全 文 ：5 4“ · 实验研究 .
栗柄金粉蔗抗癌成分的研究
刘 毅 1 2吴 广 ` , 2 郑 兴 2 * 姚 旭 2 闰文娜2 薄少伟 , 刘晓龙
( 1 南华大学附属第二医院 , 湖南 衡阳 421 001 ;
2 南华大学药学系 , 湖南 衡阳 4 21 001 ; 3 南华大学科研兴趣小组 , 湖南 衡阳 421 001 )
【摘要】 目的 对果柄金粉菠植物杭癌 活性成分进行研 究 。 方法 M T T 法测定从果柄金粉菠植物 中分 离到的化合物对人结肠癌 (H -T 2 9) 细
胞 、 人胃癌 ( s G c 一 79 01 ) 细胞增殖抑制作用 。 结果 从果柄金粉菠中提取分 离得到的 5 种黄 酮类化合物 , 对人结肠癌 (H -T 29 ) 细胞 、 人胃癌
( 5 G C
一
79 0 1) 细胞增殖具有不同程度的抑制作用 。 讨论 提取得到的 5 种黄酮类化合物可作为杭癌 光导化合物 。
【关键词】果柄金粉菠 ; 黄酮类化合物 ; 杭癌活性
中图分类号 : R2 8 2 . 7 文献标识码 : B 文章编号 : 1 6 7 1一 8 1 9 4 ( 2 0 1 2 ) 2 7一 0 4 5 4一 0 2
5 tu d y
o n A n t卜 c a n c e r C o m p o n e n t s l n o n y c h l u m lu c 记 u m
lL u 扮 2 , 砰 u G u ang 只 2 1刀i六r( i ix ng ]
, 别o xu 凡别N 肠 n 一an 凡B o hs ao 一、 以 lL u ix ao 刁口子啥 ,
口跳 e 理夕11 “ et d 八h 刀 h u “ 刀 d sP iat Zof nU iv e sr i和 of s ou ht hC in 优 刀已刀 g , u 刀 9 1八口 Zan 421 0 1, C hi n “ 厂Z D eP “ 子.。儿en t月f 7 〕h “二“ 创 nU iv e rs i和 of s ou ht
C hi
n 优 刀e 双g , “ 子不9 I le 刀 g , “ 刀 9 42 1口口1
,
C h in “ 厂呈 R es ea 二h ln te re st G o uP, nU iv e sr i和 of s ou ht C ih n优 刀已刀 g , u 刀 g l le 刀 g , “ 刀 9 42 10 1
,
hC in 司
[A b
s t r a ct l O bj
e c t ivc OT i
s o late an d an al yZ
e ht e a n七一 e an e er e on s it tu ent
s in on 3
℃ h ium l
u e idu m
.
M ct ho d
s FVI e fl va on
o id s e om Poun
d s 、 re i s o l ate d fro m ht e h erb s
o f on 3
℃ h in m
. 、诀 ivn e s it g ate d ht e e fe ct o f ht e fl va on o id s on l】1二2 9 an d S C 〔:一7 9 0 1 e e ll l in e s ht rou g h ht e M T T a s s ay cR s ult s hT e fl va o n o id s h ad s ign iif e an t a n t l -
rP
o lifer ia
v e e
fe ct on l】1二2 9 an d S G G 79 0 1 e e ll lin e s
.
o 旧 c lus io n hT e fl va on o id s i s o late d lh 川 I On 3 hc ium l
u e iid u 们 e an b e hc o s en a s le ad e om Poun
d s
.
