全 文 ： ［收稿日期］ ２０１３－０１－２５；２０１３－０４－１０修回
［基金项目］ 贵州省教育厅自然科学研究项目“贵州喀斯特地区悬钩子属植物资源筛选与利用现状的研究”（２０１００６５）；贵阳市科技局科技
特派员计划“悬钩子属可食资源的利用及配套种植技术研究”（２０１１２０７）
［作者简介］ 蒋华梅（１９７６－），女，副教授，从事天然产物化学教学及相关研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：８５７３４６６９５＠ｑｑ．ｃｏｍ
＊通讯作者：石登红（１９８０－），女，副教授，从事生物学教学及相关研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｈｄｈｉｅｏ＠１６３．ｃｏｍ
［文章编号］１００１－３６０１（２０１３）０５－０２９０－０１４４－０３
回流提取插田泡叶总黄酮的条件优化
蒋华梅１，王向前２，石登红３＊，苏春梅１，张婧婧１，张军强１，张贵书１，苟小敏１
（１．贵阳学院 化学与材料工程学院，贵州 贵阳５５０００５；２．贵阳学院 图书馆，贵州 贵阳５５０００５；３．贵阳学院
生物与环境工程学院，贵州 贵阳５５０００５）
［摘 要］为探讨贵州野生插田泡叶总黄酮的提取方法，用正交试验法对插田泡叶中总黄酮的最佳提取
条件进行了筛选，并用分光光度法对总黄酮含量进行测定。结果表明，最佳提取工艺条件为乙醇浓度７０％、
料液比１∶１０、回流温度８０℃、提取时间３ｈ。在此提取条件下，插田泡叶中总黄酮含量可达４４．９３１ ３ｍｇ／ｇ，
远高于文献报道的２０２．７９ｍｇ／１００ｇ。经试验验证，该工艺提取的插田泡叶总黄酮稳定性、重现性好，且加
样回收率高，具有一定的可行性。
［关键词］正交试验法；回流；提取；插田泡；总黄酮；分光光度法
［中图分类号］Ｏ６２９．９ ［文献标识码］Ａ
Ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｏｔａｌ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ
Ｌｅａｖｅｓ ｏｆ Ｒｕｂｕｓ ｃｏｒｅａｎｕｓ
ＪＩＡＮＧ Ｈｕａｍｅｉ １，ＷＡＮＧ Ｘｉａｎｇｑｉａｎ２，ＳＨＩ Ｄｅｎｇｈｏｎｇ３＊，ＳＵ Ｃｈｕｎｍｅｉ １，
ＺＨＡＮＧ Ｊｉｎｇｊｉｎｇ１，ＺＨＡＮＧ Ｊｕｎｘｉａｎｇ１，ＺＨＡＮＧ Ｇｕｉｓｈｕ１，ＧＯＵ Ｘｉａｏｍｉｎ１
（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ；２．Ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ Ｇｕｉｙａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；３．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ
Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｇｕｉｙａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ，Ｇｕｉｚｈｏｕ５５０００５，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ Ｒ．ｃｏｒｅａｎｕｓ ｌｅａｖｅｓ ｗｅｒｅ
ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｂｙ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ａｒｒａｙ ｄｅｓｉｇｎ，ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ Ｒ．ｃｏｒｅａｎｕｓｌｅａｖｅｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ
ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ ｗｉｌｄ Ｒ．ｃｏｒｅａｎｕｓ
ｉｎ Ｇｕｉｚｈｏｕ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ａｓ ｆｏｌｏｗｓ：ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｔｈａｎｏｌ
７０％，ｓｏｌｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ １∶１０，ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ８０℃，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ３ｈ．Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅｓｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，
ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｒ．ｃｏｒｅａｎｕｓ ｌｅａｖｅｓ ｒｅａｃｈｅｄ ４４．９３１ ３ｍｇ／ｇ，ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｍｕｃｈ ｈｉｇｈｅｒ
ｔｈａｎ ｔｈｅ ｄａｔｅ ２０２．７９ｍｇ／１００ｇ ｆｒｏｍ ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅｓ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ Ｒ．ｃｏｒｅａｎｕｓ ｌｅａｖｅｓ ｗａｓ ｏｆ ｇｏｏｄ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ，
ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ ｗａｓ ｈｉｇｈ．Ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｔｌｙ，ｔｈｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｈａｓ ｃｅｒｔａｉｎ ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ａｒｒａｙ ｄｅｓｉｇｎ；ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；Ｒｕｂｕｓ ｃｏｒｅａｎｕｓ；ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｓｐｅｃｔｒｏ－
ｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ
插田泡（Ｒｕｂｕｓ ｃｏｒｅａｎｕｓ Ｍａｑ．Ｖａｒ．ｃｏｒｗｅａｎｕｓ）为
蔷薇科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）悬钩子属（Ｒｕｂｕｓ Ｌｉｎｎ）多年生灌
木，是药食两用植物。插田泡果实味甘、酸、性温，富
含多种营养成分，具有较高的营养价值［１］。插田泡
果实、根、叶均可入药，具有补肾固精、平肝明目、活
血止血、祛风除湿、明目、除湿解毒等功效，主治阳
痿、不孕、目生翳障、风湿痹痛、跌打损伤、骨折、月经
不调等疾病。插田泡中含有插田泡甙［２］、覆盆子
甙［３］、黄酮［４］等多种生物活性物质。黄酮类化合物
具有清除血栓、降血压、降血脂、促进脑部、心脏的血
液循环等功效［５］，可用于治疗冠状动脉硬化、预防血
液疾病等，可抑制肿瘤、消除体内自由基延缓衰老，
