全 文 ：第 1 5卷 第 2期
1 5 9 9年 6月
中 国 沙 漠
O J UR A NL O F D S E ER TR S A E ER C H
V o l
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1 5
Jfl U
.
No
.
2
1 95 9
黄花补血草的组织培养技术
李凤琴
(中国科学院兰洲沙漠研究所 兰洲 7 3 0 0 0) 0
提 要 沙漠植物组织培养主要是为了开发沙漠植物和繁殖沙区特有的珍 、 稀 ,濒危及难以繁殖
的旱生 、超早生 、 盐生植物 。 实验结果表明 , 黄花补血草能通过组织培养进行快速繁殖 。
关 健 词 组织培养 沙漠植物 黄花补血草
植物组织培养工作 已成为植物快速繁殖和作物品种改 良的重要手段 , 它不仅作为一项新
技术 ,在应用方面取得 了很多成果 , 日益受到重视 ,而 且作为一项科学研究正在不断地深入 (颜
昌敬 , 1 9 9 0 ) 。
外植体 (接种材料 )的选择
培养材料选用生长健壮 、 无病虫 、 幼嫩的黄花补血草临。两兜~ a~ m ) 叶
、 茎 、 根或成熟的
种子 。
黄花补血草组织培养过程中 ,分别选用根 、 茎 、 叶 、 种子为培养材料反复实验 , 优选 出种子
为外植体最理想 ,成功地诱导出愈伤组织并得到了再生植株 ,移栽于引种圃 、 苗圃 , 并已开花 。
2 不同外植体的灭菌方法
为了保证植物组织培养的成功进行 ,外植体在接种前要进行严格的消毒灭菌 , 冻死其表面
常附着各种微生物 。 消毒的基本原则是 : 既要杀死材料上的微生物 , 又不伤材料 。 例如 , 黄花补
血草种子消毒 , 用 70 %的酒精消毒 2 m in 左右 , 0 . 1% H g cl : 消毒 10 m in 左右 ,然后用无菌水冲
洗数次 ,接种在无菌滤纸桥上 ,如其它环节灭菌彻底 ,均能达到理想的效果 。 如选择叶片为外植
体 ,消毒前要用 自来水将尘土 、 沙子等冲洗干净 , 用吸水纸吸干水 ,再用 70 %的酒精漂洗一下 。
特别注意的是 , 消毒时间的长短要以叶片的老 、 嫩程度来决定 。
无菌操作程序是 : 在接种前摆好所需的各种用具与材料 (高压灭菌过的 ) , 接种室要用 5%
的苯粉喷雾降尘 ,打开超净工作 台过滤空气 巧 m in , 用酒精棉球擦手及被接触物 , 再根据需要
剪 、 切 、 割外植体 , 并迅速接种在培养基上 。 组织培养工作量很大 ,从配制培养基到接种 、 倒瓶 、
接转 , 成千上万的三角瓶 , 要一个一个在无菌超净工作台上接转 ,动作既要快 , 又不能有半点马
虎 。 因这项工作一环紧套一环 ,在组织培养过程中 , 污染问题是一大难关 , 所以在一系列的操
作 、 消毒 、灭菌等前处理过程中 , 必须严格认真 ,不能出现过大的失误 , 稍有疏忽就会前功尽弃 。
收稿日期 : 1 9 9 3一 。一 07 一9 9 4一 0 9一 15 改 回
2期 李凤琴 :黄花补血草的组织培养技术 9 9 1
3 试管苗的移栽
试管苗的移栽不同于一般的苗子 , 它要经过沙培 、 土培 、 最后才移栽大 田 。试管苗移栽能否
成活 ,是组织培养快速繁殖的重要环节 , 因为它一直生长在优 良环境 中 , 同时还有一个异养为
主转为 自养的间题 , 因此一切措施都要 以防失水 , 防感染 ,尽快扎根为中心 。 移栽试管苗时 ,先
用清水将根部的培养基冲洗干净 , 试管苗不宜太大 , 要健壮 , 根系不宜太长 , 一般为 0 . 4 c m 左
右 ,移栽基质要疏松透气好 。 试管苗适于浅栽 , 其深度以根不外露为宜 ,浅栽有利于幼根生长 ,
移栽初期的试管苗 , 对环境要求严格 ,最适温度白天为 25 ℃左右 ,夜间为 15 ℃左右 , 空气相对
湿度为 80 %左右 (孙要新 , 19 92 ) , 如低于 8 0 %就要把水喷洒在塑料布上盖好 ,提高湿度 ,避免
阳光直射 , 还需要适当地浇些稀释的营养液 。
4 实验结果
不同激素及不同浓度对 已萌发种子 (黄花补血草 ) 的影响不同 (表 1 ) 。 l “ 、 2 “ 培养基在接
种 20 d 左右 , 逐渐产生浅红色疏松的愈伤组织 . 丛生芽 、 毛状根 ; 无激素不能分化成 苗 ; 3 ” 无
论愈伤组织数 ,分化频率均最差 , 而根数却最多 , 最长达 2 . 5 c m 。 低浓度的 2 , 4一 D 有利于根的
形成 , 4 ” 、 5 ” 也较差 , 2 “ 虽然分化好 ,但苗质细弱 ,瘦小 , 不宜选用 。
表 l 不同激素及不同浓度对已萌发种子 (黄花补血草 )的生长的影响 `
外植
体数 %
愈 伤 组 织
块数
月,J叨即产产05.…nénUo.0氏10曰6巧30
接种 日期
4 月 2 0 日
培 养 基
( m g / L )
1 N A A o
.
