全 文 ：李宇翔，申爱丽，李清禄．楮头红皂苷的抗氧化活性［J］．亚热带农业研究，2016，12(2):93 － 96．
LI Yuxiang，SHEN Aili，LI Qinglu． Study on anti-oxidant activity of saponins from Sarcopyramis nepalensis Wall［J］． Subtropical Agriculture Ｒe-
search，2016，12(2) :93 － 96．
收稿日期:2015 － 07 － 25
基金项目:福建省自然科学基金(2013J01360)。
作者简介:李宇翔(1987—)，男，硕士。研究方向:药物分析及药理。通讯作者李清禄(1957—)，男，教授。研究方向:药物化学。Email:
lql3388@ 126． com。
楮头红皂苷的抗氧化活性
李宇翔1，申爱丽2，李清禄2
(1．福建省疾病控制中心，福建 福州 350002;2．福建农林大学动物药物工程实验室，福建 福州 350002)
摘要:通过测定楮头红皂苷的总还原力、对超氧阴离子(O－·2 )的清除率以及对脂质体过氧化的抑制率来探讨其抗氧化能
力。结果表明，楮头红皂苷具有较强的还原能力，显著降低 O－·2 自由基的活性和抑制脂质体过氧化，其抗氧化活性与浓度
之间均有良好的量效关系，具有较强的体外抗氧化活性。
关键词:楮头红;皂苷;抗氧化
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标识码:A 文章编号:1673-0925(2016)02-0093-04
DOI:10． 13321 / j． cnki． subtrop． agric． res． 2016． 02． 004
Study on anti-oxidant activity of saponins from Sarcopyramis nepalensis Wall
LI Yuxiang1，SHEN Aili2，LI Qinglu2
(1． Fujian Center of Disease Control and Prevention，Fuzhou，Fujian 350002，China;2． Engineering Laboratory of Animal
Pharmaceuticals，Fujian Agriculture and Forestry University，Fuzhou，Fujian 350002，China)
Abstract:To study the antioxidant of saponins of Sarcopyramis nepalensis Wall in vitro，the total antioxidant capacity of saponins
from S． nepalensis Wall was determined by optimized ferricyanide /prussian blue method． The superoxide anion radical scavenging of
saponins was observed in the ways of pyrogallol oxidation systems，lipid peroxidation by means of 2-thiobarbituric acid (TBA)． The
saponins from S． nepalensis Wall had an effective antioxidant capacity as well as the power of reducing the activity of free radicals O －·2
and the capable of inhibiting lipid peroxidation，and had a good dose-effect relationship between the antioxidant activity and its con-
centration． It has been concluded that saponins from S． nepalensis Wall showed a certain extent of antioxidant effect in vitro．
Key words:Sarcopyramis nepalensis Wall;saponins;anti-oxidant
活性氧自由基(reactive oxide species，ＲOS)是生物氧化代谢产物，也是有氧生命和新陈代谢的重要组成部
分。正常的生理状态下，体内 ＲOS生成系统和内源性清除 ＲOS的抗氧化系统处于动态平衡。由于某些因素如
