全 文 ：收稿日期:2009-09-30;　修订日期:2009-12-29
基金项目:广东省科技厅国际合作基金(No.2008A050200005);
科技部国际合作项目(No.2009DFA21230)
作者简介:谢晓玲(1984-),女(汉族),广东广州人 ,现为中山大学药学院
在读硕士研究生 ,硕士学位 ,主要从事中药质量标准研究工作.
＊通讯作者简介:徐新军(1967-), 男(汉族),宁夏青铜峡人 ,现任中山大
学药学院副教授 ,博士学位 ,主要从事中药质量标准研究工作.
广东土牛膝及咽炎方合剂中
12 , 13-二羟基泽兰素对照品的制备
谢晓玲1 ,徐新军 1＊ ,陈　孝 2 ,万金志1 ,闫李丽 1 ,杨得坡1
(1.中山大学药学院 ,广东 广州　510006;　2.中山大学附属第一医院 ,广东 广州　510080)
摘要:目的 从广东土牛膝中制备咽炎方合剂中的特征成分 12, 13-二羟基泽兰素对照品。 方法 结合液液萃取 、硅胶柱
色谱 、制备型高效液相色谱(HPLC)对广东土牛膝醇提物进行分离纯化 ,通过紫外光谱(UV)、红外光谱(IR)、质谱(MS)、
核磁共振(NMR)等进行结构鉴定 ,分析型 HPLC和薄层色谱(TLC)进行含量测定。结果 制得的对照品为 12, 13-二羟
基泽兰素 , 含量大于 98.0%。结论 该化合物可作为广东土牛膝及咽炎方合剂的质量控制以及药效物质基础研究用的化
学对照品。
关键词:广东土牛膝;　咽炎方合剂;　12, 13-二羟基泽兰素;　对照品
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.07.077
中图分类号:R283　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2010)07-1730-02
Preparationof12 , 13 -dihydroxyeuparinReferenceSubstancefrom RadixEupatori
ChinensisandYanyanfangMixture
XIEXiao-ling1 , XUXin-jun1＊ , CHENXiao2 , WANJin-zhi1 , YANLi-li1 , YANGDe-po1
(1.SchoolofPharmaceuticalSciences, SunYat-senUniversity, Guangzhou510006, China;2.FirstAfiliated
HospitalofSunYat-senUniversity, Guangzhou510080, China)
Abstract:ObjectiveToprepare12, 13-dihydroxyeuparinreferencesubstancefromRadixEupatoriiChinensis, thecharacter-
isticcompositioninYanyanfangMixture.MethodsTheextractofRadixEupatoriiChinensiswasisolatedandpurifiedbyliquid-
liquidextraction, silicagelcolumnchromatographyandpreparativehighperformanceliquidchromatography(HPLC).Thestruc-
tureof12, 13-dihydroxyeuparinwasidentifiedbyultravioletspectra(UV), infraredspectra(IR), massspectra(MS)andnu-
clearmagneticresonance(NMR).ThecontentwasdeterminedbyanalyticalHPLCandthin-layerchromatography(TLC).Re-
sultsThecontentoftheproductwashigherthan98%.ConclusionThecompoundcanbeusedasareferencesubstanceforquali-
tycontrolandtheresearchofpharmacodynamicaction.
Keywords:RadixEupatoriChinensis;　YanyanfangMixture;　12, 13-dihydroxyeuparin;　Referencesubstance
　　广东土牛膝 RadixEupatoriiChinensis为菊科植物华泽兰 Eu-
patoriumchinenseL.的干燥根 , 具有清热解毒 、凉血利咽 、抗炎镇
