全 文 :263※分析检测 食品科学 2009, Vol. 30, No. 08
大叶白麻不同部位总黄酮和金丝桃苷含量研究
石秋梅,帕孜来提·吐鲁洪,阿不都拉·阿巴斯 *
(新疆大学生命科学与技术学院,新疆 乌鲁木齐 830046)
摘 要:本研究采用高效液相色谱法(HPLC)测定了大叶白麻叶、花、根和茎四个部位的金丝桃苷含量;以NaAc-
A1C13体系为显色剂,用分光光度法于 400nm处测定了大叶白麻不同部位总黄酮的含量。结果表明:本研究采用
的色谱条件可用来检测大叶白麻体内金丝桃苷。叶中的金丝桃苷含量较高,约为 0.24%,花、茎和根中几乎检测
不出;叶中的总黄酮含量亦较高,约为 3 . 5 4 %,花、茎和根中含量较低。
关键词:大叶白麻;总黄酮;金丝桃苷;高效液相色谱法
Determination of Total Flavonoid and Hyperoside Contents in Different Parts of
Poacynum hendersonii (Hook.f.) Woodson
SHI Qiu-mei,PAZILAT Turuhong,ABDULLA Abbas*
(College of Life Science and Technology, Xinjiang University, Urumqi 830046, China)
Abstract : The hyperoside contents in different parts of Poacynum hendersonii (Hook.f.) Woodson were measured by HPLC
method, and the total flavoniod contents were determined by spectrophotometry at 400-nm wavelength. The results showed that
the hyperoside content in the leaves is higher, about 0.24%, while almost no hyperoside is found in the flowers, stems and roots.
Similarly, the total flavonoid content in the leaves is also higher, about 3.54%, while that is lower in the flowers, stems and roots.
Key words :Poacynum hendersonii (Hook.f.) Woodson;total flavonoids;hyperoside;high performance liquid chroma-
tography (HPLC)
中图分类号:Q623.54 文献标识码:A 文章编号:1002-6630(2009)08-0263-04
收稿日期:2009-01-22
基金项目:新疆大学博士启动基金项目(BS0606105)
作者简介:石秋梅(1976-),女,副教授,博士,主要从事植物有效成分分析研究。E-mail:skysqm@xju.edu .cn
*通讯作者:阿不都拉·阿巴斯(1951-),男,教授,主要从事资源植物研究。E-mail:abdulla@xju.edu.cn
罗布麻是一类重要的野生植物资源,具有极高的药
用价值。因最早发现于新疆罗布泊,故命名为罗布麻[1]。
据《中国植物志》记载 [ 2 ],我国罗布麻主要有三种:
罗布麻(Apocynum venetum Linn.)为罗布麻属,又称红
麻、小花罗布麻;大叶白麻[Poacynum hende rson ii
(Hook.f .) Woodson]为白麻属,又称白麻、大花罗布
麻;白麻(Poaynum pictum Schrenk)为白麻属,又称紫
斑麻、中花罗布麻。新疆是罗布麻的主要分布区,分
布面积和产量分别占全国的 40%和 50%,且主要为大叶
白麻 [ 3 ]。罗布麻含黄酮类化合物、强心苷、生物碱、
氨基酸和多种微量元素(如 K、C a、F e、Z n 等),对
预防和治疗高血压、高血脂、冠心病、哮喘病、气
管炎等疾病有较好的效果。罗布麻叶中的黄酮类化合物
主要为金丝桃苷(槲皮素 3-O-半乳糖苷)、异槲皮苷(槲皮
素 3-O-葡萄糖苷)、芸香苷(芦丁,槲皮素 3-O-芸香糖
