全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2014，29(4)∶398 ～ 400
DHBV DNA滴度仍显著降低(P ＜ 0． 01)，停药 7 d
时，出现 DHBV DNA滴度回升现象。低剂量肝舒胶
囊组用药 14 d 时有 DHBV DNA 滴度一过性降低
(P ＜ 0. 05)，其余时间及停药后 DHBV DNA 滴度与
用药前比较，无明显改变(P ＞ 0． 05)。除病毒对照
组外，其余各组用药期间血清中 DHBsAg 的 OD 值
均有明显降低(P ＜ 0． 05 或 P ＜ 0． 01)，停药后肝舒
胶囊组 DHBsAg 的 OD 值有回升现象。结果表明:
高、中剂量肝舒胶囊组用药后 7 ～ 28 d 均出现鸭血
清中 DHBV DNA滴度的明显降低，但在停药 7 d 后
出现 DHBV DNA滴度回升现象;低剂量肝舒胶囊组
用药期间对 DHBV DNA 抑制作用不明显;此外，各
剂量肝舒胶囊组治疗期间血清中 DHBsAg 均有明显
的降低作用。对 DHBV DNA 和 DHBsAg 的抑制作
用均表现出一定的量效关系。说明肝舒胶囊对体内
DHBV有明显抑制作用，为肝舒胶囊临床应用及进
一步开发提供了依据。
参考文献:
［1］ 邹宇宏，扬雁，吴强，等． 黄芪提取物的体外抗乙型肝炎病毒
作用［J］．安徽医科大学学报，2003，38:267 － 269．
［2］ 胡兴昌，沈琳．板蓝根活性物质抗流感和乙型肝炎病毒实验
研究［J］．中华国际医学杂志，2004，4:366 － 367．
［3］ 邓海林，吴佩颖，王建新． 灵芝的研究进展［J］． 时珍国医国
药，2005，16(2):141 － 143．
［4］ 何光力，刘洁，艾丽，等．肝舒胶囊对 CCl4 致大鼠慢性肝损伤
的影响［J］．华西药学杂志，2009，24(5):501 － 502．
［5］ 何光力，刘洁，潘嘉，等． 肝舒胶囊对急性肝损伤动物的保护
作用［J］．华西药学杂志，2009，24(6):620 － 622．
［6］ 何光星，江南，艾丽．肝舒胶囊的免疫调节作用［J］．华西药学
杂志，2011，26(5):457 － 459．
［7］ 陈压西，郭树华，黄爱龙，等．地高辛标记 DHBV DNA 探针的
制备及应用［J］．重庆医科大学学报，1994，19(4):295 － 297．
［8］ 陈压西，郭树华，张定凤，等． 重庆麻鸭乙肝动物模型的建立
及应用———21 种中药抗鸭乙型肝炎病毒初筛研究［J］． 中西
医结合肝病杂志，1994，3(3):38 － 40．
收稿日期:2013 － 09 － 09
基金项目:贵州省优秀科技教育省长专项资金项目(No． 200655);贵阳市科技计划项目(No． 201220441);贵州省中医药管理局中医药、民族医
药科学技术研究专项课题(No． QZYY2012 － 46)
作者简介:罗红(1983—)，女，贵州贵阳，硕士，从事中药生物活性及作用机制的研究工作。Email:luohong1011@ 163． com
* 通信作者(Correspondent author)，Email:shenxiangchun@ 126． com
大蝎子草不同膜分离片段的体外抗菌活性研究
罗 红1，刘文炜2，江 滟1，沈祥春1*
(1．贵阳医学院，贵州 贵阳 550004;2．贵州省生物技术研究开发基地，贵州 贵阳 550002)
摘要:目的 观察大蝎子草的不同膜分离片段对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、白念珠菌和新
生隐球菌的体外抗菌活性。方法 运用平板打孔法测定大蝎子草的不同膜分离片段对常见病原性细菌和单细胞真菌的敏感
性。采用微量液体稀释法检测其对常见病原性细菌和单细胞真菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC/MFC)。结果
大蝎子草的不同膜分离片段对金黄色葡萄球菌具有抑菌作用，MIC 为 1． 25 ～ 5 mg·mL －1;分子量 1 × 105(UF100)、5 × 104
(UF50)对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌具有抑菌作用，MIC为 5 ～ 10 mg·mL －1;但膜分离各片段对铜绿假单胞菌和单细胞真菌
均无作用;大蝎子草的膜分离各片段在最大浓度为 20 mg·mL －1时，对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷
伯菌、白念珠菌和新生隐球菌均无杀灭作用。结论 大蝎子草的膜分离片段对所试细菌株有抑菌效果，而对单细胞真菌未见
明显抑菌或杀灭作用。
关键词:大蝎子草;膜分离片段;抑菌
中图分类号:Ｒ96 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2014)04 － 0398 － 03
DOI:10． 13375 / j． cnki． wcjps． 2014． 04． 014
Inhibiting effects of Girardinia herba membrane separated fractions on bacteria and fungi
in vitro
LUO Hong1，LIU Wen － wei2，JIANG Yan1，SHEN Xiang － chun1*
(1． Guiyang Medical College，Guiyang，Guizhou，550004 P． Ｒ． China;2． Guizhou Institute of Biotechnology Ｒesearch and Development，
Guiyang，Guizhou，550002 P． Ｒ． China)
Abstract:OBJECTIVE To investigate the in vitro effects on Staphylococcus aureus，Escherichia coli，Pseudomonas aeruginosa，
Klebsiella pneumoniae，Candida albicans and Cryptococcus neoformans of different Girardinia herba separated fractions (HGSFs)．
METHODS Inhibition zone diameters were measured to investigate the effects on bacteria and fungi of HGSFs． The minimal
inhibitory concentrations (MIC)and the minimum bactericidal / fungal concentration (MBC/MFC)of HGSFs were determined with
micro － liquid dilution method． ＲESULTS All of HGSFs apparently inhibited effect to Staphylococcus aureus，MIC is 1． 25 － 5 mg·
mL －1 ． Fraction 1(UF100)and 2(UF50)could can inhibit the growth of Escherichia coli and Klebsiella pneumonia and MIC was 5 －
10 mg·mL －1 but had no effect on Pseudomonas aeruginosa and wnicellular fungi． The different HGSFs，at maximum concentration of
crude Girardinia herba(20 mg·mL －1)，were not confirmed killing the experimental bacteria and single － celled fungi strains．
CONCLUSION HGSFs have antibacterial effects on the part of the bacteria strains，but can not inhibit or kill the single － celled
fungi strains．
Key words:Girardinia herba;Membrane Separated Fraction;Bacteriostatic effect
CLC number:Ｒ96 Document code:A Article ID:1006 － 0103(2014)04 － 0398 － 03
在 2003 年版《贵州省中药材、民族药材质量标
准》中，收载活麻的原植物为荨麻科珠牙艾麻
Laportea bulbifera(Sieb． etZucc．)Wedd．的新鲜或干