痛的功效 [ 1, 2] , 有喉科圣药之称。以广东土牛膝为主药的复方制
剂在广东地区的医院里被广泛使用 ,但国内有关广东土牛膝在复
方制剂中的特征成分未见报道。 本实验对广东土牛膝药材及其
复方制剂咽炎方合剂(中山大学附属第一医院研制)进行化学成
分研究 , 首次从该植物中分离得到 12, 13-二羟基泽兰素(12, 13
-dihydroxyeuparin),符合中药化学对照品的相关要求 [ 3 , 4] , 可用
于该药材和咽炎方合剂的质量控制和药效物质基础研究。
1　仪器与材料
BIO-RAD制备型液相色谱仪 , Waters1525分析型高效液相
色谱仪(2996PAD检测器 , Empower色谱工作站), BrukerAvance
Ⅲ 400MHz核磁共振波谱仪 , 岛津 LCMS-IT-TOF质谱仪 ,
BrukerTensor37傅立叶变换红外光谱仪 , SRSOptimelt熔点测定
仪 , WFH-203B三用紫外分析仪 ,亚荣 RE-300旋转蒸发器。
广东土牛膝购于广州市药材公司 ,由中山大学药学院徐新军
博士鉴定 ,咽炎方合剂由中山大学附属第一医院提供。薄层硅胶
和柱层析硅胶(青岛海洋化工厂);甲醇 、乙腈为色谱纯 , 水为重
蒸馏水 ,其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
2.1.1　 分析型 HPLC:迪马 DiamonsilC18柱(4.6 mm×250 mm,
5 μm);检测波长 205 ～ 400 nm;柱温为室温 , 流速 1 ml· min-1 ,
进样量 20μl。流动相为 0.2%磷酸水溶液 -乙腈梯度 1洗脱
(咽炎方制剂分析):0 ～ 10 min,乙腈 10%;10 ～ 40min, 乙腈 10%
～ 40%;40 ～ 60 min, 乙腈 40% ～ 60%。 0.2%磷酸水溶液 -乙腈
梯度 2洗脱(药材萃取物分析):0 ～ 10 min, 乙腈 10%;10 ～ 40
min,乙腈 10% ～ 40%;40 ～ 50 min, 乙腈 40%;50 ～ 65 min, 40%
～ 80%乙腈;65 ～ 80 min, 乙腈 80%。 0.2%磷酸水溶液 -乙腈
(80∶20, 对照品纯度分析)。
2.1.2　制备型 HPLCKromasilC18柱(10 mm×250 mm, 5 μm),
流动相为水 -甲醇(65∶ 35);检测波长 254 nm, 流速 5 ml·
min-1 ,进样量 0.5 ml。
2.2　广东土牛膝在咽炎方合剂中的特征成分确定 咽炎方合剂
系由广东土牛膝 、岗梅 、甘草等中药水煎煮浓缩而成 ,广东土牛膝
是方中君药。用 HPLC对咽炎方合剂 、广东土牛膝水煮液和乙醇
提液 、咽炎方缺广东土牛膝阴性溶液进行分析 , 选择广东土牛膝
在制剂中峰面积最大的成分作为分离纯化目标。如图 1所示 , 峰
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时珍国医国药 2010年第 21卷第 7期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.7
1为咽炎方合剂与广东土牛膝水煮液相对应的色谱峰 , 确定其为
目标化合物。由于峰 1在广东土牛膝乙醇提取液中含量较高 ,选
择用 95%乙醇提取广东土牛膝药材 ,制取浸膏供分离对照品用。
2.3　对照品的分离与制备 取广东土牛膝药材 3kg,粉碎, 95%乙
醇回流提取 2次 , 1.5h/次。合并提取液 ,减压浓缩 ,得乙醇提取物
50 g。取乙醇提取物与水混悬 ,依次以石油醚 、乙醚 、正丁醇萃取 ,
得石油醚萃取物 23 g,乙醚萃取物 3.6 g和正丁醇萃取物 5g。
分别取 3种萃取物进行 HPLC分析(见图 2)发现拟分离化
合物主要在乙醚萃取层。取乙醚萃取物干法上样于硅胶(200 ～
300目)柱 ,二氯甲烷 -丙酮(16∶1)洗脱 , 合并薄层色谱斑点相
同部分 , 得到粗品 0.4 g, 经 HPLC面积归一化法计算 , 拟分离化
合物质量分数为 70%。
A-咽炎方样品溶液　B-咽炎方广东土牛膝缺位样品溶液
C-广东土牛膝乙醇提取液　D-广东土牛膝水煮液　1.目标化合物
图 1　供试品溶液色谱图(254nm)
A-石油醚萃取物　B-乙醚萃取物　C-正丁醇萃取物　1.目标化合物
图 2　萃取物色谱图(240nm)
将粗品溶于 50 ml35%甲醇 , 作为制备液相色谱供试品溶
液。按制备型 HPLC色谱条件对粗品进行纯化 ,收集保留时间在
20 ～ 23 min的组分(见图 3)在 50℃减压浓缩后冷冻干燥 ,得淡黄