吸烟、辐射、环境污染等诱导，使体内 ＲOS生成过多或清除 ＲOS能力下降，体内氧化增强系统与抗氧化系统之间
的平衡向氧化增强方向倾斜，导致体内氧化应激，造成 ＲOS过度累积而引起蛋白质、DNA等生物大分子损伤，从
而产生各种疾病，如中风、肺气肿、炎症、老年性痴呆、帕金森氏病、白内障、糖尿病、动脉粥样硬化等［1 －2］。ＲOS
主要包括超氧阴离子(O－·2 )、羟自由基(·OH)、过氧化氢(H2O2)、脂质过氧化物。
抗氧化剂是指能够延缓衰老，使自由基失去活性的化合物。清除自由基和防止脂质过氧化是抗氧化
活性的两种特性。目前用于医疗和食品领域的多是合成抗氧化剂，如 2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚(2，6-Di-
tert-butyl-4-methylphenol，BHT)和丁基羟基茴香醚(butyl hydroxyanisole，BHA)，但两者对生物体均有一定
亚热带农业研究
Subtropical Agriculture Ｒesearch
第 12 卷 第 2 期
2016 年 5 月
的毒副作用。因此，从天然产物如中草药中寻找天然、高效、低毒的抗氧化剂已成为研究热点。近年研究
发现，中药材中的皂苷成分(如栀子总皂苷［3］、红景天苷［4］、灵芝三萜皂苷［5］和重楼皂苷［6］等)具有抗氧化
活性，可清除自由基，增强超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (glutathione
peroxidase，GSH-Px)的活性，降低丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量从而抑制机体内脂质过氧化［7］。
楮头红是一种天然药用植物，主要分布于我国的福建、台湾、四川、江西、湖北等地，具有清热解毒、保
肝护肝、抗肝炎病毒等功效，在福建被广泛用于治疗肺热咳嗽、急慢性肝炎及各种炎症［8 － 10］。本课题组研
究发现，楮头红含皂苷类物质。本试验采用体外测定楮头红皂苷的还原力、清除 O－·2 自由基及抑制脂质过
氧化的能力，为其临床应用研究提供依据。
1 材料与方法
1． 1 材料及试剂
楮头红皂苷，褐色粉末，经泡沫试验、乙酸酐—硫酸溶液反应和三氯乙酸反应定性检验确认为皂苷类
物质，由福建农林大学福建省动物药物工程实验室提供。
磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、铁氰化钾、三氯乙酸、FeCl3、BHT、铁氰化钾、三羟甲基氨基甲烷［tris
(hydroxymethyl)methyl aminomethane，THAM］、邻苯三酚、乙二胺四乙酸、HCl、卵磷脂、硫代巴比妥酸(2-
Thiobarbituric acid，TBA)、Vc，均为 AＲ级及以上，购于国药集团化学试剂有限公司。
1． 2 方法
1． 2． 1 皂苷水溶液的制备 精确称取 25 mg楮头红皂苷粉末，用蒸馏水溶解，定容于 50 mL容量瓶中，配
置成 0． 5 mg·mL －1皂苷储备液。准确移取 0． 4、0． 8、1． 2、1． 6、2． 0 mL储备液于 10 mL容量瓶中，定容，配
制成浓度为 0． 02、0． 04、0． 06、0． 08、0． 1 mg·mL －1的皂苷工作液，备用。
1． 2． 2 BHT溶液的制备 准确称取 50 mg BHT，用无水乙醇溶解，定容于 50 mL容量瓶中，配制成 1 mg·
mL －1的 BHT储备液。准确吸取 0． 2、0． 4、0． 6、0． 8、1． 0 mL储备液于 10 mL 容量瓶中定容，配置成浓度为
0． 02、0． 04、0． 06、0． 08、0． 1 mg·mL －1的 BHT工作液，备用。
1． 2． 3 抗氧化能力的测定 采用普鲁士兰法测定楮头红皂苷的总还原力［11］，以 BHT为对照(CK)。取 2
mL不同浓度(0． 00、0． 02、0． 04、0． 06、0． 08、0． 10 mg·mL －1)的楮头红皂苷和 BHT 溶液(二者浓度相同)
于具塞试管中，分别加入 2． 0 mL 0． 2 mol·L －1磷酸缓冲溶液(pH 6． 6 )及 1%(质量比)铁氰化钾溶液，50
℃水浴 20 min后冰浴迅速冷却，加入 2． 0 mL 10%(质量比)三氯乙酸溶液，摇匀，离心(3 000 r·min －1，10
min)。取上清液2． 0 mL，加 2． 0 mL 双蒸水和 0． 5 mL 0． 1% (质量比)FeCl3，摇匀，反应 10 min 后，测定
D710 nm。
1． 2． 4 体外 O－·2 清除率的测定 采用邻苯三酚自氧化法测定楮头红皂苷对 O
－·
2 的清除率
［12］。在空白管
