全 文 ：湖 北 农 业 科 学 2014 年
收稿日期：2014－08－30
基金项目：江西省卫生厅中医药科研基金项目（2013A179）；江西省教育厅 2012 年度青年基金科技项目（GJJ12537）；江西中医药大学生药学重点
学科青年教师扶持项目
作者简介：林贵兵（1981－），男，四川自贡人，讲师，博士，主要从事中药资源可持续利用与药材质量标准化研究，（电话）0791－87118997
（电子信箱）linguibing897＠gmail．com；通讯作者，刘 勇，副教授，硕士，主要从事中药资源方面研究，（电子信箱）1647192899＠qq．com。
第 53 卷第 23 期
2014年 12月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 53 No.23
Dec.，2014
细梗香草（Lysimachia capillipes Hemsl．） 又名
满山香，为报春花科植物全草，具有清热解毒、祛风、
止咳、调经、宁神等功效，临床主要用于感冒咳嗽、
风湿痹痛、气管炎、哮喘、月经不调、神经衰弱等 ［1］。
现代药理研究表明，细梗香草具有解热、抗病毒、抗
肿瘤等作用。 细梗香草中有效成分以黄酮和皂苷为
主，还有有机酸、挥发油等［2－6］。 吕武清等［7］对细梗香
草药材测定黄酮苷元山奈酚的含量为 0．015％～
0．085％。 唐琍萍等［8］优化了样品处理方法同时测定
槲皮素和山奈酚含量分别为 0．006 1％和 0．107 0％。
因这些方法都采用层析柱对提取液黄酮苷元进行
了纯化富集，其成分损失较大。 本研究采用直接提
取法，减少提取工艺对有效成分的损失，优化提取
过程，提高效率，节约成本，并用 HPLC 法测定细梗
香草槲皮素、山奈酚含量，使结果更客观准确。 本研
究通过测定细梗香草全草中槲皮素与山奈酚含量，
HPLC法对细梗香草中槲皮素和山奈酚含量的测定
林贵兵，罗光明，许燕萍，沈 安，谢安芮，刘 勇
（江西中医药大学，南昌 330004）
摘要：测定了细梗香草（Lysimachia capillipes Hemsl．）中槲皮素和山奈酚含量。 用甲醇加热回流盐酸水解
法，薄层色谱对细梗香草提取液中槲皮素和山奈酚进行定性检验；高效液相色谱法（HPLC）同时测定细梗
香草中槲皮素和山奈酚含量，色谱条件为 ACI C18（250 mm×4．6 mm）色谱柱，流动相为甲醇－0．4％磷酸溶
液（60∶40，V ／ V），流速为 1．0 mL ／ min，检测波长为 368 nm，柱温为 30 ℃。 槲皮素在 0．24～2．40 μg 内线性关
系良好，回归方程为 y＝0．000 3x－0．006 1，R2为 0．997 8，平均回收率为 95．91％；山奈酚在 0．72～7．20 μg 内
线性关系良好，回归方程为 y＝0．000 2x＋0．411 5，R2为 0．997 2，平均回收率为 103．06％。 细梗香草中槲皮
素和山奈酚含量在分别为 0．021％与 0．065％。
关键词： 细梗香草（Lysimachia capillipes Hemsl．）；槲皮素；山奈酚；HPLC
中图分类号：O657．7＋2 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2014）23－5848－03
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2014.23.057
Determing Quercetin and Kaempferol in Lysimachia capillipes Hemsl． with HPLC
LIN Gui－bing，LUO Guang－ming，XU Yan－ping，SHEN An，XIE An－rui，LIU Yong
（Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine， Nanchang 330004， China）
Abstract： Contents of quercetin and kaempferol in Lysimachia capillipes Hemsl were dertermined. Heated and refluxed with
methanol and hydrochloric acid， quercetin and kaempferol of the extractant was qualitatively tested with the thin layer
chromatography. ACI C18 （250 mm×4．6 mm） column was used. Mobile phase was methanol－0．4％ phosphoric acid （60∶40，V ／
