全 文 ：JTCVM
年第 1 期2011
鹅绒藤提取物对亚硝化反应抑制作用研究
林 敏，马志强，吴冬青，安红钢，任雪峰
（河西学院化学系西部资源环境化学重点实验室，甘肃张掖 734000）
摘 要：考察鹅绒藤提取物对亚硝胺合成的阻断作用和对亚硝酸钠清除作用。采用 L9（33）
正交试验法提取鹅绒藤中的活性成分，选择最佳提取条件，并测定鹅绒藤提取物对亚硝胺合成
的阻断率和对亚硝酸钠的清除率。提取鹅绒藤中活性成分的最佳条件为:液固比（V∶W）为 10
（90%乙醇水溶液）∶1（鹅绒藤粉），40 ℃下提取 1.5 h，此活性提取物对亚硝胺合成最大阻断率
为 63.1%，对亚硝酸钠最大清除率为 62.3%。
关键词：鹅绒藤提取物；阻断；清除；亚硝酸钠；亚硝胺
中图分类号：S853.74 文献标识码：A 文章编号：1000- 6354（2011）01- 0036- 04
鹅绒藤属（Cynanchum）是萝摩科（Asclepiadace－
ae）中的大属，鹅绒藤（Cynanchum chinensis）为萝摩
科植物鹅绒藤的全草和果实，别名羊奶角角、牛皮
消。味苦性寒，具有祛风解毒、健胃止痛之功效，全
株具白色乳汁，治寻常性疣赘效果显著，鹅绒藤生
于灌木丛、路边、河畔或田埂上。产于甘肃文县、武
都、天水、武山、兰州、榆中、皋兰、白银、景泰、张
掖、民勤和武威 [1]。鹅绒藤在我国许多地区民间药
用由来已久，为地方性习惯用药。鹅绒藤属植物中
分离得到的天然化合物主要有街体昔、生物碱、苷
类、黄酮类、多糖、脂肪酸、磷脂、氨基酸及维生素
等，近年来研究较多的主要是街体昔和生物碱。目
前，国内外对鹅绒藤中含有的抗肿瘤成分研究日
趋完善[2]。在致癌物中，亚硝胺是最令人关注的一
类化学致癌物，它能引起人和动物的肝脏等多种
器官的恶性肿瘤[3]。其机理是亚硝胺在一系列酶的
作用下生成亲电子的烷基自由基，烷基自由基四
核酸烷化，引起细胞遗传突变，从而显示致癌性。
从防癌治癌角度考虑，阻断亚硝胺的合成，清除亚
硝胺或烷基自由基可达到防癌目的 [4，5]。笔者等以
此为出发点，通过体外模拟人体胃液的条件，探讨
鹅绒藤提取物抑制亚硝化反应活性物质的最佳提
取工艺条件，研究鹅绒藤提取物阻断亚硝胺合成及
清除亚硝酸盐的效果，为鹅绒藤的合理利用提供一
定的科学依据。
1 材料与方法
1.1 原料
鹅绒藤：甘肃河西学院校园内采集，经自然风
干、粉碎过 40目筛，备用。
1.2 主要试剂
乙醇；柠檬酸钠—盐酸缓冲液；亚硝酸钠；二甲
胺溶液；Na2CO3；ɑ-萘胺；对氨基苯磺酸；N-1－萘乙
二胺盐酸盐。以上试剂均为国产分析纯。
1.3 主要仪器
WFJ-2100型可见分光光度计（尤尼克上海仪
器有限公司）；ZF-4型紫外分析仪；SHB-Ⅲ循环水
式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；GB204
电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；DK-98-II
电热恒温水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司）；冷
凝回流装置；粉碎机等。
1.4 实验方法
1.4.1 提取方法
1.4.1.1 鹅绒藤浸提液提取的单因素实验 以鹅
绒藤为实验材料，用料液比 1∶10，以乙醇浓度、浸提
时间、水浴温度进行单因素实验。以鹅绒藤浸提液
中生料含量对亚硝酸根的清除效果为指标，所有实
验均重复 3次。
1.4.1.2 最佳提取条件 为了系统考察鹅绒藤防
癌活性物提取的最佳条件，选用了 L9（33）正交表进
收稿日期：2010- 08- 31
基金项目：甘肃省教育厅资助项目（编号 0509－02）；西部资源环
境化学重点实验室科研资助项目（编号 xz0603）
作者简介：林 敏（1967-），女，副教授，主要从事基础化学教学与
研究，E- mail: yangcf1@163.com。
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DOI:10.13823/j.cnki.jtcvm.2011.01.010
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行水浴试验，以得到的 9个提取样品对亚硝酸钠清
