全 文 ：DAXXK可通过提高缺血时脑组织中 SOD等抗氧化酶的活性 ,清
除氧自由基 , 抑制脑组织局部脂质过氧化反应 , 减轻氧自由基对
脑组织的损害 , 从而对脑缺血损伤有保护作用 [ 5 , 6] 。
在脑缺血早期 , 局部神经元蛋白合成停止 ,神经元发生去极
化 , Ca2+内流增加 , 从而引起脑细胞内钙超载 , 并使 Na+ -K+ -
ATP酶的活性降低 , 导致氧自由基显著增多。而缺血再灌注后加
剧大量 Ca2+内流 , 细胞外 Ca2+浓度降低 , 脑血管阻力增加 , 进一
步加重脑水肿及继发的脑血管损伤。实验结果表明 , DAXXK可
显著降低脑含水量 , 说明 DAXXK可明显减轻脑水肿 , 可能是通
过抑制细胞内钙超载 , 抑制 Ca2+在脑组织内聚集 ,改善脑的循环
功能及能量代谢过程 ,提高 Na+-K+-ATP酶的活性 , 保证脑内
离子稳定 , 防止脑缺血引起的损伤 , 具有钙离子拮抗作用 [ 7] 。
综上所述 , DAXXK在脑缺血再灌注损伤过程中 ,通过清除氧
自由基 、抗氧化 、减少脂质过氧化 、阻断 Ca2+内流等作用 , 来减轻
脑细胞的损伤 , 对脑组织细胞起保护作用。这为地奥心血康在缺
血性脑病的临床用药提供了理论依据。
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收稿日期:2008-02-29;　修订日期:2008-08-20
基金项目:江西省亚热带植物资源保护与利用重点实验室开放基金资助
(No.2004-2)
作者简介:朱建华(1961-),女(汉族),江西高安人 ,现任宜春市中医院中
医师 ,主要从事中医临床及中药研究工作.
＊通讯作者简介:朱　笃(1971-), 男(汉族),江西高安人 , 现任江西师范
大学生命科学学院教授 ,博士学位 ,主要从事天然产物研究与开发工作.
高效液相色谱法测定山香圆中熊果酸含量
朱建华 1 , 张志斌2 , 颜日明 2 , 曾庆桂2 , 朱　笃 2＊
(1.宜春市中医院 ,江西 宜春　336000;　2.江西师范大学生命科学学院 ,江西 南昌　330022)
摘要:目的 采用高效液相色谱(HPLC)测定山香圆中熊果酸的含量。方法 色谱条件:HypersiODSC18色谱柱(4.6 mm
×250mm;5 μm);流动相为乙腈∶甲醇(体积比为 68∶32),检测波长 210 nm,流动相流速 1.0 ml/min, 柱温 25℃。结果
熊果酸检测的线性范围 0.50 ～ 10.05mg(R2 =0.998 7),平均回收率为 99.28%, 相对标准偏差(RSD)为 1.96%(n=5)。
结论 该方法准确 、快捷 、灵敏 、重复性好 , 可作为山香圆药材及相关制剂质量控制的一个有效方法。
关键词:高效液相色谱;　山香圆;　熊果酸;　含量测定
中图分类号:R284.1　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2009)04-0827-02
　　山香圆 TurpiniaargutaSeen为省沽油科属植物 , 别名千打
捶 、七寸钉 、蛾子药 、蛇舌草 、白花蛇舌草等 , 主产于江西 、福建 、广
东 、广西等省 ,性寒味甘苦 , 具有清热解毒 、利尿消肿的功效 [ 1] 。
山香圆叶中主要有效成分为熊果酸 、齐墩果酸 、对香豆酸 、肉豆蔻
酸等 [ 2～ 5] 。熊果酸(ursolicacid, UA)又名乌索酸 、乌苏酸 , 是存
在于天然植物中的一种三萜类化合物(图 1), 相对分子质量为
456, 具有广泛的生物学效应。体外对 G+和 G-菌及酵母菌均有
抗菌活性;有抗糖尿病 、抗溃疡及降低血脂的作用。 同时具有抗
致癌 、抗促癌 ,诱导 F9畸胎癌细胞分化和抗血管生成作用 , 是一
种极佳的灭毒高效新型抗癌药物 ,另外还具有明显抗氧化功能 ,
并且对中枢神经系统有明显的安定与降温作用 ,因而被广泛地用
作医药和化妆品原料 ,日益受到重视 [ 6 ～ 8] 。熊果酸测定方法包括
薄层扫描法 [ 9 ～12] 、高效液相色谱法等 [ 13～ 15] 。 目前 , 关于山香圆
中熊果酸含量分析方法的报道较少 , 仅见毛友昌等 [ 11] 、魏福有
等 [ 12]采用薄层色谱法对山香圆叶和山香圆含片中熊果酸含量进
行定量分析。本文建立了山香圆熊果酸含量的高效液相色谱测
定法 , 结果表明此方法操作简便 ,准确性高 ,适用于含熊果酸药材
及其制剂的质量控制检测。
1　器材与方法
1.1　材料与仪器 样品:山香圆叶由南昌华依制药有限公司提
供;熊果酸对照品:购于中国药品生物制品检定所 , 批号
742.200111;甲醇 、乙腈为色谱纯 , 其余试剂均为分析纯;HP1050
高效液相色谱仪 ,配有 HP1050色谱工作站 、真空脱气机 、手动进
样器 、柱温箱。
图 1　熊果酸的化学结构式
1.2　对照品储备液的制备 称取熊果酸标准样品 25.125 mg, 置
于 25ml容量瓶瓶中 ,甲醇溶解并稀释至刻度 , 得含熊果酸 1.005
mg/ml的标准溶液。精密移取熊果酸对照品储备液 0.5, 2, 4, 8,
10 ml, 分别置于 10 ml容量瓶中。 甲醇稀释至刻度 ,配制成一系
列浓度的标准工作液。