可作为天然色素、甜味剂等食品添加剂［６］。黄酮类
化合物的提取方法主要有：有机溶剂提取法、微波提
取法、超声波提取法、碱性稀醇或碱性水提取法和酶
法等［７－１１］。微波提取法设备较贵，超声波提取法提
取率相对较低，碱性稀醇或碱性水提取法影响因素
较多，酶法试剂相对较贵。与其他方法相比，有机溶
剂回流提取法，提取率高，设备简单，影响回流提取
的因素少，试剂较便宜，可操控性强，更容易实现从
试验室到工厂化生产。悬钩子属植物中黄酮类化合
物的提取研究已有少量报道［１２－１３］，但有关插田泡中
黄酮类化合物的研究尚未见报道。贵州位于中国悬
钩子属植物的西南分布中心，具有丰富的野生悬钩
子属植物资源［１４］。因此，试验以贵州野生插田泡叶
为试验材料，采用正交试验法，利用有机溶剂回流提
取法对插田泡叶中的总黄酮进行提取，并用分光光
度法对总黄酮含量进行测定，旨在为贵州野生插田
泡资源的开发与利用提供科学依据。
贵州农业科学 ２０１３，４１（５）：１４４～１４６
Ｇｕｉｚｈｏｕ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
１ 材料与方法
１．１ 材料与仪器
野生插田泡叶，采自贵州贵阳学院，采摘时间为
１２月，于１００℃恒温干燥后研碎备用；所用试剂硝酸
铝 Ａｌ（ＮＯ３）３、亚 硝 酸 钠 （ＮａＮＯ２）、氢 氧 化 钠
（ＮａＯＨ）、无水乙醇（ＣＨ３ＣＨ２ＯＨ）均为分析纯，芦
丁为标准品≥９７％（１２０℃干燥至恒重）。电子天平
（美国奥豪斯）、ＵＶ－２５５０型紫外可见分光光度计
（日本岛津）。
１．２ 方法
１．２．１ 芦丁标准溶液的配备 准确称取已干燥芦
丁标准品２．５ｍｇ于１０ｍＬ容量瓶中，用蒸馏水稀
释至刻度，浓度为０．２５ｍｇ／ｍＬ。
１．２．２ 测定波长的选择 采用Ａｌ（ＮＯ３）３法，准确
移取芦丁标准品溶液１ｍＬ于１０ｍＬ比色管中，用
蒸馏水稀释至２．４０ｍＬ，加５％亚硝酸钠０．４０ｍＬ，
混匀，放置６ｍｉｎ，加１０％硝酸铝０．４０ｍＬ，混匀，放
置６ｍｉｎ，加４％氢氧化钠４．００ｍＬ，用蒸馏水稀释
至刻度，混匀，放置１５ｍｉｎ。以不加ＮａＮＯ２的溶液
为空白，采用紫外—可见分光光度法，在４００～
８００ｎｍ波长范围扫描［１２－１３］，测得芦丁溶液在５０６ｎｍ
处吸光度值最大，因此确定５０６ｎｍ为试验的测定
波长。
１．２．３ 芦丁标准曲线的绘制 准确移取芦丁标准
品溶液０．００ｍＬ、０．４０ｍＬ、０．８０ｍＬ、１．２０ｍＬ、
１．６０ｍＬ、２．００ｍＬ、２．４０ｍＬ分别置于１０ｍＬ的比
色管中，用蒸馏水稀释至２．４０ｍＬ，加５％亚硝酸钠
０．４０ ｍＬ，混 匀，放 置 ６ ｍｉｎ，加 １０％ 硝 酸 铝
０．４０ｍＬ，混 匀，放 置 ６ ｍｉｎ，加 ４％ 氢 氧 化 钠
４．００ｍＬ，用 蒸 馏 水 稀 释 至 刻 度，混 匀，放 置
１５ｍｉｎ［１３］。用紫外－可见分光光度计在５０６ｎｍ 波
长下测定上述溶液的吸光度，以吸光度 Ａ为纵坐
标，稀释后的芦丁标准溶液浓度Ｃ为横坐标，绘制
标准曲线，求算出芦丁标准溶液的回归曲线方程及
相关系数。
１．２．４ 插田泡叶中总黄酮的提取、测定及计算方
法 准确称取约２ｇ插田泡叶粉末置于５００ｍＬ三
角烧瓶中，按一定的乙醇浓度、料液比、回流温度和
提取时间进行回流提取，收集滤液，将滤渣按上述提
取条件再回流提取１次，过滤，合并滤液并用相应浓
度的乙醇溶液定容至１００ｍＬ。准确移取上述提取
液各０．５ｍＬ，按１．２．３的方法显色，并测定吸光度，
将吸光度值代入芦丁标准曲线方程求出待测样品的
浓度，根据公式：样品总黄酮质量（ｍｇ）＝待测样品
浓度×１０×１００／０．５，总黄酮含量（ｍｇ／ｇ）＝样品总
黄酮质量／样品质量，计算各样品总黄酮质量和含
量。
１．２．５ 插田泡叶总黄酮的回流提取工艺试验 试
验选择极性较大、提取率较高的乙醇溶液作为提取
剂，考察有机溶剂浓度、料液比、回流温度、回流时间
对黄酮提取率的影响［７－１３］。各因素水平条件的选择