和测定管中依次加入 3． 0 mL 0． 05 mmol·L －1 Tris-HCl缓冲液(pH =8． 2)、45 μL 45 mmol·L －1邻苯三酚
(37 ℃预热)、蒸馏水和样液各 1． 0 mL，迅速摇匀，反应时间 5 min，测定每分钟的 D325 nm。分别测定加入样
品前后邻苯三酚每分钟光密度的增加率，计算邻苯三酚自氧化时反应速率及加入样品后的自氧化速率。
楮头红皂苷对 O－·2 的清除率的计算公式如下。
O－·2 清除率 /% =(△D0 /△t －△D1 /△t)/(△D0 /△t)× 100
式中，△D0 /△t为邻苯三酚自氧化反应速率;△D1 /△t为加入样品液后邻苯三酚自氧化速率。
1． 2． 5 脂质体抗氧化活性的测定 采用 TBA检测楮头红皂苷对脂质体过氧化的抑制率［1，13］。分别吸取
1． 0 mL卵黄悬液［600 mg卵磷脂溶于 60 mL 10 mmol·L －1磷酸缓冲液(pH 7． 4)中］、1． 0 mL 不同浓度
(0． 00、0． 02、0． 04、0． 06、0． 08、0． 10 mg·mL －1)的楮头红皂苷和 BHT溶液(CK)、1． 0 mL 0． 4 μmol·L －1
FeCl3 溶液、1． 0 mL 0． 4 μmol·L
－1 Vc溶液于具塞空白和样品试管中，摇匀，避光，于 37 ℃水浴 60 min。
各加入三氯乙酸—TBA—HCl混合液(15 g三氯乙酸、0． 37 g TBA、2． 1 mL HCl依次加入 100 mL水中)2． 0
·49· 亚 热 带 农 业 研 究 第 12 卷
mL，100 ℃水浴 15 min，迅速冷却，以 2 000 r·min －1离心 10 min，取上清液，测量 D532 nm。以样品对卵黄脂
蛋白脂质过氧化的抑制率(I)来表示样品的抗氧化活性能力。
I /% =(Dc － Ds)/Dc × 100。
式中，I表示抑制率;Dc 表示对照管的光密度;Ds 表示样品的光密度。
2 结果与分析
图 1 楮头红皂苷和 BHT总抗氧化力
Fig． 1 Total in vitro antioxidant of S． nepalensis saponins and BHT
2． 1 楮头红皂苷体外总抗氧化力
楮头红皂苷和 BHT体外总抗氧化力见图 1。由
图 1 可知，楮头红皂苷和 BHT 的总抗氧化力均随着
浓度的增加而提高，说明浓度和还原力之间呈现显
著的量效关系;当皂苷和 BHT的浓度相同时，楮头红
皂苷的还原力略低于 BHT。
2． 2 楮头红皂苷对 O－·2 自由基的清除率
反应 2、3、4、5 min时，邻苯三酚自氧化速率分别
为 0． 519 1、0． 368 5、0． 272 6、0． 249 1;加入不同浓度
的皂苷后，反应 2、3、4、5 min 时，邻苯三酚的自氧化
速率见表 1。由邻苯三酚自氧化速率和表 1 数据可计算出皂苷对 O－·2 自由基的清除率(表 2)。从表 2 可
以看出，楮头红皂苷具有清除 O－·2 的活性，随着皂苷浓度的增加，其体外清除 O
－·
2 自由基能力也不断增强，
其浓度与 O－·2 清除率间存在显著的量效关系。当皂苷浓度为 0． 5 mg·mL
－1时，对 O－·2 清除率为 59． 33%。
当皂苷浓度相同时，随着反应时间的增加，对 O－·2 清除率也有所提高。
表 1 楮头红皂苷对邻苯三酚自氧化速率的影响
Table 1 Effect of crude S． nepalensis saponins on pyrogallic oxidation
ρ皂苷
mg·mL －1
自氧化速率 /(△D325 nm·min －1)
2 min 3 min 4 min 5 min
0． 1 0． 507 4 0． 344 1 0． 253 0 0． 227 5
0． 2 0． 496 6 0． 336 3 0． 239 4 0． 216 0
0． 3 0． 486 3 0． 332 8 0． 220 6 0． 190 8
0． 4 0． 465 9 0． 305 8 0． 211 3 0． 171 5
0． 5 0． 432 5 0． 299 1 0． 195 1 0． 101 3
表 2 楮头红皂苷对 O－·2 的清除率
Table 2 Scavenging rate of S． nepalensis saponins to O －·2 free radical
ρ皂苷
mg·mL －1
清除率 /%
2 min 3 min 4 min 5 min
0． 1 2． 25 6． 62 7． 19 8． 67
0． 2 4． 33 8． 74 12． 18 13． 29
0． 3 6． 32 9． 69 19． 08 23． 40
0． 4 10． 25 17． 01 22． 49 31． 15
0． 5 16． 68 18． 83 28． 43 59． 33