s
+ 6
一 B A o
.
s
2 N A A
I
_
o+ 6
一 B A 一 。
3 2 . 4一 D o s+ 6
一B A o s
4 2
,
4一 D 1
.
0十 6 一B A 一 。
5 2
,
4 一D 一 。+ K t 一 。
6 无激素
1 N A A o
.
: 十 6一 B A O `
2 N A A r
.
o + 6
一 B A 一 。
3 2
, 4一 D o
_
5 + 6
一 B A o
_
s
4 2
, 4一 D 一 。+ 6一 B A 卜 。
5 2
, 4一 D 一 。+ K r l
.
o
6 无激素
4 0
4 2
4 2
4 I
4 2
4 2
颜色
浅红
浅红
浅红
浅红
浅红
分化
芽数
分化
苗数
生根
株数
平均苗
高 ( e m )
平均根
长 ( e m ) 备注
301872075419230
根少数毛物状匕d亡J口5O。。nOó“弓n`Unùb5LO工了né.。nU,ù9é八UZ了618701293194037拢拍洲204 月 2 7 日 4 0 9 3
12 9 5
4 2 6 7
I ] 8 3
4 2 6 4
4 2 0
粉红浅黄 一 1 17
粉红浅黄 1 82
浅红
红绿粉白 92
0 0
, 刘家琼 , 1 99 2
从 6 种不同激素及浓度的筛选中 , 1 “ 对黄花补血草均能适应 ,是理想的选择 。 在诱导黄花
补血草分化获得再生植株后 ,通过丛生芽连续继代培养 ,产生大量试管苗 , 达到快速繁殖的 目
的 。
生根培养 , 采用 A B T 生根粉促进无根苗生长 ,接种后 35 d 观察结果 . 实验表明以 1 2/ M , +
A B T O
.
1 为最合适 。
为了探索组织培养条件下植物体发生和形成的变化 . 我们以黄花补血草愈伤组织进行植
2 0 0 中 国 沙 漠 1 5 卷
物细胞学观察 , 材料取接种后不同时间的培养物 ,用 F A A 固定 ,常规石腊切片法 ,厚度 1 0帅 ,
番红一固绿染色 , 显微镜下观察并拍照 。
表 2 A BT 能促进无根缺苗 (黄花补血草 )的生长
培养基 接种数 生根数 生根率
(% )
根状
1 /夕M S + A B T 。 。
1/ 2M S + A B IT
. 。
l/ ZM S + A B T ,
.
5
;)
::
5 0
5 6
根长
(% )
1
.
5
1
.卫
1
.
3
必细
粗
较粗
5 结论
黄花补血草组织培养实验结果表 明 :
( l) 组织培养成功的关键在于优选最合适的接种材料 。
( 2) 筛选最佳培养基 。
( 3) 提高移栽试管苗的成活率 。
( 4) 在体细胞发育中 ,胚性细胞以外源多于内源 。
致谢 本文在刘家琼研究员指导下完成 ,深表感谢 。
参 考 文 献
孙雪新 , 19 9 2 . 白刺组织培养的研究 . 中国沙漠 , l 2( 3) .
刘家琼 , 19 92 . 固沙植物组织培养 . 兰州 : 甘肃技术出版社 .
颜昌获 , 19 90 . 植物组织培养手册 . 上海 : 上海科学出版社 ·
n S S U E C U L T U R E T E C H N IQ U I二5 O F L I M O U I U M A U R E U M
L I F e n g q in
(六. ` 治应. of 建触搜喇 凡既 . 侧消 , 〔决如郎 注仪创功叼 of S’ 滋侧别 , 2 . 趁血月 , 7 3 0 00 0)
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