参照同属植物山莓［１２］和单因素试验结果进行选择，
然后采用正交试验法优化回流提取的最佳条件。用
分光光度计测定５０６ｎｍ波长处吸光度并计算样品
总黄酮含量，作为插田泡叶总黄酮提取指标。
１）单因素试验。Ａ，乙醇浓度的选择。准确称
取４份插田泡叶粉末各２．０００ ０ｇ置于５００ｍＬ三
角烧瓶中，分别加入２０ｍＬ ６０％、７０％、８０％、９０％
的乙醇溶液，控制回流温度８０℃、提取时间２ｈ，按
１．２．４的步骤进行总黄酮的提取、测定及含量计算。
Ｂ，料液比的选择。准确称取４份插田泡叶粉末各
２．０００ ０ｇ置于５００ｍＬ三角烧瓶中，分别按１∶５，
１∶１０，１∶２０，１∶４０的比例加入８０％乙醇溶液，控
制回流温度８０℃、提取时间２ｈ，按１．２．４的步骤进
行总黄酮的提取、测定及含量计算。Ｃ，回流温度的
选择。准确称取４份插田泡叶粉末各２．０００ ０ｇ置
于５００ｍＬ三角烧瓶中，加入２０ｍＬ ８０％乙醇溶液，
分别控制回流温度６０℃、７０℃、８０℃、９０℃，回流提
取２ｈ，按１．２．４的步骤进行总黄酮的提取、测定及
含量计算。Ｄ，提取时间的选择。准确称取４份插
田泡叶粉末各２．０００ ０ｇ置于５００ｍＬ三角烧瓶中，
加入２０ｍＬ ８０％乙醇溶液，回流温度８０℃，分别控
制提取时间为２ｈ、３ｈ、４ｈ、５ｈ，按１．２．４的步骤进
行总黄酮的提取、测定及含量计算。
２）正交试验。在单因素试验的基础上，以乙醇
浓度、料液比、回流温度和提取时间作为４个考察因
素，选取３个水平，采用Ｌ９（３４）正交表进行正交试
验设计（表１）。并按１．２．４的步骤进行插田泡叶总
黄酮的提取、测定及含量计算，以确定总黄酮的最佳
提取条件。
表１ 回流提取插田泡叶总黄酮Ｌ９（３４）正交试验设计
Ｔａｂｌｅ １ Ｌ９（３４）ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ａｒｒａｙ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｌｅａｖｅｓ
ｏｆ Ｒ．ｃｏｒｅａｎｕｓ
水平
Ｌｅｖｅｌ
因素 Ｆａｃｔｏｒ
Ａ乙醇
浓度／％
Ｅｔｈａｎｏｌ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
Ｂ料液比／
（ｇ／ｍＬ）
Ｓｏｌｉｄ－
ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ
Ｃ回流
温度／℃
Ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
Ｄ提取
时间／ｈ
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ｔｉｍｅ
１ ７０ １∶５ ７０ ２
２ ８０ １∶１０ ８０ ３
３ ９０ １∶２０ ９０ ４
１．２．６ 试验方法考察
１）精密度试验。准确吸取芦丁标准溶液１ｍＬ
５份，按１．２．３标准曲线绘制的方法操作，测定吸光
度值，计算相对标准偏差。
２）显色稳定性试验。准确吸取插田泡叶２号
样品溶液０．５ｍＬ至１０ｍＬ比色管中，加蒸馏水至
２．４ｍＬ，按１．２．３的方法显色，用不加ＮａＮＯ２的溶
液做空白，每１０ｍｉｎ测定１次吸光度，共测５次，计
算总黄酮含量，求相对标准偏差。
３）方法重现性试验。精确称取２．００ｇ插田泡
叶粉末５份，按正交试验筛选出的最佳提取条件进
行总黄酮提取。精密吸取上述插田泡叶提取液
０．５ｍＬ，置 于 １０ ｍＬ 比 色 管 中，加 蒸 馏 水 至
２．４ｍＬ，按１．２．３的方法显色，测定吸光度，计算总
·５４１·
蒋华梅 等 回流提取插田泡叶总黄酮的条件优化
ＪＩＡＮＧ Ｈｕａｍｅｉ ｅｔ ａｌ Ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｏｔａｌ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｌｅａｖｅｓ ｏｆ Ｒｕｂｕｓ ｃｏｒｅａｎｕｓ