除率为考察指标，从而确定最佳提取条件。其中料
液比为 1∶10。
1.4.2 清除亚硝酸盐作用的测定[6-8] 亚硝酸盐在
弱酸性的条件下，能与氨基苯磺酸重氮化后，再
与 N -1-萘乙二胺盐酸盐偶合生成红色化合物。
分别取最佳条件的鹅绒藤提取液 1、2、3、4、5、6、
7、8、9、10 mL （相当于一浓度梯度）于 50 mL 容
量瓶中，加入 25 mL pH3.0 的柠檬酸钠盐酸缓冲
液，再加入 100 mg/kg NaNO2溶液 5 mL，用蒸馏
水定容至刻度，37 ℃恒温 1.5 h，然后各吸取 1 mL
反应液于小试管中，加入 0.4%（质量分数）对氨基
苯磺溶液 2 mL，0.2% （质量分数）N-1-萘乙二胺
盐酸盐溶液 2 mL，摇匀放置 15 min 后，用分光光
度计在波长为 540 nm 处测吸光度值，分别用相应
浓度相同用量的浸提剂做空白实验，最后计算清
除率。
清除率=（A0－Ax）/A0×100%
A0：加入相应浸提剂空白实验的吸光度值；Ax：
加入不同浓度提取液时的吸光度值。
1.4.3 阻断亚硝胺合成的测定[8-10] 在模拟人体胃液
的条件下，二甲胺与亚硝酸钠在 37 ℃条件下，可适
宜地生成二甲基亚硝胺，反应式如下:
（CH3）2NH＋NANO2 HCl （CH3）2N－N＝O＋HCl＋H2O
当向鹅绒藤提取物中依次加入二甲胺与亚硝
酸钠时，提取物优先同亚硝酸钠作用，使得二甲
胺不能与亚硝酸钠反应，达到阻止亚硝胺生成的
目的。据此可以比较相同条件下生成亚硝胺量的多
少来反映提取物阻断能力的强弱，生成亚硝胺量
少，提取物的阻断能力就强，反之则弱。
在紫外光照射下，二甲基亚硝胺可分解成二
甲基仲胺和亚硝酸根，反应式如下:
（CH3）2N-N=O+H2O 紫外线（CH3）2NH2++NO2-
亚硝酸根与对氨基苯磺酸重氮化后，再与 α-
萘胺偶合生成红色化合物。用分光光度计测出该化
合物的吸光度值可计算上述反应液中亚硝胺含量
的多少。
取提取物一定量于 50 mL容量瓶中，加入 pH
值 3.0 的柠檬酸钠-盐酸缓冲液 25 mL，1 mmol/L
NaNO2溶液 2.5 mL，1 mmol/L二甲胺溶液 2.5 mL，再
用蒸馏水定容至刻度，在 37 ℃下恒温 1.5 h，用移
液管吸取 1.0 mL上述含 NDMA（对亚硝胺）的反应
液加到小烧杯中，加入 0.5%（质量分数）Na2CO3溶
液 0.5 mL，于黑布遮盖的紫外分析仪上照 15 min，
紫外灯离液面 15 cm，后加 1%（质量分数）对氨基
苯磺酸溶液 1.5 mL，再加 0.1%（质量分数）ɑ-萘胺
1.5 mL，蒸馏水 0.5 mL，摇匀放置 15 min，用分光光
度计在 525 nm处测吸光度值（A）。分别用相应浓
度相同用量的浸提剂做空白试验，最后计算阻断
率:
阻断率=（A0-AX）/A0×100%
A0为加入对应浓度浸提剂空白样的吸光度值;
AX为加入各组提取液时的吸光度值。
2 结果与讨论
2.1 提取条件的单因素试验
2.1.1 提取时间对亚硝酸根清除率的影响 准确
称取鹅绒藤 1.000 0 g于 50 mL圆底烧瓶中，按料
液比 1∶10加入 90％乙醇作浸提剂，水浴加热下冷
凝回流 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 h，然后抽滤得提取
液。定容至 50 mL，得以生料量为浓度 0.02 g/mL的
浸提液，每次取浸提液 2 mL，用 1.4.1 方法测定其
清除率，结果见表 1。
表 1 提取时间对硝基清除率的影响
由表 1数据可知，随着提取时间的增加，浸提
液对亚硝酸根的清除率逐渐增加，当提取时间达到
1.5 h时，清除率达到最大，继续增加提取时间清除
率反而减小。因此，初步确定提取时间为 1.5 h。
2.1.2 浸提剂浓度对清除率的影响 准确称取鹅
绒藤 1.000 0 g于 50 mL圆底烧瓶中，按料液比 1∶10
加入不同浓度的乙醇作浸提剂，水浴加热，冷凝
回流 1.5 h，然后抽滤得提取液。定容至 50 mL，
得以生料量为浓度 0.02 g/mL 的提取液，每次取
浸提液 2 mL，用 1.4.1 方法测定其清除率，结果
序号 时间/h A0 Ax 清除率/%
