全 文 ：湖南师范大学自然科学学报
9 1 8 5年第 3 期
N a tu r al S ei e n e eJo u r n
al o f H u na nN o r m al U ni v es ti ty
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珊瑚樱叶愈伤乡且织的诱导和
植株再生还乏激素的作用
夏新界 陈梅生 邓国础
摘 要
接种于 Ms十 B A2 .。 +N A A。 . :十 G A3 。 . 5培养基上的外植体叶块 , 3 至 4 天后启动 分裂 , 6至 8 天形
成旺盛生长的愈伤组织 ; 第 10 天开始分化产生 幼芽 ; 转入生根培养基的苗段 , 15 天左右能形成不定根 。 从
外植体接种到形成完整植株讯似 o天左右 。 叶组织培养中 , 基本培养基M S 比N 。好 。 在各种激素处理中 , BA 、
N A A
、
G A : 的组合比其它种类激素的组合效果要好。 G A 」对器官的分化有明显促进作用 。 B A对 芽 器 官的
分化是必需的 , 但对根的分化有抑制作用 。
植物组织培养的研究 , 无论在理论研究方面 , 还是在生产实际应用上 , 都具有广阔的前
景 。 目前世界上 已培养成功的试管植物在 5 0 种 以上 t ` ’ 。
珊瑚樱 ( s ol an u 摊 sP 即 d。 一 c oP 对cu m L . ) 又名珊瑚豆 、 冬珊瑚 。属茄 科植物 , 是常见的观
贫花卉之一 。 夏秋开花 、 果实圆球形 、 成熟时显红色 , 鲜丽的果实是观赏的主要部分 。 但其
组织 培养工作未见报道 。 本文研究 了瑚瑚樱叶外植体愈伤组织诱导和植株的再生 , 以及激素
在叶组织培养中的作用 。 试图在理论研究上对组织培养中激素的作用作进一步的 了解 , 在生
产 、 科研 、 教学实际中为快速繁殖瑚瑚樱提供依据 。
材料和方法
外植体叶块取 自种子萌发后 40 天左右的无菌苗和生长 2 至 3 个月的实生苗 。 无菌苗叶块
直接 切成小 块 接 种 , 实生苗则经过灭菌处理后接种 。 外植体叶块约 l . o x o . sc 琳 。
培养基选用 M s 和 N 。为基本培养基 , 再 添加不 同浓度配比的 B A 、 z 印 、 K 、 N A A 、 G A 。 。
琼醋 0 . 6 % , 蔗糖 3 % , p H S . 4 , 培养丛在 1 . 0大气压下灭菌15 分钟 。
培养温度 2 4 。一 2 8 O C , 白天用 4 0 w 日光灯补照 9 一 1 0小时 。
结果和分析
一 、 叶愈伤组织的诱导和植株再生
1
、 愈伤组 织的诱导和 苗的分化
外植体叶块接种于M S + B A 2 . 。 + N A A 。 . 。 十 G A 3 。 . 。培 养 荃中 , 接种后的第 3一 4 天 ,
外植体开始启动分裂 ; 第 6 一 8 天为启动分裂 、 愈伤组织形成高峰 , 可看到明显的愈伤组织 。
继续培养的第10 天 以后 , 不经转移的愈伤组织可直接分化形成幼芽 ( 图 1 ) , 产生的幼芽部分
· 木文承中科院植物所王伏雄教授 , 北师大张述祖 教 授、 王缘副教授提出宝贵意见 , 工作中曾得到张
志光副教授 、 常桂菊 、 李训贞等老师的帮助 , 特此致谢 。
本文一9 8 5年 4 月2 2日收三以{
发育成幼苗。 幼苗生长时 , 可正常地背地性生长 , 也有很大一部分可象根一样向地性生长 (图幻
2
、 根的分化