V）. Flow rate was 1．0 mL ／ min. Detection wavelength was 368 nm. Column temperature was 30 ℃． The linear relationship of
quercetin was good in the range of 0．24～2．40 μg. The regression equation was y＝0．000 3x－0．006 1， with of 0．998 9 and the
average recovery of 95．91％． The linear relationship of kaempferol was good in the range of 0．72～7．20 μg， the regression
equation was y＝0．000 2x＋0．411 5 with R2 of 0．998 6 and the average recovery of 103．06％． The content of quercetin and
kaempferol in the leaves of Lysimachia capillipes Hemsl． was 0．021％ and 0．065％，respectively．
Key words： Lysimachia capillipes Hemsl； quercetin； kaempferol； HPLC
第 23 期
为其质量标准的制定提供基础数据。
1 材料与方法
1．1 试验材料
1100型高效液相色谱仪（Agilent 公司），配二极
管阵列检测器（DAD）；AB104－N 型电子天平（德国
Mettler－Toledo 公司）；薄层色谱硅胶 G（青岛海洋化
工有限公司）；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析
纯；试验用水为去离子水。
槲皮素标准品（批号：20130522，上海金穗生物
科技有限公司 ）与山奈酚标准品 （批号 ：110861－
201209，中国食品药品检验研究院），药材经刘勇副
教授鉴定为报春花科珍珠菜属植物细梗香草（Ly-
sumachia capillipes Hemsl．）的干燥全草（图 1）。
1．2 含水量测定
取细梗香草药材，粉碎后过 80 目筛，精密称取
粉末 2．0 g， 平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，精
密称定，打开瓶盖至 105 ℃干燥 5 h，盖好瓶盖后移
至干燥器中，冷却 30 min，再次精密称定。 再于 105
℃干燥 1 h，冷却后称重，直至连续两次称重，重量差
不超过 5 mg，计算药材中含水量（％）。
1．3 供试品制备
取细梗香草药材全草同一批次粉末 2．0 g，精密
称重置于具塞的玻璃瓶中， 精密加入 25 mL 甲醇，
精密称重，置水浴中加热回流 1 h，冷却后称重，补
足损失甲醇并混匀； 过滤并取滤液 10 mL， 水浴蒸
干，用 20 mL 甲醇溶解，加入 2 mL 浓盐酸，置水浴
中加热回流水解 1 h，蒸干，残渣加甲醇 5 mL 溶解，
摇匀，过 0．22 μm微孔滤膜后即为供试品溶液。
1．4 对照品制备
精密称取槲皮素标准品 2．4 mg， 山奈酚标准品
7．2 mg，置于 10 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀
溶解，浓度分别为槲皮素对照品（Q）0．24 μg/μL、山
奈酚对照品（P）0．72 μg/μL，冷藏备用。
1．5 薄层色谱
取供试品、 槲皮素与山奈酚对照品溶液 10 μL
分别点于硅胶 G 薄层板上，以甲苯－醋酸乙酯－甲酸
（5∶4∶1，V/V/V）为展开剂，置盐酸蒸气饱和的展开缸
内，展开，取出，晾干。
1．6 色谱系统考察
1．6．1 色谱条件 色谱柱为 ACI C18 （250 mm×4．6
mm）柱，流动相为甲醇－0．4％磷酸溶液（60∶40，V/V），
流速为 1．0 mL/min， 检测波长为 368 nm， 柱温为
30℃。 对照品进样量为 20 μL。
1．6．2 线性关系考察 分别精密进样槲皮素与山
奈酚混合标准品溶液 1、2、4、6、8、10 μL， 在上述色
谱条件下测定峰面积， 将其含量与峰面积进行处
理。y表示含量，x表示峰面积；分别得到线性关系和
相关系数。
1．6．2 精密度试验 精密吸取样品溶液 20 μL，按
上述色谱条件重复进样 6 次，分别计算槲皮素与山
奈酚峰面积 RSD值。
1．6．3 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液 20
μL，按上述色谱条件，在 0、1、2、3、4、5 h测定槲皮素