苷)及少量槲皮素等[ 4 - 5 ],均为槲皮素与不同糖形成的
苷。金丝桃苷具有抗抑郁活性,是罗布麻叶的主要黄
酮类成分之一。已有研究表明,罗布红麻叶具有抗抑
郁效果[ 6 -8 ],但罗布白麻方面的研究还鲜见报道。本研
究拟比较大叶白麻不同部位总黄酮和金丝桃苷的含量,
以期为开发利用新疆这一药用植物资源提供理论基础。
1 材料与方法
1.1 材料、试剂与仪器
大叶白麻由新疆尉犁罗布麻有限公司提供,新疆大
学生命科学与技术学院生物科学系鉴定为白麻属植物大
叶白麻[Poacynum hendersonii (Hook. F.) Woodson],为
成熟的植株,分叶、根、茎和花四个部位,其中,
茎指植株的上半部分枝条。
石油醚、乙醇和甲醇等有机溶剂均为分析纯;金
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丝桃苷对照品(标准编号:111521) 中国药品生物制品
检定所;实验用水为蒸馏水。
日本岛津LC-201OA-VP高效液相色谱仪;索氏提取
器;八两装中药材 DG160型粉碎机。
1.2 样品供试液制备
精密称取大叶白麻不同部位粉碎样品(叶 2.0054g、
花 2.0100g、上部茎 2.0061g、根 2.0180g),置于 250ml
索氏提取器中,加石油醚脱脂 4~5h,脱脂后凉干,然
后回流提取 2次(加 70%乙醇,两次各提取 2h,水浴温
度 7 0℃)。提取液过滤并浓缩至一定体积,然后转至
100ml容量瓶中,用 70%乙醇定容,摇匀备用。提取
液经 0.45μm微孔滤膜过滤,即可上高效液相色谱仪测
金丝桃苷。
1.3 对照品溶液制备
精密称取金丝桃苷对照品 10.64mg,用70%乙醇溶解
并定容于 50ml容量瓶中,制成 0.2128mg/ml金丝桃苷溶
液,保存于 4℃冰箱备用。以下总黄酮含量测定(1.4.1)和
金丝桃苷含量测定(1.5.2)均用此对照品溶液。
1.4 总黄酮含量测定
1.4.1 黄酮标准曲线制备
从对照品溶液中分别移取 0.5、1、2、3和 4ml溶
液,置于 10ml的容量瓶中,加入 1.5ml NaAc 和 0.5ml
AlCl3,摇匀,放置 20min后,加 70%乙醇定容至刻度。
然后用分光光度计于 400nm波长处测吸光度[9]。
1.4.2 样品总黄酮含量测定
分别精密移取叶、花、根和茎的提取液各 1ml,置
于 10ml容量瓶中,与 1.4.1方法操作,于 400nm波长处
测定吸光度,根据标准曲线计算含量。
A+0.0052
总黄酮含量 =——————
0.125M
式中:A 为吸光度;M 为样品质量( g )。
1.5 金丝桃苷含量的测定
1.5.1 色谱条件
参考贯叶金丝桃中金丝桃苷含量的测定方法[10]。具
体条件如下:以十八烷基硅烷键合硅酸为填充柱;以乙
腈 -0.1%磷酸溶液(16:84,V/V)为流动相;检测波长为
360nm;流速 1.0ml/min;柱温 40℃。
1.5.2 金丝桃苷标准曲线制备
精密量取对照品溶液 1 .0、2 .0、3 .0、4. 0、5 .0、
6.0与 7.0ml,分别置于 10ml容量瓶中,各加 70%乙醇
至刻度。按 1 .5.1 色谱条件,各取 10μl 进样测定。
1.5.3 样品金丝桃苷含量测定
移取叶、花、茎和根提取液各 10μl,按 1.5 .1色
谱条件进样测定。分两批测定,叶提取液第一批测定,
根、茎和花提取液为第二批。除磷酸浓度外,两批的
色谱条件完全相同。前后两批的磷酸浓度(0.1%磷酸溶
液)分别以质量百分比和体积百分比计算。
Y-7.9633.3
金丝桃苷含量(%) =————————
1958400M
式中:Y 为峰高积;M 为样品质量( g )。
2 结果与分析
2.1 黄酮标准曲线
采用 1.4.1方法测定。以浓度(μg/ml)为横坐标,吸
光度为纵坐标进行线性回归,得吸光度 - 浓度标准曲线
(图 1),其回归方程(n=5)为:y= 0.0125x- 0.0052,r =
0.9989。
2.2 大叶白麻不同部位总黄酮含量
大叶白麻叶、花、茎和根的总黄酮含量见下表 1。
结果表明,叶片中含量较高,花、茎和根中含量很低。
部位 叶 花 茎 根
总黄酮含量(%) 3.54 0.44 0.56 0.33
表1 大叶白麻不同部位的总黄酮含量
Table 1 Total flavonoid contents in different parts Poacynum
hendersonii (Hook. f.) Woodson