根的分化培养基主要为 : M S + N人 A 。 . 。 + G 滩。 。 . 。和 M s 十 B A , . 。 十 G A : 。 . 。
①接种于 上述两 种培养基的外植体第 4 天开始启动分裂 。 20 天左 右 , 外植 体 愈 伤组织
可在 前一种培 养华 , !一 , 分化出根 ; ②转入 _ }:述两种培养基的苗段 , 15 夭左 右 , 在 苗段 的切
口处长出 粗壮 的 根 ; ③将 幼苗连同下部的愈伤组织转入上述两种培养基 , 一个月左右 , 能
使苗块愈伤组织产生 粗壮的根 ( 图 3 ) ; ④在分化芽的培 养 基上 形 成的幼苗 , 不经转移 ,
1一 2个月后 , 部分幼 fl\F’ 可直接从茎 _ L产生不定根 ; ⑤在分化芽培养基上产生的愈伤组织转
入上述根的培养基 「!” , 部分愈伤组织可分化出根 , 与幼苗的生长一样 , 产生的根可正常地向
地性生长 , 又可背地生长 ( 图 4 ) 。
以 卜产生的根均能形成根系 。 植株移栽于土 中 , 都能成恬 , 正常生长 。 切下的苗段扦插
于」几中也能生根成活 。
_卜述结果表明 , 瑚瑚樱叶组织培养中根的分化是较容易的 。 在激素作 用 方面 , B A有利
于芽的分化 , 仁!对根的分化有抑制作用 。
二 、 不同植物激素对叶组级培养的作用
不少研究者认为 , 激素戍分及其浓度 配比对外植体诱导 、 愈伤组织形成 、 器官分化起很
大作用 〔 2 一 ” ’ 。 在瑚瑚樱叶组织培养中 , 我们在主要以M S为基本培养基的情况下 , 进 行了一
些有关激素作用方面的对比实验 。
1
. 各种处理时叶组织培养的影响
外植休接种培 养一个月的统计结果见农 I 。 从表 卜可看出 , 圣本培养基 以 M s 为好 。
表 I
愈伤组织
生长状况
幼苗生
长状况
成率苗/块成苗数/块芽数/块分化率ǎ%à
芽块数化分芽天数诱导率ǎ%à产生愈伤组织数启动大数种接材料数处 理
(的 g / )L
0
B A
2 .
G A
o
4 5 7 0 / / O / / / /
N A A
s 一 1 0 0 1 0 3一 1 0 0 1 5 6 4 0 中等大 、 灰白 大 、 壮 、 黄绿
0 . 0
N A A
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3 0 1 0 0 / / / / / /
3 3 9 0 12 3 3 1 0 0 9 3 3 3
大 、 灰 白
很小 、 淡绿 小 , 绿色
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. 。
N A A
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G A
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B A
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G A
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1 9 5 1 3 7 0 1 5 1 1 8 4 3 小 、 弱 、 黄 、 绿
4 0 5 3 5 8 8 1 3 3 2 9 1 1 2 4 3 3
小 、 灰 白
中等 、 灰 白 较大 、 黄绿
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z 止p : . 。 N A A 0 .
