225. 0 ± 08. 2 146. 5 ± 07. 0 29. 7 ± 1. 8
12% 10 78. 2 ± 4. 2 225. 7 ± 12. 9 147. 5 ± 11. 1 28. 4 ± 2. 6
雌性
阴性对照组 10 69. 4 ± 4. 8 156. 8 ± 11. 4 87. 4 ± 11. 8 21. 9 ± 2. 8
辣木籽油组
03% 10 68. 4 ± 4. 6 159. 1 ± 12. 7 90. 7 ± 10. 5 22. 7 ± 2. 5
06% 10 68. 8 ± 4. 7 155. 8 ± 13. 2 87. 0 ± 09. 6 22. 0 ± 1. 5
12% 10 68. 8 ± 4. 7 157. 5 ± 08. 4 88. 7 ± 07. 1 29. 3 ± 1. 6
由表 4 可知,经 30 d 辣木籽油喂养的大鼠,各
剂量组的体重增加和食物利用率与与阴性对照组相
比,差异不显著,表明辣木籽油不会导致大鼠消化系
统的紊乱以及营养代谢的紊乱。
2. 3. 2 辣木籽油对大鼠血液系统的影响
对 30 d 喂养试验中各组大鼠的血常规、血液生
化指标进行测定,研究辣木籽油对大鼠血液系统的
影响,结果见表 5、表 6。血常规指标主要包括血红
蛋白(HB)、红细胞计数 (RBC)、白细胞计数
(WBC)、血小板计数(PLT)以及白细胞的分类情
况;血液生化指标主要包括谷丙转氨酶(ALT)、谷草
转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)、血胆固
醇(CHO)、血脂(TG)、血糖(GLU)、总蛋白(TP)与
血清白蛋白(ALB)。
表 5 辣木籽油对大鼠血常规的影响(均值 ±标准差)
性别 组别
HB/
(g /L)
RBC /
(1012 /L)
WBC/
(109 /L)
PLT /
(109 /L)
中性粒细胞 /
%
淋巴细胞 /
%
雄性
阴性对照组 142. 7 ±6. 9 7. 5 ±0. 4 5. 9 ±2. 6 930. 1 ±324. 1 16. 8 ±5. 1 83. 2 ±5. 1
辣木籽油组
03% 144. 6 ±7. 1 7. 5 ±0. 5 6. 3 ±2. 0 1 137. 6 ±104. 6 16. 7 ±4. 3 83. 3 ±4. 3
06% 145. 2 ±5. 3 7. 7 ±0. 4 5. 5 ±2. 6 1 011. 2 ±365. 6 17. 1 ±4. 5 82. 9 ±4. 5
12% 145. 2 ±7. 3 7. 5 ±0. 6 6. 0 ±2. 0 00955. 7 ±274. 7 15. 6 ±3. 6 84. 4 ±3. 6
雌性
阴性对照组 146. 1 ±6. 5 7. 3 ±0. 4 6. 1 ±0. 9 00856. 0 ±287. 6 00013. 4 ±2. 8 86. 6 ±2. 8
辣木籽油组
03% 149. 2 ±6. 1 7. 5 ±0. 3 6. 8 ±1. 4 01083. 5 ±196. 3 16. 6 ±3. 9 83. 4 ±4. 0
06% 145. 4 ±6. 5 7. 3 ±0. 5 6. 0 ±2. 2 00849. 1 ±451. 6 18. 2 ±3. 6 81. 8 ±3. 6
12% 146. 3 ±6. 9 7. 4 ±0. 4 6. 8 ±1. 0 00930. 6 ±193. 6 16. 2 ±5. 4 83. 8 ±5. 4
由表 5和表 6 可知,辣木籽油各剂量组雌、雄大
鼠的血常规、白细胞分类以及血液生化指标(除 GLU
和 TP外)与阴性对照组相比均无显著性差异,也无
剂量效应,表明在试验剂量范围内,辣木籽油不会影
响雌、雄大鼠的血液系统。但是,辣木籽油对雌、雄大