色粉末 100 mg。
图 3　供试品溶液的制备型HPLC图
2.4　结构鉴定 淡黄色针状结晶(甲醇)。 熔点 121 ～ 122 ℃。
UV(MeOH)λmaxnm:240, 265, 348。 IR(KBr)νmaxcm-1:3440,
2446, 1643, 1384, 1163, 1070, 950, 860, 547。 ESI-MS::m/z
249.0759[ M-H] -,确定分子式为 C13H14O5。 NMR数据见表 1。
NMR数据与文献报道基本一致 [ 5] , 确定其结构为 12, 13 -
二羟基泽兰素 , 结构见图 4,为首次从该植物中分离得到。
2.5　对照品的纯度检测
2.5.1　HPLC检测 取对照品适量 , 用甲醇配成浓度为 250 μg·
ml-1的溶液 , 按色谱条件进样分析 , 对照品主峰与杂质峰分离度
为 8.2。色谱图见图 5。用 Empower软件计算得到对照品主峰的
纯度角度为 0.42, 纯度阈值为 0.71, 角度和阈值均小于 1, 且前者
小于后者。根据 Waters色谱工作站的色谱峰纯度理论 , 表明对
照品的峰光谱均匀 ,纯度较高 , 可认为是单一物质峰。
2.5.2　TLC检测 取对照品用甲醇配制成浓度为 5.0mg· min-1
的溶液 , 做为供试液 ,另取供试液稀释成浓度为 0.1 mg· min-1 ,
作为对照液 , 取供试液和对照液各 10 μl点于同一硅胶板上 , 以
二氯甲烷 -丙酮(7∶1)为展开剂 , 以 10%硫酸乙醇为显色剂 ,
105℃加热 3 min, 置紫外灯 365nm下观测 , 供试液除主斑点外 ,
只出现一个杂质斑点 ,且小于对照液 ,表明制得的对照品含量大
于 98.0%。
表 1　对照品的 NMR数据(CD4O, 400MHz, δ)
碳位 13C-NMR 1H-NMR(HSQC) HMBC(C-H)
2 163.6 H-13, H-14
3 103.8 6.63(1H, s) H-4
4 125.5 8.04(1H, s) H-3, H-11
5 122.8 H-7, H-11
6 161.9 H-4
7 99.9 6.84(1H, s)
8 160.9 H-4, H-3
9 118.1 H-7
10 206.1 H-4, H-11
11 27.0 2.59(3H, s)
12 72.9 H-13, H-14
13 69.4 3.65(2H, d, J=10Hz) H-14
14 23.6 1.47(3H, s) H-13
图 4　12, 13-二羟基泽兰素结构式
图 5　 12, 13-二羟基泽兰素的分析型HPLC图
3　讨论
以广东土牛膝为主药的复方制剂在广东地区的医院常被用
于治疗急慢性咽喉炎 、扁桃体炎等咽喉疾病 , 疗效确切 ,但由于其
为地方药材 , 对照品的缺失成为其质量控制的瓶颈 ,药材及其制
剂质量标准一直未有含量测定方法 [ 6] , 广东土牛膝复方制剂的
质量控制主要有对广东土牛膝进行薄层鉴别 [ 7, 8] , 测定制剂的总
黄酮含量 [ 7, 9]等 ,对制剂中广东土牛膝的化学成分研究很少 。本
实验通过分析咽炎方合剂中广东土牛膝的特征成分 ,结合广东土
牛膝水提液的指纹图谱 ,选取两者均含有的成分作为定量指标的
目标化合物 ,进行分离 、纯化 , 得到 12, 13-二羟基泽兰素 , 可作
为广东土牛膝药材和咽炎方合剂的质量控制以及药效物质基础
研究用的化学对照品。
在用制备液相色谱纯化前 ,先把乙醚层萃取物通过硅胶柱色
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.7 时珍国医国药 2010年第 21卷第 7期
谱预处理 , 初步净化去除了样品中大量的杂质 , 使 12, 13 -二羟
基泽兰素的含量进一步提高 ,防止污染色谱柱。
选用 205 ～ 400 nm的检测波长对样品进行纯度分析 , 确定主
成分峰为单一物质峰 , 表明在此色谱条件下 , 主成分 12, 13-二
羟基泽兰素和杂质分离完全。
HPLC和 TLC两种检测方法测定对照品纯度 , 含量均大于
98.0%,符合中药对照品要求。
参考文献:
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学术探讨
收稿日期:2009-08-03;　修订日期:2009-12-29
基金项目:宁夏回族自治区自然科学基金(No.NZ0889)
作者简介:贺晓慧(1965-),女(汉族),陕西岐山人 ,现任宁夏医科大学教
授 、主任医师 ,学士学位 , 主要从事中医基础理论临床研究及回族医学研
究工作.