1
2
3
4
5
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
0.480
0.458
0.441
0.468
0.517
0.717
0.719
0.720
0.719
0.718
33.2
36.3
38.6
34.9
28.1
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见表 2。
由表 2数据可知，随着乙醇浓度的增加，提取
物对硝基的清除率逐渐增加，但当乙醇浓度为 90%
时清除率最大，故本试验选择 90%乙醇浓度。
表 2 浸提剂浓度对提取物清除率的影响
2.1.3 浸提温度对清除率的影响 称取物料 1.000 g，
用 90%乙醇分别以室温、30、35、40、45 ℃水浴加热，
冷凝回流 1.5 h，然后抽滤得提取液。定容至 50 mL，
得以生料量为浓度 0.02 g/mL的提取液，每次取浸
提液 2 mL，用 1.4.1方法测定其清除率。结果如表
3。表明随着提取温度的升高清除率有所增加，当温
度超过 40 ℃时稍有下降，故试验选择提取温度为
40 ℃。
表 3 提取温度对提取物清除率的影响
2.2 L9（33）正交试验
为了系统考察鹅绒藤防癌活性物提取的最佳
条件，选用了 L9（33）正交表进行水浴试验，其中选
取的因素及水平见表 4，以测得的 9个提取样品对
亚硝酸钠清除率为考察指标，从而确定最佳提取条
件。
表 4 正交试验因素－水平
2.3 最佳提取条件
结果见表 5。
表 5 正交试验设计及结果
从表 5可知，最佳因素组合为 A3B2C3，即用
90%（质量分数）乙醇在 40 ℃下回流提取 1.5 h所
得的鹅绒藤浸提液对清除亚硝酸钠的效果最佳。极
差 R的数值直观反映出各因素对结果影响大小的
顺序为 A>C>B，A因素影响最大，B则最小。
2.4 鹅绒藤提取物清除亚硝酸盐的测定结果
在最佳提取条件下得浸提液，不同用量鹅绒藤
浸提液清除亚硝酸盐的测定结果见表 6。由表 6可
见，随着鹅绒藤浸提液用量的增多，对亚硝酸钠的
清除率增加。当浸提液用量在 0. 5-10 mL 时，对亚
硝酸钠的清除率先由 31.4%提高到 62.3%，后由
62.3%逐渐下降到 60.9%，此过程中最大突变出现
在 1-2 mL之间。最大阻断率为 62.3%，出现在用量
为 8 mL时。
表 6 不同用量的提取液对 NaNO2 的清除作用
2.5 鹅绒藤浸提液阻断亚硝胺的测定结果
不同用量鹅绒藤浸提液阻断亚硝胺合成的测
定结果见表 7。结果表明，浸提液对亚硝胺合成的
阻断作用随浓度的增加有增强的趋势，先增后减。
开始阻断率迅速上升，特别在加入 1-2 mL 浸提液
序号 浸提剂浓度/% A0 Ax 清除率/%
1
2
3
4
5
75
80
85
90
95
0.460
0.459
0.446
0.438
0.470
0.728
0.730
0.730
0.730
0.730
36.8
37.1
38.9
39.9
35.5
序号 提取温度/℃ A0 Ax 清除率/%
1
2
3
4
5
室温
30
35
40
45
0.497
0.483
0.482
0.470
0.486
0.786
0.790
0.791
0.790
0.796
36.8
38.8
39.1
40.5
39.0
A浸提剂体积数/% B水浴时间/h C水浴温度/℃
1
2
3
80
85
90
室温
30
40
1
1.5
2
水平
因 素
序号 A B C A0 AX 清除率/%
1
2
3
4
5
6
7
8
9
K1
K2
K3
R
0.485
0.497
0.467
0.470
0.430
0.476
0.439
0.456
0.468
0.783
0.783
0.769
0.783
0.769
0.783
0.769
0.783
0.783
38.1
36.5
39.3
40.0
44.1
39.1
42.9
41.7
40.4
1
1
1
2
2
2
3
3
3
113.9
123.2
125
11.1
1
2
3
1
2
3
1
2
3
121
122.3
118.8
3.5
1
2
3
2
3
1
3
1
2
118.9
116.8
126.3
9.4
提取液/mL A0 AX 清除率/%