3 6 6 1 6 4 4 16 1 0 6 2 2 50 小 、 灰白
36
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飞,.飞
N A A
N A A
0一 5
0 . 6
3 0 6 2 8 9 3 1 3 1 6 6 0 1 1 4
3 8 5 3 8 10 0
,
1 4 9 2 6 1
。
5 1
较小 、 灰 白
大 、 灰 白
小 、 弱 、 黄绿
小 、 绿色
大 、 壮 、 黄绿
GAB
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. 。 号 为N 6基本培养基
8 6
在以 M S为基本培养基的 2号和 以N 。 为基本培养基的 9 号比较 , 虽然激素处 理一样 , 但效果
2 号比 9 号好 。
在以 M S为基本培养基的各组中 , 2 号效果最好 。 诱导率 、 分化率均达 10 0% , 芽数 、 成
苗数都最高 。 启动需要天数也最 少 。 6 号处 理 以 I A A代 替 N A A , 其 余 同 2 号 , 但 效 果 不
如加有 N A A的 2 号。 所 以在瑚瑚樱的叶组织 培 养中 , B A 与 N A A 的配合作用要比与 I A A 的配
合作用好 。 8 号处理是在 2 号处理的基础 _卜去掉 G A 3 , 其效果不如 2 号 , 可见G A 3对 外植体
叶块培养有促进作用 。 4号仅加有B A , 也能分化形成植株 , 但效果比不上 2 号 。 5 号和 7 号
分别以 K 、 iZ p代替刀A , 其余处理 同 2 号 , 其结果明显不如加有刀A 的 2 号 。 所 以珊瑚樱叶组织
培养刀A是不可缺少的 。 3号处理中N A A浓度 高于BA , 愈伤组织 比其它各组长得大 , 但芽子分
化受抑制 。 1 号为M S基本培养基 , 在接种后的第七天 , 虽在切 口叶脉处 , 有启动细 胞分裂
现象 , 并可形成很小的细胞团 , 但到晚些时候 , 这些细胞 团都消失 。 外植体增大成活一个时
期 , 慢慢变黄死去 。 因而在珊瑚樱叶组织培养巾 , 补加一定的外源激素是需要的 。
2
. 不同浓度刀A 对叶组 织培养的影响
从表 I 的结果分析知道 , 刀A 与N A A 的配合作用 比与其它激素间的 配 合作 用好 。 为了知
道多高的B A 浓度对外植休脱分化 、 再分化最为有利 , 我们进行 了下列 6组处 理的对 比实验 ,
接种培养一个月的统 计结果见表 l 。
表 !
产接 。 , 生 诱理 ( m g l/ ) 种 经 愈 导材 望 伤 率
N A A
GA
3 扮 鑫 箫 菇
夕又 华飞 、 ` 产数
愈伤
组织
生长
状况
幼苗
生长
状况
苗成率八%à成苗数/块
芽数/块分化率ǎ%à块数芽
分化芽天数
QU八J.度盖任`no八OJ任口d2 . 0 0
.
5
3
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.
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.
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.
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4
.
0 0
.
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.
5 3 4 6
7 5 / O /
1 0 0 1 7 2 3
1 0 0 1 0 1 9 8 7
1 0 0 1 0 4 9 1 0 0
1 0 0 1 2 3 0 9 1
7 1 1 5 4 1 2
0 / / 大灰 白
1 1 1 0 0 较大灰白 大壮黄绿
9 4 4 中等灰白 大壮黄绿
14 6 43 中等灰白 大壮黄绿
4 2 5 0 较小灰绿 较小绿色
1 1 10 0 小灰绿 小绿色
2143
如表所示 , 虽然 B A 浓度从 O 到理m g l/ , 但各组中都有愈伤组织产生 。 当刀A达 4水 g l/ 时 ,
愈伤组织诱导率从 1 0 %降到71 % , 比未加刀A 的低 。 愈伤组 织的生长状况 , 随刀A浓度的 增加
而变小变绿 , 当达 到 4 m g l/ 时 , 愈伤组织生长缓慢 。 n 、 12 、 13 、 2 号组中 , 愈伤组织 诱导