1.3　样品溶液的制备 将山香圆样品粉碎 , 过 60目筛 , 80℃干燥
至恒重。精密称取 2.0 g,置索氏提取器中 ,用甲醇适量加热回流
提取 6 h,提取液用 0.45 μm的微孔滤膜过滤 , 浓缩并定容至 25
ml容量瓶中 ,滤液作为样品溶液。
1.4　色谱条件 HypersiODSC18色谱柱(4.6 mm×250 mm;5μm);流动相为乙腈∶甲醇(体积比为 68∶32);检测波长 210
nm;流动相流速 1.0ml/min;柱温为 25℃;进样量为 10 ml。
2　结果
2.1　色谱条件的选择 经紫外光谱扫描 , 熊果酸的最大吸收波长
为 210 nm。故本实验采用 210 nm作为检测波长。 在 “ 1.4”项色
谱条件下 ,熊果酸标准品和样品溶液的保留时间为 32 min左右 ,
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峰形良好 , 熊果酸与齐墩果酸分离效果良好(见图 2 ～ 3)。
图 2　标准品溶液 HPLC谱图
图 3　样品溶液 HPLC谱图
2.2　标准曲线的绘制 取按 “ 1.2”项方法制备的储备液进行标
准曲线的制备。每个对照品储备液进样 10 μl, 测定峰面积。以
峰面积值(Y)为纵坐标 , 其对应进样质量浓度(X)为横坐标 , 进
行回归计算 , 得线性方程为:Y=102.05X-0.796, R2 =0.998 7。
表明熊果酸的进样量在 0.50 ～ 10.05mg范围内线性良好。
2.3　精密度实验 取熊果酸对照品溶液(0.1005 mg/ml)10 ml,
重复进样 5次 , 记录峰面积 ,得其相对标准偏差 RSD为 1.44%,
说明仪器的精密度良好。
2.4　稳定性实验 对同一熊果酸对照品溶液 , 在 0, 2, 4, 6, 8, 10 h
各进样 3次 , 10 ml/次 , 记录峰面积值 ,其 RSD为 0.995%,表明样
品溶液在 10h内稳定性良好。
2.5　重复性实验 精密称取 2.0 g同一批山香圆样品 5份 , 按
“ 1.3”项所述方法制备样品溶液 , 同日内测定 5次 , 进样 10 ml/
次 , 测得峰面积的日内精密度(以 RSD计)为 1.89%,表明该方法
的重复性良好。
2.6　加样回收率实验 精密称取已知含量的同一批次样品 5份 ,
每份样品约 2.5 g,置于 5个锥形瓶中 , 精密加入熊果酸对照品溶
液 1 ml(1.005 mg/ml)。按 “ 1.3”项所述方法制备样品溶液 , 得
到相同浓度溶液 5份。按 “ 1.4”项所述色谱条件分析 ,计算加样
回收率 , 得熊果酸平均回收率为 99.28%, RSD=1.96%。结果见
表 1。
表 1　熊果酸回收率实验结果
样品中含量
C/mg· ml-1
加入量
C/mg· ml-1
实测值
C/mg· ml-1
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
0.100 2 0.100 5 0.198 7 98.01
0.101 5 0.100 5 0.203 9 101.82
0.104 5 0.100 5 0.205 3 99.95 99.28 1.96
0.103 0 0.100 5 0.199 1 95.67
0.103 9 0.100 5 0.204 9 100.94
　　n=5
2.7　样品含量测定 取 “ 1.1”项南昌华依制药有限公司提供的
山香圆叶 , 按 “ 1.3”项所述方法制备样品溶液 , 取同一批号样品
溶液 3份 , 在上述色谱条件下直接进样 , 10 μl/次 , 每个样品进样
3次 ,取平均值 , 按回归方程计算得熊果酸的含量为 1.025 mg/g。
结果见表 2。
表 2　山香圆叶中熊果酸的含量
样品
编号
样品量
m/g
熊果酸测定
值 C/mg· g-1
平均值
C/mg· g-1
1 2.017 1.039
2 2.008 1.012 1.025
3 1.986 1.024
　　n=3
3　讨论
3.1　提取条件的选择 根据熊果酸的溶解性能 , 选择甲醇 、无水
乙醇 、醋酸乙酯 、氯仿作为溶剂 ,对样品进行索氏提取处理 ,比较
了不同提取溶剂对提取效果的影响。结果显示采用甲醇作为溶
剂提取率最高 , 且甲醇提取液色谱图色谱峰分离较好 , 对熊果酸
的测定亦无干扰。因此选用甲醇作为提取溶剂。
3.2　流动相的选择 根据文献报道 [ 14 ～ 16] , 选择甲醇 -水(90∶
10)、甲醇 -0.1%磷酸水溶液 、乙腈 -水(75∶25), 甲醇 -乙腈
-水(64∶20∶16)、甲醇 -乙腈(68∶32)等不同流动相进行测
定。结果表明甲醇 -乙腈(68∶32)作为流动相可得到分散度好
的色谱峰 ,供式品中熊果酸与齐墩果酸的分离度也较高。
采用高效液相色谱法对熊果酸含量进行分析 ,对色谱条件进
行优化选择 , 在最佳条件下测定熊果酸标准品 , 作标准曲线并对
提取的熊果酸样品进行了含量测定。分析结果表明 ,此法简单快
速 、高效灵敏 、重复性好 , 可用于含熊果酸药材及其制剂的质量
控制。
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