鼠的 GLU都呈剂量效应关系,并且随着剂量的增加
GLU降低,特别是 6%、12%剂量组雌、雄大鼠的 GLU
与阴性对照组相比差异性高度显著(P < 0. 01),表明
较高剂量的辣木籽油可有效降低试验大鼠的血糖水
平。此外,辣木籽油对雄性大鼠的 TP有影响,并且与
剂量呈负相关关系,即随剂量的增加 TP降低,特别是
12%剂量组与阴性对照组相比差异性高度显著(P <
0. 01),表明高剂量的辣木籽油可有效降低雄性大鼠
的总蛋白水平,可为进一步开展辣木籽油的降血糖作
152014 年第 39 卷第 2 期 中 国 油 脂
用或抗炎作用的研究提供数据支持。
表 6 辣木籽油对大鼠血液生化指标的影响(均值 ±标准差)
性别 组别
ALT/
(g /L)
AST/
(U/L)
BUN/
(U/L)
CRE/
(mmol /L)
CHO/
(mmol /L)
TG/
(mmol /L)
GLU/
(mmol /L)
TP/
(mmol /L)
ALB/
(g /L)
雄性
阴性对照组 77. 8 ±9. 3 197. 5 ±31. 5 4. 7 ±0. 7 57. 6 ±3. 7 1. 8 ±0. 3 0. 6 ±0. 2 4. 5 ±0. 5 56. 5 ±1. 4 46. 0 ±1. 5
辣木籽油组
3% 82. 6 ±7. 7 227. 7 ±23. 3 4. 7 ±0. 4 59. 2 ±2. 2 1. 8 ±0. 4 0. 6 ±0. 1 4. 3 ±0. 5 55. 6 ±2. 0 45. 4 ±2. 0
6% 77. 0 ±15. 3 227. 9 ±25. 8 5. 2 ±0. 4 58. 0 ±2. 9 1. 4 ±0. 4 0. 5 ±0. 1 4. 0 ±0. 3 55. 5 ±2. 1 45. 2 ±1. 5
12% 83. 5 ±12. 3 219. 1 ±23. 3 4. 8 ±1. 2 56. 3 ±3. 2 1. 7 ±0. 3 0. 6 ±0. 1 3. 9 ±0. 4 54. 1 ±0. 8 44. 4 ±1. 3
雌性
阴性对照组 61. 0 ±9. 0 204. 5 ±29. 8 5. 7 ±0. 9 64. 6 ±2. 7 1. 9 ±0. 3 0. 5 ±0. 1 4. 8 ±0. 6 60. 1 ±2. 9 48. 4 ±1. 9
辣木籽油组
3% 59. 6 ±9. 1 217. 9 ±21. 7 5. 8 ±0. 9 63. 6 ±4. 2 2. 2 ±0. 3 0. 6 ±0. 1 4. 5 ±0. 7 59. 7 ±1. 5 48. 9 ±1. 0
6% 59. 6 ±7. 8 219. 9 ±45. 4 6. 9 ±1. 7 63. 2 ±3. 6 1. 7 ±0. 4 0. 4 ±0. 1 4. 3 ±0. 4 57. 6 ±2. 0 46. 9 ±2. 1
12% 57. 3 ±8. 7 224. 2 ±15. 5 5. 6 ±1. 0 60. 7 ±3. 3 1. 8 ±0. 4 0. 4 ±0. 1 4. 1 ±0. 4 57. 7 ±1. 5 47. 3 ±1. 8
3 结 论
(1)根据急性毒性分级标准判定,试验动物食用辣
木籽油是安全的,其安全性分级属于实际无毒级别。
(2)遗传毒性试验结果表明,在试验剂量范围
内,辣木籽油不会引起各试验菌株的突变,不会引起
小鼠骨髓微核突变,对小鼠生殖细胞没有毒性作用。
(3)辣木籽油 6%、12%剂量可显著降低雌、雄
大鼠的血糖水平,且 12%剂量能显著降低雄性大鼠
的总蛋白水平,对大鼠其他血液生化指标均无明显
影响。
致谢:特别感谢昆明医科大学营养与食品公共卫生
学院赵春教授的团队,在有关动物试验方面承担了
全部的试验工作!
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