【K e y w o r d s l On y e h i u m lu e idum ; F lva o n o i d s ;A nt i一 e an e e r ac t iv ity
栗柄金粉荻(On 界h iu m lu e id u m )为中国荻科 ( S in o p te r i d a e e a e )金粉荻
属 (On y hc in m hc in g) 植物 , 民间用于肝炎 、 肠炎、 痢疾 、 尿路感染 、 过
敏性皮炎 、 外伤出血 、 咳血 、 便血 、 尿血 、 烧烫伤 、 感冒 、 食物及药
物中毒等症 l[ 一 3 ] 。 本实验室前期研究发现栗柄金粉荻粗提物对有机磷农
药中毒有解救作用 4[] , 许云龙等 5[] 从同属植物 on y ch in m JaP on icu m 中分
离得到了 o n cy ih n等一系列化合物 , 实验结果显示 on cy ih n对小鼠白血
病 (P 38 8) 细胞增殖有一定程度的抑制作用 , 吴广等6[] 综述了on y ch in 抗
炎 、 抗氧化 、 抗癌等多种作用 7[] 。 为了进一步确定栗柄金粉荻植物中
的有效成分 , 以便得到高效 、 低毒的抗癌先导化合物 , 我们采用反复
柱层析的方法 , 从湖南省江华瑶族自治县产的栗柄金粉荻地上部分得
到芹菜素( l) , 7 一甲氧基白杨素( 2) , 木犀草素 (3) , 3 , 7一二甲氧基榭皮黄
素 (4 )和金粉荻素 ( 5) 等 5个黄酮化合物 , 其中化合物( l) 与 (2) 系首次从金
粉荻属植物中获得 。 体外抗癌实验结果表明化合物 ( l) 一 ( 5) 对人结肠癌
(H -T 29 )细胞和人胃癌( S G C 一79 01 )细胞增殖有不同程度的抑制作用 。
1 仪器 、 材料与试剂
人结肠癌 (H -T 29 )细胞 、 人胃癌 ( S G C 一 79 01 )细胞从中南大学肿瘤
研究所引进 。 所有化学试剂购自百灵威化学技术有限公司 , 均为分析
纯试剂 。 熔点用 X 一 5显微熔点测定仪测定 , 温度未校正 。 I H N M R谱
用 B r u k e r (4 0 0M H z )核磁共振仪测定 , T M S作内标 。 I R谱用 S h im a d z u
I R
一
4 4 0型红外分光光度仪测定 。 吸光度用iB o 一 eT k宝特E L x 一 80 型酶标
仪测定。 柱层析用硅胶 G购自青岛海洋化工厂 。
2 提取和分离
我们参考王倩等 8[] 的方法 , 取 自然干燥的栗柄金粉荻全草 5 k g ,
粉碎后用 95 %的乙醇加热回流提取3次 , 每次4 h 。 提取液减压浓缩得
基金项 目 : 国家教育部重点项 目 (课题编号 : 2 0 8 0 9 )
*通讯作者 : 压一二 a 一] : pha r 二 a e y n h u@ s o hU . C o川
*通讯作者 : 压一二 a 一] : pha r 二 a e y n h u@ s o hU . C o川
浸膏 , 将浸膏以水混悬 , 依次用水饱和的石油醚、 乙酸乙酚和正丁
醇萃取 。 取乙酸乙酚提取物经硅胶柱色谱反复梯度洗脱 , 得化合物 1
(2 9m g )
、
2 ( 3 2m g )
、
3 ( 2 7m g )
、
4 ( 16m g )和5 ( 2 3 l l m g ) 。
3 结构鉴定
化合物 ( l ) : 黄色针状结晶 ( M e O H ) , m . p . 3 4 4 一 3 4 6 ℃ ;
`H 一 N M R (D M s o
一
d 6 6 p pm )
: 12
.
0 5 ( I H
, S
)
,
7
.
9 2 (Z H
,
d
,
J一 8
.
S H z )
,
6
.
9 2 (ZH
,
d
,
J一 8
.
S H z )
,
6
.
7 7 (H
, s
)
,
6
.
4 8 ( I H
,
d
,
J一 2
.
OH z )
,
6
.
19
(l H
,
d
,
J一 2
.
OH z)
。 以上光谱数据与文献 9[] 报道的芹菜素基本一致 。
化合物 ( 2 ) : 黄色针状结晶 ( M e O H ) , m . p . 1 6 6 一 1 6 7 ℃ ;
I H
一
N M R ( D M S O
一
d 6 6 P Pm )
: 1 2
.
8 0 5 ( I H
, s
)
,
8
.
0 9
一
8
.
0 7 (ZH
,
m )
,
7
.
5 9
一
7
.
5 7 ( 3 H
,
m )
,
7
.
0 3 ( I H
, s
)
,
6
.
7 9 ( I H
,
d
,
J一 2
.
4 生 ) , 6 . 3 8 ( I H ,
d
,
J一 2
.
4 H z)
,
3
.
86 (3 H
, S
)
。 以上光谱数据与文献 l0[ ]报道的7 一甲氧基白
杨素基本一致 。
化合物 ( 3 ) : 黄色无定形粉末 (M e O H ) , m . p . 3 3 4 一 3 3 6 ℃ ;
I H
一
N M R (C D
3 O D 6 P P m )
: 7
.
5 5 ( I H
,
d
,
J一 8
.
OH z )
,
7
.
3 2 ( I H
, s
)
,
6
.
8 3 ( I H
,
d
,
J一 8
.
OH z )
,
6
.
7 0 ( I H
, s
)
,
6
.
12 2 ( I H
,
d
,
J一 l
.
6 H z )
,
6
.
05 ( I H
,
d
,
J一 1
.