图 2 楮头红皂苷和 BHT对脂质体过氧化的抑制率
Fig． 2 Antioxidant activity of S． nepalensis saponins and BHT
in a lecithin liposome system
2． 3 楮头红皂苷在卵磷脂脂质体中的抗氧化活性
由图 2 可知，在本试验的浓度范围内，皂苷对脂
质体氧化的抑制能力随着浓度的增加而提高，且浓
度与抑制率之间呈现量效关系。低浓度时(＜ 0． 2
mg·mL －1)皂苷对脂质体过氧化的抑制能力显著低
于 BHT;浓度在 0． 2 ～ 0． 4 mg·mL －1之间时，皂苷与
BHT对脂质体过氧化的抑制能力相差不大;当浓度
达到 0． 4 mg·mL －1后，皂苷的抑制能力高于 BHT。
3 讨论
邻苯三酚自氧化法操作简单、稳定性好、周期
短、重现性好且灵敏度高，被广泛用于测定对 O－·2 的清除能力。邻苯三酚在碱性环境下容易发生自氧化，
生成 O－·2 和一种在 325 nm处有特征吸收峰的中间产物。当加入 O
－·
2 清除剂时，抑制 O
－·
2 的生成，邻苯三酚
·59·第 2 期 李宇翔等:楮头红皂苷的抗氧化活性
自氧化速率减慢，中间物的生成减少，在 325 nm处的吸收也随着减弱［14］。因此，可以通过测定 D325 nm来判
定清除剂的清除能力。
TBA反应机制是不饱和脂肪酸氧化分解后生成 MDA及其类似物，在受热和酸性环境下，能够与 TBA
试剂发生化学反应，生成一种在 532 nm 处有最大吸收值的粉红色的化合物，即硫代巴比妥酸反应物质
(TBA reactive substance，TBAＲS)［15］。在 Vc的作用下，FeCl3 促进卵磷脂脂质体的脂类氧化。当加入抗氧
化剂后，能抑制脂质体中 TBAＲS的形成，随着抗氧化剂浓度增加，抑制作用也增强，在 532 nm处的吸收也
减弱。
本试验采用 3 种体外抗氧化试验模型来评价楮头红皂苷的抗氧化性。结果表明，楮头红皂苷有较强
的还原能力，能够抑制脂质体过氧化，有清除 O－·2 自由基的活性。而且在各个体系中，楮头红皂苷的抗氧
化活性与其浓度之间均有良好的量效关系。因此，楮头红皂苷是一种良好的天然抗氧化剂。
参考文献
［1］赵保路．氧自由基和天然抗氧化剂［M］．北京:科学出版社，1999:96．
［2］DOＲMAN H J D，KO爦AＲ M，KAHLOS K，et al． Antioxidant properties and composition of aqueous extracts from Mentha spe-
cies，hybrids，varieties，and cultivars［J］． Journal of Agricultural and Food Chemistry，2003，51(16):4563 － 4569．
［3］苏伟，赵利，刘建涛，等．栀子总皂苷抗氧化能力的研究［J］．食品科学，2009，30(15):75 － 77．
［4］沈干，金钰，陈德监，等．人参皂苷 Ｒb1 与红景天苷对抗皮肤光老化作用的研究［J］．东南大学学报(医学版)，2010，29
(3) :336 － 339．
［5］崔月花，章克昌．灵芝三萜皂苷(GCTL1)的体外抗氧化作用［J］．食品科学，2010，31(19):49 － 53．
［6］高云涛，杨利荣，杨益林，等．重楼提取物体外清除活性氧及抗氧化作用研究［J］．中成药，2007，29(2):195 － 198．
［7］孙耀贵，程佳，温伟业．党参总皂苷抗氧化作用研究［J］．中兽医医药杂志，2010(3):37 － 39．
［8］廖梅，张锦文，张勇慧．楮头红保肝护肝活性部位筛选［J］．医药导报，2010，29(5):571 － 572．
［9］江苏新医学院．中药大词典(下册)［M］．上海:上海人民出版社，1997:2290．
［10］陈桂菲，叶淑玲．风柜斗草药用探讨［J］．时珍国医国药，2000，11(2):129 － 130．
［11］赵艳红，李建科，李国秀．天然抗氧化物体外活性评价方法的优选与优化［J］．食品科学，2008，29(6):64 － 69．
［12］玄红专，桑青，麻建军．邻苯三酚自氧化法测定不同蜂产品抗氧化活性的研究［J］．食品科技，2008(4):137 － 139．
［13］姜平平，吕晓玲，姚秀玲，等．紫心甘薯花色苷抗氧化活性体外实验研究［J］．中国食品添加剂，2002(6):8 － 11．
［14］陈欣欣，许时婴．黑莓渣提取物中多酚类化合物抗氧化活性的研究［J］．食品工业，2007(3):3 － 6．
［15］张梦寒，徐幸莲，周光宏．肌肽对脂质体的抗氧化作用［J］．食品科学，2002，23(7):52 － 55．
(责任编辑:张云燕)
·69· 亚 热 带 农 业 研 究 第 12 卷