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
0.713
0.713
0.713
0.702
0.701
0.702
0.717
0.717
0.717
0.717
0.489
0.391
0.341
0.329
0.318
0.289
0.283
0.270
0.277
0.280
31.4
45.2
52.2
53.1
54.7
58.7
60.4
62.3
61.3
60.9
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Inhibition of extracts from Cynanchum chinensis on nitrosation reaction
LIN Min，MA Zhi-qiang，WU Dong-qing，AN Hong-gang，REN Xue-feng
（Key Laboratory of Resources and Environment Chemistry of West China，Department of
Chemistry，Hexi University，Zhangye Gansu 734000，China）
Abstract: The inhibition and scavenging effect of extracts from Cynanchum chinensis on nitrosamine
reaction and sodium nitrite were investigated，respectively. Active components were extracted from Cyn－
anchum chinensis and the extraction conditions were optimized by L9（33）orthogonal test. The study sho－
wed that the optimum extraction conditions were as follows: the ratio of liquid（90% alcohol）to solids（10∶1），
raw materials at 40 °C，extraction time of 90 min. The maximum capabilities to inhibit the production of
nitrosamine and scavenging effect to sodium nitrite were 63.1% and 62.3%，respectively.
Key words: extracts from Cynanchum chinensis; inhibition; scavenging; sodium nitrite; nitrosamine
时突变最大，由 37.8%上升到 49.8%。当用量达到
2 mL时，阻断率提高缓慢，趋于平衡。峰值出现在
用量 7 mL处，最大阻断率为 63.1%。
表 7 不同用量提取液对 NDMA 的阻断作用
3 结论
3.1 从鹅绒藤中获得具有阻断 NDMA合成和清除
亚硝酸盐活性物质的最佳条件是：料液比 1∶10，90%
（质量分数）乙醇 40℃水浴回流提取 1.5 h。
3.2 在体外模拟胃液的条件下，鹅绒藤浸提液能
有效地阻断 NDMA 的合成和清除亚硝酸盐，以生
料量计，当加入 0.02 g/mL浸提液 7 mL时，最大阻
断率为 63.1%，8 mL时最大清除率为 62.3%。
3.3 鹅绒藤原料易得，作为防癌剂开发利用前景
可观，因此有可能成为一种经济、有效具有防癌作
用的天然生物资源。
参考文献：
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提取液用量/mL A0 AX 阻断率/%
1
2
3
4
5
6
7
8
0.315
0.315
0.317
0.317
0.315
0.315
0.320
0.320
0.196
0.158
0.152
0.147
0.140
0.130
0.118
0.128
37.8
49.8
52.1
53.9
55.6
58.7
63.1
59.4
39