率均达 1 0 % , 而芽的分化率 、 分化芽子数 、 成苗数仍然是 2 号处理效果最好 。 14 号刀A 浓度
最高 , 效果不如加有低浓度BA 的各组
。 没有加 B A 的 10 号 , 有愈伤组织产生 , 但没有看 到芽
子的分化 。 日}此可见 . 在珊瑚樱叶组织培养中 , 刀A对芽的分 化 是必需的 。 适 当浓度的刀A 与
其它激素的配合 , 对外植体叶块的诱导 、 愈伤组织的形成及芽的分化是有利的 。 过高浓度的
刀A对外植体启动 、 愈伤组织 的形成有抑制作用 ; 而对芽的分化 、 幼苗的生长是不利的 。
3
. 不 同浓度的 G A 3 对叶 组织培养的影响
在珊瑚樱叶组织培养中 , G A 。对叶组织 的培养有促进作 用 。 为 了进一步弄清 G A 3作用的
最适浓度 , 木实验分 4 组进行比较 。 表 l 为接种培养一个月后的统计结果 。
表 ,
率成苗/成数苗 块/块芽数/块化率分ǎ%à芽块数化分芽天数一13诱导率ǎ%à产生织伤组数愈
ù启天数动种材接料数
盛,一ù”nIJ一,`O“
理 (哪 g / l )
N A A
愈伤组
织生长
状 况
幼苗生
长状况
nU八1O」J份月怪八0nn J甘口, .上11
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5 4 1
1 0 0 1 1
1 0 0 1 3
1 0 0 1 4
1 7 5 9
3 4 1 0 0
2 7 1 0 0
4 1 1 0 0
较小 , 灰 白 小 , 绿
中等 , 灰白 大壮 , 黄绿
较大 , 灰 白 大壮 , 黄绿
较大 , 灰白 大壮 , 黄绿
结果表明 , 低浓度的G A 3 ( 。 . 5琳刃 l) 对 愈伤组织芽的分化有明显的促进作 用 , 幼苗 的
生长也很健壮 。 随着G A 3浓度的增加 , 愈伤组织逐渐增大 , 芽块数 、 成苗率逐渐 降低 。 所 以
适 当补加低浓度的 G A 3对愈伤组织芽器官的分化有促进作用 , 较高浓度的 G A : 则有抑制 作用 ,
但有利于愈伤组织 的生长 。
讨 论
1
、 珊瑚樱叶组织再生植株为又一种新培养成功的试管植物 。 实验结果表明 , 珊瑚樱叶
il[ 织具有相 当强的器官分化能力 , 对外源激素敏感 , 不必更换培养基可一次成苗 , 产生的芽
数量多 。 生根培养基只需去掉激动素 ( B A ) , 就可诱导外植体 , 带愈伤组织的苗块 分化出
根 , 植株易移栽成活 , 且培养周期短 、 取材方便 , 又具有一定观赏价值 , ,玫是一种较理想 的
实验材料 。
2
、 珊瑚樱叶组织 培养 ` 1, , 加入适 当的外源激素是必要 的 。 在芽器官的分 化 中 , 对刀A
有着特异的需要 , 这种对某类激素的特异需`要和依赖 , 在其它一些研究中也得到证实 , 如在
弥猴桃 离休茎段 的培养中 , 必须有玉米素的参与 , 才能达到良好的 效 果 t 。 ’ 。 还有苹果属植
物 【” , 烟 草 t 吕 ’ 、 罗汉果 〔 “ ’ 以及山新杨 〔 ` “ ’ 等植物的培养 , 都 有 类似情况发 生 。 这 种 情
况发生的原因 , 主要与材料的木身特性有关 。 在刀A 单独使用时 , 也能分化产生大 量芽子 , 这
可能与材料本身存在的内源激素有关 , 应该认为仍然是激动素和生长素相互作用的结果 , 不
违背S k 。 。 g 等人 〔 ` 日 ’ 的模式 。 B A对根的分化有抑制作用 。
3
、有关 G A 。的作用 , 大多数报道是对器官分化的抑制作用 〔 ` ” 。 许智宏 ￡’ 2 ’ 、 刘涤 ` ’ . ’ 等
发现 G滩 3抑制烟草培养中芽的分化 。 桂耀林 t ” 等发现 G A 3抑制弥猴桃茎段培养芽的分化 , 还
有人发现 G人 。抑制番茄根的分化 仁“ ’ , 以及 G A 。对胡萝 卜组织培养和原生质体培养中胚状休
发生的抑制作川 t ’ 一 ’ 7 ’ 。 与这些报道不同的是 ,在珊瑚樱叶组织培养中 ,加入 适 当的G A : ,
对愈伤组织形成和芽的分化 、 苗的成长均有促进作用 。 与油菜 苔 段培养 【屯 ’ 和原生质体培养
的情况相 同 〔 ’ 。 ’ 。 由此 一可见 , G A 。在组织培养中的作用 , 依植物种类不 同而表现出相反的结果 。
J
、 在珊瑚樱叶组织培养中 , 幼苗 、 根生长的极性出现反常情况 ,这可能与培养条件有关 。
参 考 文 献
[ 1 1
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