黄酮含量，求相对标准偏差。
４）回收率试验。精确称取２．００ｇ插田泡叶粉
末５份，按正交试验筛选出的最佳提取条件进行总
黄酮提取。准确吸取上述插田泡叶提取液０．５ｍＬ，
置于１０ｍＬ比色管中，各加芦丁标准品溶液１ｍＬ，
按１．２．３的方法显色，测定吸光度，计算总黄酮含
量，求相对标准偏差。
５）验证试验。精确称取２．００ｇ插田泡叶粉末
３份，按正交试验筛选出的最佳提取条件进行总黄
酮提取。准确吸取上述插田泡叶提取液０．５ｍＬ，置
于１０ｍＬ比色管中，加蒸馏水至２．４ｍＬ，按１．２．３
的方法显色，测定吸光度，计算总黄酮含量。
２ 结果与分析
２．１ 不同因素对插田泡叶总黄酮提取的影响
２．１．１ 乙醇浓度 由表２可知，当乙醇浓度为
６０％～８０％时，随乙醇浓度升高总黄酮提取率升高，
但当乙醇浓度超过８０％后提取率稍有下降。由此
可知，乙醇浓度不宜过高，浓度过高会造成提取率降
低，且会增加提取成本。
２．１．２ 料液比 由表２可知，料液比与总黄酮提
取率成正比，当料液比在１∶５～１∶１０时，插田泡叶
总黄酮的提取率增加十分显著，超过１∶１０后提取
率增加缓慢。由此可知，随着提取溶剂用量的增加，
粗提物中总黄酮有效成分的浓度随之增大，但达到
一定比例后，浓度增大趋势不明显。
２．１．３ 回流温度 回流温度６０～８０℃，总黄酮提
取率随温度的升高而显著增大（表２），但温度为
９０℃时提取率降低。由此可知，回流温度过高，粗提
物中总黄酮有效成分的浓度随之降低。
２．１．４ 提取时间 由表２可知，总黄酮提取率随
提取时间的增加而增大，可见提取时间越长总黄酮
提取越充分，但当时间超过４ｈ时，提取率增长较
小，趋于稳定。由此可知，提取率与提取时间成正
比，但当达到一定提取时间后，提取率变化不大。
表２ 不同因素下插田泡叶总黄酮的提取率
Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
Ａ乙醇浓度／％
Ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
浓度／％
Ｃｏｎｃｅｎｔ
ｒａｔｉｏｎ
总黄酮含量ｍｇ／ｇ
Ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｃｏｎｔｅｎｔ
Ｂ料液比／（ｇ／ｍＬ）
Ｓｏｌｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ
比例／
（ｇ／ｍＬ）
Ｒａｔｉｏ
总黄酮含量ｍｇ／ｇ
Ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｃｏｎｔｅｎｔ
Ｃ回流温度／℃
Ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
温度／℃
Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
总黄酮含量ｍｇ／ｇ
Ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｃｏｎｔｅｎｔ
Ｄ提取时间／ｈ
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ
时间／ｈ
Ｔｉｍｅ
总黄酮含量ｍｇ／ｇ
Ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｃｏｎｔｅｎｔ
６０ ２２．４６４ ２ １∶５ ８．９８５ ７ ６０ ２０．２１７ ７ ２ ２５．６９６ ２
７０ ２７．２０３ ４ １∶１０ １５．７２４ ９ ７０ ２６．７１０ ６ ３ ３１．９４２ ６
８０ ３１．４４９ ８ １∶２０ １５．９３３ １ ８０ ３２．９５７ ０ ４ ３８．１８９ １
９０ ３０．４５２ １ １∶４０ １６．２２２ ８ ９０ ２９．６９６ ２ ５ ３８．２１２ ０
２．２ 最佳工艺条件
由表３可知，各因素的极差大小顺序为ＲＤ＞