与山奈酚峰面积，分别计算其 RSD值。
1．6．4 重复性试验 取同一批样品 6 份，制成供试
品溶液，精密吸取 20 μL，按上述色谱条件测定槲皮
素和山奈酚峰面积，分别计算其 RSD值。
1．6．5 加样回收率试验 称取 2．0 g 细梗香草药材
粉末，加入 5 μL 标准品溶液，在“1．3”项操作下制成
供试品溶液，每次吸取 20 μL，按上述色谱条件进行
测定和分析，分别计算槲皮素和山奈酚平均回收率
和 RSD值。
2 结果与分析
2．1 含水量
按照 2010 版药典规定的方法， 对细梗香草全
草含水量测定结果为 12．43％。
2．2 薄层色谱结果
薄层色谱结果如图 2 所示，可见在“1．5”条件
下，山奈酚与槲皮素分离效果较好，说明“1．3”中供
试品制备条件能提取并水解出山奈酚与槲皮素，展
开系统合适分离山奈酚与槲皮素。
图 1 细梗香草药材
图 2 提取液薄层色谱图
山奈素
槲皮素
林贵兵等：HPLC 法对细梗香草中槲皮素和山萘酚含量的测定 5849
湖 北 农 业 科 学 2014 年
2．3 HPLC系统
线性关系考察结果表明，槲皮素在 0．24～2．40 μg
内线性关系良好， 回归方程为 y＝0．000 3x－0．006 1，
R2为 0．997 8；山奈酚在 0．72～7．20 μg 内线性关系良
好， 回归方程为 y＝0．000 2x＋0．411 5，R2为 0．997 2。
精密度试验表明， 槲皮素与山奈酚 RSD 值分别为
1．376％、0．367％，说明精密度良好。 稳定性试验结果
其 RSD 值分别为 1．51％、1．99％，表明在 5 h 内样品
比较稳定 。 重复性试验中槲皮素的峰面积分别
为 2 014．3、2 039．1、2 068．6、2 022．3、2 040．0、2 016．8，山
奈酚峰面积分别为 11 310．9、11 353．1、11 869．9、11
386．6、11 933．0、11 481．2， 其 RSD 值分别为 1．00％、
2．34％。 加样回收率结果槲皮素和山奈酚平均回收
率分别为 95．91％、103．06％；RSD 值分别为 2．76％、
1．12％，结果见表 1。
2．4 对照品分离
在“1．6．1”色谱条件下，进样对照品结果（图 3）
表明， 槲皮素和山奈酚的保留时间分别为 5．4 min
和 8．1 min，分离效果较好。
2．5 供试品 HPLC图谱
精密吸取供试品溶液 20 μL，在“1．6．1”色谱条
件下测定，色谱图结果如图 4所示。
2．6 细梗香草槲皮素、山奈酚含量
本研究对药材进行了槲皮素与山奈酚含量的
测定， 结果槲皮素和山奈酚含量分别为 0．021％和
0．065％。
3 小结与讨论
3．1 提取工艺方法
细梗香草主要有效成分包括黄酮类和皂甙类，
以前学者研究黄酮类物质主要采用了柱层析方法
富集黄酮类成分， 此方法除去了非黄酮类成分，但
对黄酮类成分损失较大，本研究采用直接提取盐酸
水解法，损失相对较小，对含量测定相对较为客观
准确。
在用 60％、80％、100％甲醇分别进行提取，结果
表明纯甲醇提取槲皮素、山奈酚提取率最高，水浴
加热时间比较了 30、60、90 min 提取效果，结果表明
提取时间差异不显著，本课题采用了用纯甲醇与水
浴加热 60 min。
药材粉末粗细程度对含量测定的影响，比较了
过 100、80、60 目筛以及粗粉比较， 结果表明过 100
目与 80 目对有效成分提取含量差异不显著， 而 60
目以及更粗的粉末几乎无法提取出黄酮类成分。 因
此对于细梗香草黄酮类有效成分提取药材粉末至
少要过 80目筛。
3．2 色谱条件
吕武清等 ［7］测定山奈酚色谱条件；流动相：甲
醇－0．2％磷酸溶液 （47∶53，V ／ V）； 流速：1．0 mL ／ min
条件下，山奈酚在约 8．6 min 处出峰。 唐琍萍［8］等测
山奈酚与槲皮素的条件； 流动相： 甲醇－水－磷酸
（500∶500∶1，V/V/V） 条件下槲皮素在约 9．4 min 出
峰，山奈素在约 16．2 min 有一色谱峰。 本试验用色
谱柱为 ACI C18（250 mm×4．6 mm）柱，修改流动相为
甲醇－0．4％磷酸溶液（60∶40，V/V），流速为 1．0 mL/min，
检测波长为 368 nm；柱温为 30 ℃；进样量为 20 μL。
在此色谱条件下，槲皮素和山奈酚的保留时间分别
为 5．4 min 和 8．1 min，缩短了出峰时间，提高了效
率，节约了试验成本。
3．3 小结
细梗香草中皂苷类成分研究比较清楚，而黄酮
类成分研究不多，在药材中它主要以黄酮苷的形式
存在，水解为黄酮苷元后，药材化学成分特异性不
表 1 槲皮素、山奈酚加样回收率
序号
1
2
3
4
5
6
样品重量
g
2.000
2.015
2.015
2.006
2.010
2.000
槲皮素
1.20