6 H z)
。 以上光谱数据与文献 l[ ]报道的木犀草素基本
一致 。
化合物 ( 4 ) : 黄色针状结晶 (M e O H ) , m . p . 2 5 9一2 6 1℃ ; I R o m ax
(
e m
一 ` , 朋 r ) : 3 3 9 2 , 3 17 0 , 1 6 4 9 , 1 5 7 5 , 14 8 0 , 1 4 2 6 。 以上数据与文
献 l2[ ]报道的3 , 7一二甲氧基榭皮黄素基本一致 。
化合物 ( s ) : 白色针状结晶(M e O H ) , m . p . 2 7 9 一 2 8 0℃ ; I R o m a
(
e m
一 ` , 朋 r ) : 3 4 2 1 , 3 3 6 5 , 1 6 5 5 , 16 3 2 , 1 5 4 4 , 1 5 0 0 , 14 5 0 。 以上数
据和文献 5[] 报道 的金粉荻素(on y ch i n) 一致 ; T L c 检查 , R植与标准品
相同。
4 M下下法检测抗癌活性
人胃癌 (S G c 一 79 01 )细胞 、 人结肠癌(H -T 29 )细胞从中南大学肿瘤
研究所引进 , 培养于含体积分数为 10 %热灭活小牛血清的R P M I一 1 6 4 0
DOI : 10. 15912 /j . cnki . gocm. 2012. 27. 073
· 实验研究 · “ 5
三种体温计测量大鼠体温的比较研究
李飞艳 * 杜 给 曹 娴 胡 亮
(湖南中医药高等专科学校 , 湖南 株洲41 2 0 12 )
【摘要】 目的 寻求一种简易 、 可靠的测量实验动物体温的方法 。 方法 分别 用水银体温计 、 非接触性 红外测温仪计 、 电子体温计光后 对 同
一批大 鼠进行肛温测量 , 并比较非接触性红外测温仪在 sc m 、 10c m 、 12 c m 三个不同测量距离所测量的体温 变化 。 结果 非接触性红外测
温仪在三个不 同距离所测的肛 温值非常接近 , 无统计学差异 (P > 0 . 0 5) 。 红外测温仪计 与水银体温计所测体温有显著性差异 (P < 0 . 0 5) ,
平均温差为 3 . 37 口c ; 电子体温计与水银体温计相 比无统计学差异 (P > 0 .05 ) 。 结论 电子体温计所测温度值与传统水银温度计相符 ; 红外
测温仪快速 , 且在其规定测量距 离范围受距离影响很小 , 但在大量测量前 , 需预试 , 找出与水银温度计的温差补偿值 。 非接触性红外测温
仪 与电子体温计是测量实验动物体温较理 想的方法 。
【关键词】非接触性红外测温仪 ; 电子体温计 ; 水银体温计 ; 大 鼠 ; 体温
中图分类号 : R3 3 9 . 6 文献标识码 : B 文章编号 : 1 6 7 1一 8 1 9 4 ( 2 0 1 2 ) 2 7一 0 4 5 5一 0 2
目前 , 测量实验动物体温的体温计先后出现了水银体温计、 电子
墓金项 目 : 湖南省大学生研究性学习和创新性实验计划项 目 (2 01 05 20)
,指导老师 :
体温计 、 非接触性红外测温仪三种 l[ 一 6] , 水银体温计虽然结果稳定、 可
靠 , 却存在许多不足 , 如测温时间长 , 读取数据困难 , 每次使用前需
将水银柱甩至水银泡 中 , 稍有不慎就会损坏温度计 , 飞出玻璃碎片以
及汞 , 使得测量工作复杂而又危险。 电子体温计相比水银体温计测量
培养基 中 , 在体积分数为 5% C O Z的培养箱内培养传代 , 实验取对数生
长期细胞 , 在96 孔培养板中进行。 每孔加人 10 0 尽 L单细胞悬液 (约2 义
10 4个细胞 ) ; 并加人以培养基稀释的药物 1 0 0 o L , 同时设置阳性对照
组 ( 5 一氟尿崛陡浓度为0 . 25 尽m ol / )L , 溶媒对照组 (加体积分数为0 . 0 02
D M S O ) 及调零组 (仅加等量的 PB S液) , 每组 6孔 , 二氧化碳培养箱培
养48 h , 实验组及对照组每孔加人 20 尽 L M T T液( 5 9 /)L , 调零组加人
无血清 PR M I一 1 6 40 培养基 , 混匀 , 继续培养4一6 h , 1 0 0 0 r/ m in 离心 10
m in后吸除上清液 , 每孔加人 10 0 尽 L D M S O溶液 , 震荡 l o m in , 使紫
蓝色沉淀充分溶解 , E L x 一 80 型酶标仪 , 用调零孔校正零点 , 以57 0
n m波长测定A值 。 以药物浓度为横坐标 , 以细胞抑制率为纵坐标 , 绘
制细胞增殖抑制曲线 , 并测定药物半数抑制浓度 (I c 5 0) l[ 3 ]。 结果显示
化合物 l 、 2 、 3 、 4 、 5对人胃癌 ( S G C 一 7 9 0 1)细胞 、 人结肠癌( H-T 2 9 )细
胞增殖具有不同程度的抑制作用 (表 l) , 具有进一步开发价值 。
表 l 化合物 ( l 升( 5 )对 H -T 2 9和 S G C一 7 9 0 1细胞增殖的影响
C o m P o un d
IC
S。
( 林m o l / L )
H -T 29 S G C
一
7 9 0 1
2
.