论 “俞穴—脏腑 、器官和组织 —体表投影 ”假说
贺晓慧 1 ,贾孟辉 2
(1.宁夏医科大学中医学院 ,宁夏 银川　750004;　
2.宁夏医科大学附属银川市中医医院 ,宁夏 银川　750001)
摘要:通过对 “俞”穴命名的源流反复推经求义 ,结合现代经络俞穴的研究成果 , 深入地阐述了 “俞”有应答 、对应之意 ,
“俞”穴的实质可能是人体的脏腑 、器官和组织在所对应的距离该脏腑 、器官和组织最近的局部体表的对应点。据此提出
所有穴位的本质 , 可能是人体的脏腑 、器官和组织在所对应的距离该脏腑 、器官和组织最近的局部体表的 “投影”点区这
一假说。并对经络腧穴的实质探讨和研究的现况进行了深刻地反思。
关键词:俞穴;　脏腑;　体表投影;　假说
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.07.078
中图分类号:R224.2　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2010)07-1732-02
　　中医传统经络理论及回族医学经络理论中有关诸多经典腧
穴中 , 独以 “俞”命名者有 24个 ,占经穴总数(361个)的 7%。对
其命名源流 、体表分布 、功能主治的规律性及特点等条分缕析 ,探
幽索奥 , 无不彰显出古先贤以 “俞”命名穴位之所由及其深层意
蕴之所在 , 从而启迪我们应对经络腧穴的实质探讨和研究的现
况 , 进行深刻地反思 ,并对今后的相关研究方向应赋予理性地思
辨。辨。 “俞”,古义为 “应允 ” “答应 ”之意。如 《尚书尭典》有
“帝曰:俞 , 予闻如何?”, 又杨雄 《校猎赋》有 “上犹谦让而未俞
也” 。由此可知 , “俞”应释为:应答 、对应之意。以 “俞”命名的穴
位有:分布于背部足太阳经的有五脏俞(肺俞 、脾俞 、肾俞 、心俞 、
肝俞),五脏俞中还有厥阴俞(心包俞);六腑俞(胆俞 、胃俞 、三焦
俞 、大肠俞 、小肠俞 、膀胱俞);其他如督俞 、膈俞 、关元俞 、气海
俞 、中膂俞和白环俞。分布于上肢前臂手太阳经的有臑俞 、肩外
俞和肩中俞。分布于背部督脉的腰俞。 分布于腹部脐旁足少阴
经的盲俞。分布于背部的奇穴胃管下俞。总计二十四俞穴。以
上俞穴从分布而言 , 除腹部脐旁足少阴经的盲俞外 , 均为分布于
肩背部的手足太阳经和奇穴。而且穴名所涉内容主要是人体的
五脏六腑(如六脏俞 、六腑俞 、胃管下俞)、气血(督俞 、关元俞 、气
海俞)、以及总司气机升降的膈肌(膈俞)和上下肢活动的枢机
(臑俞 、肩外俞 、肩中俞和中膂俞 、白环俞)。不仅如此 ,五脏六腑
俞穴在背部脊旁从上而下依次排列的次序 ,与体腔内脏腑位置的
排列次序相吻合。古人为什么将五脏六腑俞穴集中依次排列于
背部脊柱旁的体表上? 而头部 、四肢等其他躯干部体表却未涉五
脏六腑俞穴? 古人这种看似简单却又异乎寻常的俞穴排列次序
及命名着实耐人寻味。首先 , 从现代解剖学角度看 ,脊神经是人
体神经系统的重要组成部分 ,包括支配五脏六腑的传出传入神经
皆以脊椎旁为门户 ,如明治针灸大学的研究结论认为有关植物神
经功能的针灸研究大多与躯体 -内脏反射有关 [ 1] 。作为针灸医
学诊断和疗效的思考方法之一 , 内脏 -躯体反射是诊断的基础 ,
躯体植物神经反射是疗效的基础 ,针灸治疗是利用后者以期达到
对证治疗的效果 [ 2] 。从有关报道来看 , 针灸通过调节植物神经
的中枢部位来发挥作用。如浅见铁男报道井穴刺络(即针刺井
穴)对植物神经的异常紧张起抑制作用 , 作用部位在丘脑下部的
植物神经中枢与脊髓侧角的交感神经中枢 [ 3] 。 ChenA报道序列
电针促使具有抗抑郁和镇痛作用的大脑 5-羟色胺释放 ,然后作
用于植物神经中枢 [ 4] 。 HofmannB认为针刺引起的皮肤表面温
度反应是植物性神经中枢的多个调节区共同参与的结果 [ 5] 。大
泽秀雄亦指出躯体感觉诱发的交感神经肾支活动的反射性反应
的大部分是脊髓以上的反射 [ 6] 。故先贤将五脏六腑俞穴集中依
次排列于背部脊柱旁的体表 , 呈现内外相互对应之举 , 亦正合
“俞”有 “对应”“应答”之意。他如主司气血的督俞 、关元俞 、气海
俞在背部脊柱旁的排列次序 ,同样与人体内脏的植物神经出入门
户有关 。而对于总司人体大关节枢机活动的腰俞(主腰部运
动)、中膂俞 、白环俞(主下肢运动)及臑俞 、肩外俞 、肩中俞(主上
肢运动),在解剖上的特点除该局部是传出入运动神经的主要通
道外 , 还与局部的特殊关节结构有关。
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