1.20
1.20
1.20
1.20
1.20
山奈酚
3.60
3.60
3.60
3.60
3.60
3.60
槲皮素
1.519 29
1.546 54
1.619 44
1.578 09
1.510 39
1.593 45
山奈酚
4.996 56
5.093 30
5.020 14
5.018 44
4.919 14
4.993 04
槲皮素
92.44
94.71
100.79
97.34
91.70
98.62
山奈酚
102.68
105.37
103.34
103.29
100.53
102.58
加入量//μg 测出量//μg 回收率//%
图 3 槲皮素与山奈酚对照品 HPLC 图谱
0 2 4 6 8 10
保留时间//min
1 000
800
600
400
200
0
m
AU
5.414 min
8.079 min
图 4 细梗香草提取液 HPLC 图谱
0 2 4 6 8 10
保留时间//min
800
600
400
200
0
m
AU
5.416
8.104
（下转第 5854页）
5850
湖 北 农 业 科 学 2014 年
强，需进一步深入研究黄酮类化学成分。 细梗香草
叶的黄酮类成分含量比茎高，具有显著差异，这也
与采收期密切相关，因此本课题组下一步研究细梗
香草不同采收期药材的含量差异，其成分动态积累
的规律，研究其最佳时间，为细梗香草质量控制提
供基础依据。
参考文献：
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社，1996．
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量［J］．中草药，2004，35（4）：475－459．
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和山奈素的含量［J］．亚太传统医药，2008，4（1）：32－35．
（责任编辑 胡西洲）
（上接第 5850页）
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
TT/（TT＋TO）×100％ （3）
根据公式（2）和公式（3）可以计算出分类总精
度和烟草识别精度（表 4）。可以看出，利用该方法分
类的烟草识别精度可以达到 80．52％，效果较理想。
3 小结与讨论
通过上述的分析和结果可以看出，在贵州高原
山区利用单时相双极化的 TerraSAR－X 数据进行烟
草的识别是可行的，这为高原山区农作物监测提供
了新的途径。 该文获取了烟草团棵期 TerraSAR－X
影像，虽然分类结果较理想，但同时有以下几点值
得思考：
1）团棵期的烟草叶面很小 ，大量土壤裸露在
外，再加上季节干旱的影响，使得烟草地和建筑物
表现出相似的散射特性， 后向散射系数很接近，这
为两者的区分带来了困难，也就是说，影像时相的
选择会影响烟草识别的结果；
2）采用的是单时相双极化的雷达影像进行分
类，取得了较理想的效果，但随着雷达技术的发展，
多时相、多极化雷达影像的应用可以提供更丰富的
地物信息，可以为高原山区目标地物的提取提供更
多的选择，所以，为了提高识别精度，在研究区可以
尝试使用多时相、多极化影像；
3）单时相多极化数据的使用虽然减少了成本
及数据处理量， 但在地物后向散射系数变化分析
方面存在着弊端，这是今后研究中需要考虑的一
个问题。
参考文献：
［1］ LE TOAN T， LAUR H， MOUGIN E， et al． Multitemporal and
dual－polarization observation of agricultural vegetation covers by
X－band SAR images［J］． IEEE Transactions of Geoscience and
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田识别研究［J］．南京气象学院学报，2007，30（3）：365－370．
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苏宝应县为例［D］．南京：南京农业大学，2004．
表 3 GPS 样方数据中不同地类的统计结果
地类
烟草
玉米
水稻
有林地
居民点
面积//m2
113 373.2
152 826.1
11 784.3
68 809.5
39 458.5
所占比例//%
29.35
70.65
表 4 研究区烟草识别精度评价
参数
监督
分类
TT
m2
105 281.2
TO
m2
25 473.6
OO
m2
214 326.2
OT
m2
41 170.6
分类总精度
%
82.75
烟草识别精度
%
80.52
（责任编辑 王晓芳）
5854