燥全草［1］。贵州少数民族地区以荨麻科大蝎子草
属植物大蝎子草 Girardinia diversifolia(Link)Friis 的
全草或根作为活麻药材广泛使用，具有祛风解表、利
气消痰、清热解毒之功效［2］，民间应用于治疗伤风
咳嗽、胸闷痰多、水肿、皮肤搔痒等症状［3］。现采用
膜分离技术分离大蝎子草的不同膜分离片段并研究
其体外抗菌活性。
1 实验部分
1． 1 试药与菌种
大蝎子草(采自贵州贵阳市花溪区，由贵阳医
学院药用植物学与生药学教研室龙庆德副教授鉴
定);水解酪蛋白琼脂培养基(MH 琼脂培养基)、水
解酪蛋白培养基(MH 培养基)(杭州天和微生物试
剂有限公司，按 3． 8 g·100 mL －1配制，于 121 ℃灭菌
20 min);沙保弱琼脂培养基和沙保弱培养基(按 1%
蛋白胨、2%葡萄糖、1． 5%琼脂粉配制，于 115 ℃灭菌
10 min)。金黄色葡萄球菌(ATCC26112 － 5)、大肠埃
希菌(ATCC25922)、白念珠菌(ATCC10231)(中国药
品生物制品检定所，贵阳医学院微生物教研室保存);
绿脓杆菌、肺炎克雷伯菌、新生隐球菌均为临床分离
菌株(贵阳医学院微生物教研室保存)。
1． 2 方法与结果
1． 2． 1 大蝎子草提取物( HGSFs) 的制备 称取
1 kg大蝎子草地上部分微粉，加水煎煮，滤过，合并
滤液，滤液前处理后经微孔滤膜滤过，依次通过切
割，得分子量 1 × 105(UF100)、5 × 104(UF50)、1 ×
104(UF10)、5 × 103 (UF5)、800 (NF800)、400
(NF400)、200(NF200)和 Less than NF － 200 的膜，
得到各段溶液，经冷冻干燥后，得对应冻干粉分别为
12． 81、4. 92、4． 07、1． 52、3． 72、10． 34、2． 10、20． 62 g。
1． 2． 2 HGSFs对不同菌株抑菌圈直径的测定［4］
取 MH琼脂培养基和沙保弱培养基，分别倾注在直
径 7． 5 cm的平皿内(每平板 10 mL)，制成 MH琼脂
平板和沙保弱琼脂平板。将金黄色葡萄球菌、肺炎
克雷伯菌、绿脓杆菌、大肠埃希菌的 18 h 培养物和
白色念珠菌、新生隐球菌的 24 h 培养物分别用灭菌
生理盐水配制成 1 × 108 CFU·mL －1的菌液。取 100
μL菌液加在相应平板的表面，用 L棒涂布均匀。用
打孔器在各平板上打 5 mm 直径的孔。采用 0． 1%
DMSO的双蒸水将各提取物配制为 2 mg·mL －1的提
取物供试液。按每孔 20 μL 加于各平板孔内，每药
同时做两个复孔，并以双蒸水和 0． 1% DMSO 的双
蒸水作为阴性对照，以头孢曲松钠和氟康唑作为阳
性对照。将各培养基平板置恒温孵育箱内，于 37 ℃
培养 24 h 后，观察抗菌结果、48 h 后观察抗真菌的
结果。测量各孔周围的抑菌圈直径，判断提取物对
该菌种的抑菌作用。大蝎子草提取物 3 ～ 8 组对金
黄色葡萄球菌具有抑制作用，各提取物对大肠埃希
菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌以及单细胞真菌均
无作用(表 1)。
表 1 大蝎子草提取物的抑菌试验结果(mm)
Table 1 Antibacterial effect of Girardinia herba separated fractions
(mm)
HGSFs
Staphylo-
coccus
aureus
Escherich-
ia
coli
Klebsiella
pneumo-
nia
Pseudo-
monas
aerugino-
sa
Candida
albicans
Cryptococ-
cus
neoformans
1 0 0 0 0 0 0
2 0 0 0 0 0 0
3 12 0 0 0 0 0
4 10． 5 0 0 0 0 6
5 11 0 0 0 0 0
6 11 0 0 0 0 0
7 11 0 0 0 0 0
8 10． 5 0 0 0 0 0
ddH 0 0 0 0 0 0
0． 1% DMSO 0 0 0 0 0 0
40 μg Ceftriaxone 27． 7 26． 5 12 21 N N
20 μg Fluconazole N N N N 22 20
993第 4 期 罗 红，等。大蝎子草不同膜分离片段的体外抗菌活性研究
1． 2． 3 最低抑菌浓度( MIC) 试验［4］ 将提取物分