13 7
.
5 2
2 3
.
0 8 7
.
0 5
3 2
.
2 1
.
9 9
4 4
.
6 9 3
.
6 2
5 2
.
7 6 2
.
0 1
5
一
F lu o r o u r a e i l 9
.
5 5
.
4 3
5 讨 论
通过采用反复柱层析的方法 , 我们从栗柄金粉荻全草中提取分离
得到了 5种黄酮类化合物 。 本研究结果表明从栗柄金粉荻全草中提取
得到的 5种黄酮类化合物对人胃癌 (S G C 一 79 01 )细胞 、 人结肠癌 (H -T 29 )
细胞增殖具有不同程度的抑制作用 ; 其中化合物 1 、 2 、 3 、 4 、 5对人结
肠癌 (H -T 29 )细胞增殖的抑制作用强于 5 一F U , 化合物3 、 4 、 5对人胃癌
(S GC
一
79 01 )细胞增殖的抑制作用强于5一 FU 。 提示从栗柄金粉荻全草中提
取分离得到的黄酮类化合物可以作为具有抗癌活性的先导化合物。
参考文献
【l] 江苏新医学院.中药大辞典【M」上海上海科学技术出版社 , 2 0 01 .
2[] 江苏省植物研究所 .新华本草纲要 (第三册 )【M ] .上海上海科技出
版社 , 19 9 1: 6 6 1 .
3[] 国家医药管理局中草药情报中心站 .植物药有效成分手册【M ] .北
京 :人民卫生出版社 , 19 8:6 6 81 .
4[ ] 徐阳炎, 郑兴 ,朱炳阳 ,等 .栗柄金粉藏粗提物对家兔急性敌百虫中
毒的解救作用 [J ] .南华大学学报 , 2 0 0 2 , 3 0 ( 3 ): 2 2 4 一2 2 5 .
5[ 」 Xu Y L ,uK b o 工M a Y B
.
A cy t
们 t们 x o n va ~
n e
gl yc
o is d e fro m o
们; ℃hi u m
Jap
o n ie u m
.
S tr uc t u re o f o 们; ℃ h in [J ]
.
Ph ; to e h e m ist 以 19 9 3, 3 3 (2 ): 5 10 一5 11 .
6[] 吴八郑兴 ,刘运美 ,等 .金粉藏素的研究进展【J] .中外 医学研究 ,
2 0 12
,
10 ( 1 0 )
: 1 50
一
1 5 1
7[] 朱沛沛,李宁家梁晶,等 .黄酮类化合物的组分及生物活性研究进
展 [J ] .饮料工业 , 2 0 1 2 , 15 ( 3 ): 13 一 15 .
8[ ] 王倩 ,常丽新 ,唐红梅 .黄酮类化台物的提取分离及其生物活性研
究进展 [J ].河北理工大学学报 , 2 0 1 1, 3 3 ( l ): 11 0 一1 1 5 .
9[ ] 滑艳 ,汪汉卿 .白茎绢篙黄酮类化合物的研究【月 .中国中药杂
志 , 2 0 0 6 , 3 1( 1 0 ): 8 2 9 一 82 2 .
【10 ] 康帅涛 ,李晓东 ,许环军 ,等 .黄酮及其衍生物的高效台成和抗肿瘤
活吐 [J ].沈阳药科大学学报, 2 0 11, 2 8 ( 1 1) : 8 62 一 8 6 7 .
【1 ] 李明潺 ,唐生安 ,段宏泉 .野堆尾金粉藏化学成分研究【J] .中草
药 , 2 0 10 , 4 1( 5 ): 6 8 5一 6 8 8 .
【12 」 郑兴,余麟 ,谢志忠 ,等 .栗柄金粉藏的黄酮成分 [J] .天然产物研究
与汗发 , 2 0 0 0 , 12 ( 5 ) : 4 2 一 4 5 .
【13 ] 鲁迎年 ,王秋波 ,吴虹 . M T T比色法在测定化疗药物敏感实验中
的条件选择 [J ]青岛医学院报 , 19 9 7 , 9 (3 ) : 2 2 4 一2 2 6 .