ＲＢ＞ＲＣ＞ＲＡ，４个因素对插田泡叶中总黄酮提取率
的影响大小依次为提取时间（Ｄ）＞料液比（Ｂ）＞回
流温度（Ｃ）＞乙醇浓度（Ａ）。极差分析表明，４个因
素中，提取时间的影响作用最显著，其次是料液比和
回流温度，影响最小的是乙醇浓度。根据４个因素
的Ｋ１、Ｋ２和Ｋ３值的大小可知，Ａ因素Ａ１＞Ａ２＞
表３ 回流提取插田泡叶总黄酮Ｌ９（３４）正交试验结果
Ｔａｂｌｅ ３ Ｌ９（３４）ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ａｒｒａｙ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｌｅａｖｅｓ
ｏｆ Ｒ．ｃｏｒｅａｎｕｓ
试验号
Ｎｏ．
Ａ Ｂ Ｃ Ｄ 总黄酮含量ｍｇ／ｇ
Ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｃｏｎｔｅｎｔ
１ １ １ １ １ ２３．１９６ ８
２ １ ２ ２ ２ ４４．９２８ ３
３ １ ３ ３ ３ ３２．２８７ １
４ ２ １ ２ ３ ３２．３２５ ７
５ ２ ２ ３ １ ２６．９５１ ５
６ ２ ３ １ ２ ３８．６４２ ０
７ ３ １ ３ ２ ２６．６０４ ２
８ ３ ２ １ ３ ３６．８７９ ７
９ ３ ３ ２ １ ２９．９６５ ２
Ｋ１ ３３．４７１ ２７．３７６ ３２．９０６ ２６．７０５
Ｋ２ ３２．６４０ ３６．２５３ ３５．７４０ ３６．７２５
Ｋ３ ３１．１５０ ３３．６３１ ２８．６１４ ３３．８３１
Ｒ ２．３２１ ８．８７７ ７．１２６ １０．０２０
Ａ３，Ｂ因素Ｂ２＞Ｂ３＞Ｂ１，Ｃ因素Ｃ２＞Ｃ１＞Ｃ３，Ｄ因素
Ｄ２＞Ｄ３＞Ｄ１。因此，乙醇回流提取插田泡叶总黄酮
的最佳工艺条件为Ａ１Ｂ２Ｃ２Ｄ２，即乙醇浓度７０％、料
液比１∶１０、回流温度８０℃、提取时间３ｈ，在此试验
条件下，总黄酮提取率为４４．９２８ ３ｍｇ／ｇ。
２．３ 试验方法验证
根据１．２．３芦丁标准曲线的绘制方法，求算出
芦丁标准溶液的回归曲线方程为Ａ＝１０．９１１ ４×
Ｃ＋０．０２９ ３（Ａ 为吸光度、Ｃ 为浓度 ｍｇ／ｍＬ），
ｒ＝０．９９７，说明芦丁标准品在０．０１～０．０６ｍｇ／ｍＬ，
芦丁质量浓度与吸光度线性关系良好；平均加样回
收率为１００．１２％，ＲＳＤ＝０．７０％（ｎ＝５）；精密度、重
现性和稳定性试验测定的ＲＳＤ分别为０．６６％（ｎ＝
５）、１．７８％（ｎ＝５）和１．１５％（ｎ＝５），说明该方法测
定插田泡叶中总黄酮含量的速度快，结果准确，精密
度高，重复性和稳定性好；按正交试验筛选出的最佳
提取条件进行３次验证试验，插田泡叶中总黄酮含
量平均值为４４．９３１ ３ｍｇ／ｇ，略高于表２中试验结
果，故确定Ａ１Ｂ２Ｃ２Ｄ２为最佳提取工艺条件，按该试
验方法提取插田泡叶中总黄酮的含量稳定，工艺条
件合理且稳定可行，可应用于工业生产中。
３ 结论
正交试验结果表明，乙醇回流提取插田泡叶总
（下转第１５０页）
·６４１·
贵 州 农 业 科 学
Ｇｕｉｚｈｏｕ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
分含量、含盐量等）进行检测，是今后需进一步开展
的研究工作。
［参 考 文 献］
［１］ 刁恩杰．食品安全与质量管理学［Ｍ］．北京：化学工业
出版社，２００８．
［２］ Ａ Ｍ Ｐｅａｒｓｏｎ．ＨＡＣＣＰ ｉｎ Ｍｅａｔ，Ｐｏｕｌｔｒｙ ａｎｄ Ｆｉｓｈ
Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ［Ｍ］．Ｕ．Ｓ．Ａ：Ａｓｐｅｎ，１９９５．
［３］ Ｃａｒｏｌ Ａ Ｗ，Ｓｕｓａｎ Ｃ Ｐ，Ｌｙｎｄａ Ｈ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ
Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｓｔａｎｄａｒｄｉｓｅｄ ＨＡＣＣＰ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ［Ｊ］．
Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｆｏｏｄ Ｊｏｕｒｎａｌ，２００５，１０７（１０）：７２３－７４２．
［４］ Ｉｒｅｎａ Ｊ，Ｒａｊｋａ Ｂ，Ｎｅｖｅｎｋａ Ｋ．Ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ
ＨＡＣＣＰ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＵＨＴ ｍｉｌｋ［Ｊ］．
Ｍｌｊｅｋａｒｓｔｖｏ，２００９，５９（２）：１５５－１７５．
［５］ Ｊ Ｍｅｔａｘｏｐｏｕｌｏｓ，Ｄ Ｋｒｉｔｉｋｏｓ，Ｅ Ｈ Ｄｒｏｓｉｎｏｓ．Ｅｘａｍｉ－
ｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｒｅｌｅｖａｎｔ ｔｏ ｔｈｅ
ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ＧＨＰ ａｎｄ ＨＡＣＣＰ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ Ｇｒｅｅｋ
ｍｅａｔ ｉｎｄｕｓｔｒｙ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｏｋｅｄ ｓａｕｓａｇｅｓ
ａｎｄ ｃｏｏｋｅｄ ｃｕｒｅｄ ｍｅａｔ ｐｒｏｄｕｃｔｓ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ，
２００３，１４（５）：３２３－３３２．
［６］ Ｌａｚａｒ Ｔ，Ｖｏｊｉｎ Ｖ，Ｊｏｓｉｐ Ｂ．ＨＡＣＣＰ ａｎｄ Ｑｕａｌｉｔｙ
Ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｔｈｅ Ｆｏｏｄ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ［Ｊ］．Ｈｅｍｉｊｓ－
ｋａ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｊａ，２００２，５６（４）：１５７－１６２．
［７］ Ｅｓｔｅｂａｎ Ｐ ｒｅｚ，Ａｎｔ ｎｉｏ Ｒａｐｏｓｏ，Ｒａｆａｅｌ Ｍｉｌ ｎ，ｅｔ ａｌ．
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｅｐａｒｅｄ／Ｃｏｏｋｅｄ Ｆｏｏｄｓ
ｉｎ ａ ＨＡＣＣＰ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１１，２（６）：５４９－５５２．
［８］ 王秀娟，张坤生，任云霞．ＨＡＣＣＰ体系在虾仁涂膜保
鲜中的应用［Ｊ］．食品研究与开发，２００８，２９（４）：１６９－
１７３．
［９］ 李艳霞．ＨＡＣＣＰ在“从农田到餐桌”食品供应链中的
应用［Ｊ］．检验检疫科学，２００８，１８（１）：７０－７２．
［１０］ Ａ Ｇｒａｍｚａ，Ｂ Ｎｏｗａｋ，Ｊ Ｋｏｒｃｚａｋ．Ｔｈｅ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ
ＨＡＣＣＰ Ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ Ｍｅａｔ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｏｒ Ｃａｔｅｒｉｎｇ Ｉｎｄｕｓ－
ｔｒｙ ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ Ｐｏｒｋ Ｌｏｉｎ Ｃｈｏｐ［Ｊ］．Ｉｔａｌｉａｎ
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１１，２３（１）：４５－５５