别用无菌 MH液体培养基和沙保弱液体培养基稀释
成不同浓度的提取物供试液。将不同浓度提取物供
试液按每孔 90 μL加入 96 孔板中，用无菌生理盐水
稀释各菌种的 24 h培养物，分别加 10 μL于含不同
浓度提取物的肉汤以及不含提取物的培养基中，使
提取物在培养基内的终浓度为 20、10、5、2． 5、1． 25、
0. 625 mg·mL －1，菌细胞终浓度为 1 × 105 CFU·
mL －1。将孔板置恒温孵育箱内，37 ℃培养 24 h 后，
观察抗细菌结果、48 h 后观察抗真菌结果。观察培
养基中细菌或真菌的生长情况，判断提取物对该菌
种的抑菌作用，以完全无菌生长的提取物最高稀释
度作为该提取物的最低抑菌浓度。大蝎子草提取物
均对金黄色葡萄球菌具有抑菌作用，MIC 为 1． 25 ～
5 mg·mL －1。提取物 1、2 组对大肠埃希菌和肺炎克
雷伯菌具有抑菌作用，MIC 为 5 ～ 10 mg·mL －1。各
提取物对铜绿假单胞菌和单细胞真菌均未见明显作
用(表 2)。
表 2 蝎子草提取物的MIC试验结果(mg·mL －1)
Table 2 MIC of Girardinia herba separated fractions(mg·mL －1)
HGSFs Staphylococcusaureus
Escherichia
coli
Klebsiella
pneumonia
Pseudo-
monas
aeruginosa
Candida
albicans
Cryptococcus
neoformans
1 5 10 5 ＞ 20 ＞ 20 ＞ 20
2 5 5 10 ＞ 20 ＞ 20 ＞ 20
3 1． 25 ＞ 20 ＞ 20 ＞ 20 ＞ 20 ＞ 20
4 1． 25 ＞ 20 ＞ 20 ＞ 20 ＞ 20 ＞ 20
5 1． 25 ＞ 20 ＞ 20 ＞ 20 ＞ 20 ＞ 20
6 1． 25 ＞ 20 ＞ 20 ＞ 20 ＞ 20 ＞ 20
7 1． 25 ＞ 20 ＞ 20 ＞ 20 ＞ 20 ＞ 20
8 1． 25 ＞ 20 ＞ 20 ＞ 20 ＞ 20 ＞ 20
1． 2． 4 最低杀菌浓度( MBC) 试验［4］ 取 MIC 试验
中无菌生长的培养物 10 μL，接种于不含提取物的
相应琼脂培养基上。将各培养基平板置恒温孵育箱
内，于 37 ℃培养 24 h 后，观察抗细菌结果、48 h 后
观察抗真菌结果。观察培养基上细菌的生长情况，
判断提取物对该菌种的杀菌作用，以完全无菌生长
的提取物最高稀释度作为该提取物的 MBC。大蝎
子草提取物在最大浓度为 20 mg·mL －1时，对金黄色
葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯
菌、白念珠菌和新生隐球菌均无杀灭作用。
2 讨论
大蝎子草作为贵州地方苗族习用特色药材，对
感染性疾病具有一定的防治作用，课题组前期完成
了大蝎子提取物的抗炎作用及可能的机制分析［5］。
文中实验证实:大蝎子草的不同膜分离片段均对金
黄色葡萄球菌具有抑菌作用，MIC 为 1． 25 ～ 5 mg·
mL －1。UF100、UF50 的片段对大肠埃希菌和肺炎克
雷伯菌具有抑菌作用，MIC 为 5 ～ 10 mg·mL －1。各
分离片段对铜绿假单胞菌和单细胞真菌均无作用。
大蝎子草不同膜分离片段在最大浓度为 20 mg·
mL －1时，对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单
胞菌、肺炎克雷伯菌、白念珠菌和新生隐球菌均无杀
灭作用。
参考文献:
［1］ 贵州省药品监督管理局．贵州省中药材、民族药材质量标准
［S］．贵阳:贵州科技出版社，2003:187．
［2］ 陶玲，支娜，柏帅，等．大蝎子草抗炎镇痛活性部位研究［J］．
时珍国医国药，2009，20:1404 － 1405．
［3］ 沈祥春，支娜，许立，等． 大蝎子草乙酸乙酯部位对脂多糖诱
导巨噬细胞炎症介质表达的影响［J］． 中华中医药杂志，
2010，25:1397 － 1400．
［4］ 江滟，王和． 微生物学实验教程［M］． 北京:科学出版社，
2011:163 － 165．
［5］ 支娜，陶玲，沈祥春．大蝎子草水层部位对 LPS 诱导大鼠腹腔
巨噬细胞 iNOS 与 TNF － α 的影响［J］． 中药药理与临床，
2010，26:39 － 41．
收稿日期:2013 － 05 － 30
004 华 西 药 学 杂 志 第 29 卷