［１１］ 陈 松，冯月荣．发酵肉制品生产加工中 ＨＡＣＣＰ的
应用研究［Ｊ］．食品科技，２００５，２９（４）：２１－２４．
［１２］ 苏秀桃，庄俊杰．ＨＡＣＣＰ系统在冷却肉生产及品质
控制中的应用［Ｊ］．食品科技，２００３（７）：５０－５３．
（责任编辑：孙小岚
櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁
）
（上接第１４６页）
黄酮最佳提取工艺条件为乙醇浓度７０％、料液比
１∶１０、回流温度８０℃、提取时间３ｈ。在此提取条
件下，贵州野生插田泡叶中总黄酮的含量可达
４４．９３１ ３ｍｇ／ｇ。经试验验证，乙醇回流提取插田泡
叶总黄酮的工艺条件稳定性、重现性好，加样回收率
高，具有一定的可行性。
贵州冬季野生插田泡叶中总黄酮的含量高达
４４．９３１３ ｍｇ／ｇ， 远 高 于 文 献 报 道 的
２０２．７９ｍｇ／１００ｇ［１２］，说明黔产野生插田泡叶蕴含丰
富的总黄酮资源。此研究结论可为贵州野生插田泡
资源的开发与利用提供科学依据，对促进贵州野生
插田泡资源的综合利用具有现实意义。
［参 考 文 献］
［１］ 王 芳．福建插田泡果肉营养成分分析［Ｊ］．安徽农业
科学，２００９，３７（３６）：１７９４４－１７９４５．
［２］ Ｋａｚｕｈｉｒｏ Ｏｈｔａｎｉ，Ｃｈｉｋａｋｏ Ｍｉｙａｊｉｍａ，Ｔｏｍｏｋｏ Ｔａｋａｈａ－
ｓｉ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｄｉｍｅｒｉｃ ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅ－ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ ｆｒｏｍ Ｒｕｂｕｓ
ｃｏｒｅａｎｕｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９０，２９（１０）：３２７５．
［３］ 国家中医药管理局中华本草编委会．中华本草（４卷）
［Ｍ］．上海：上海科学技术出版社，１９９９：２４４－２８０．
［４］ 刘明生，李 铣，朱延儒．悬钩子属植物化学成分的研
究概况［Ｊ］．沈阳药学院学报，１９９４，１１（１）：６８－７２．
［５］ 郭雪峰，岳永德．黄酮类化合物的提取分离纯化和含
量测定方法的研究进展［Ｊ］．安徽农业科学，２００７，３５
（２６）：８０８３－８０８６．
［６］ 汪秋安．天然黄酮类化合物的生理功能及其应用［Ｊ］．
香料香精化妆品，１９９９（１）：２８－３３．
［７］ 蒋华梅，黄 维，王向前．黔银杏叶总黄酮水法提取最
优方案的筛选［Ｊ］．贵阳学院学报：自然科学版，２０１１，
６（３）：４２－４６．
［８］ 杨 鹏，巨 敏，朱沛沛，等．正交优化微波辅助提取
枸杞中总黄酮的工艺研究［Ｊ］．食品工业，２０１２（１）：
２８－３０．
［９］ 张吉祥，欧来良．正交试验法优化超声提取枣核总黄
酮［Ｊ］．食品科学，２０１２，３３（４）：１８－２１．
［１０］ 李 群，王 瑾，张会敏．正交试验法优选桑白皮蜜炙
工艺［Ｊ］．中草药，２０１３，４４（３）：２８６－２９０．
［１１］ 吉 欣，陈长亮，张 琳，等．芹菜中黄酮类物质的提
取研究［Ｊ］．现代食品科技，２００６，２２（１）：６１－６３．
［１２］ 李 丹．山莓叶总黄酮的提取、纯化及降血糖作用研
究［Ｄ］．湖南：湖南农业大学，２００９．
［１３］ 包玉敏，康大伟，张 力，等．蒙药材悬钩子木中黄酮
类化合物含量测定及体外抗氧化性研究［Ｊ］．内蒙古
民族大学学报：自然科学版，２０１１，２６（１）：１４－１６．
［１４］ 顾 姻，赵昌民，王传永．贵州省悬钩子属种质资源与
考察［Ｊ］．植物资源与环境，１９９４，３（２）：１－８．
（责任编辑：孙小岚）
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