2.3 大叶白麻不同部位的色谱图及金丝桃苷含量
分两批上液相色谱仪进行测定,其中,叶提取液
第一批测定,根、茎和花提取液为第二批。
2.3.1 对照品和大叶白麻叶色谱图
叶第一批测定,从金丝桃苷对照品图 2 可以看出,
对照品金丝桃苷保留时间为 4.9min。从叶片提取液色谱
图(图 3 )可以看出,叶片中可以检测到金丝桃苷。
2.3.2 对照品和大叶白麻花、根和茎色谱图
根、茎和花提取液在第二批进样测定,金丝桃苷
对照品和各部位样品提取液色谱图见图 4~7。从图 4可
知,两次进样金丝桃苷的保留时间均为 25.66min。从花
图1 黄酮标准曲线
Fig.1 Standard curve for determining total flavonoids
0.3
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
吸
光
度
浓度(μg/ml)
0 5 10 15 20
y=0.0125x- 0.0052
r=0.9989
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(图 5)、茎(图 6)和根(图 7)色谱图可看出,根和茎中均未
检测到金丝桃苷,花中也几乎检测不到。
2.3.3 金丝桃苷标准曲线
按照 1.5.3方法测定。以浓度 X(μg/ml)为横坐标,
峰面积 Y为纵坐标进行线性回归,得峰面积 -浓度标准
曲线(图 8),其回归方程(n=7)为:Y=19584X+79633.3,
r = 0.999。
2.3.4 大叶白麻不同部位金丝桃苷的含量
将样品提取液的峰面积代入 2.3.3中回归方程,即
可计算出金丝桃苷的含量。大叶白麻不同部位的金丝桃
苷含量见表 2。
部位 叶 花 茎 根
金丝桃苷含量(%) 0.24 未测出 未测出 未测出
表2 大叶白麻不同部位的金丝桃苷含量
Table 2 Hyperoside contents in different parts of Poacynum
hendersonii (Hook. f.) Woodson
图2 对照品色谱图(第一批)
Fig.2 HPLC chromatogram of standard hyperoside (determined early)
200
150
100
50
0
4.
94
4
m
V
时间(min)
0 1 2 3 4 5 6 7
图3 叶片提取液色谱图
Fig.3 HPLC chromatogram of extract of Poacynum hendersonii
(Hook. f.) Woodson leaves
100
75
50
25
0
4.
96
6
m
V
时间(min)
0 2.5 5 7.5
图5 花提取液色谱图
Fig.5 HPLC chromatogram of extract of Poacynum hendersonii
(Hook. f.) Woodson flowers
40
30
20
10
0
27
.9
33
m
V
时间(min)
0 5 10 15 20 25
3.
39
5
6.
76
7
8.
25
2
12
.2
12
17
.3
47
18
.4
24
15
10
5
0
m
V
时间(min)
0 5 10 15 20 25
12
.2
01
17
.0
37
18
.4
45 27
.9
28
图6 茎提取液色谱图
Fig.6 HPLC chromatogram of extract of Poacynum hendersonii
(Hook. f.) Woodson stems
图7 根提取液色谱图
Fig.7 HPLC chromatogram of extract of Poacynum hendersonii
(Hook. f.) Woodson roots
5
2.5
0
m
V
时间(min)
0 5 10 15 20 25
2.
98
0
3.
34
1
6.
75
6
10
.1
76
12
.2
92
14
.2
31
21
.8
88
图4 对照品两次进样的色谱图(第二批)
Fig.4 HPLC chromatogram of standard hyperoside (determined
after some standing time)
50000
25000
0
25
.6
62
μ
V
时间(min)
0 10 20 30
25
.6
56
a
b
a .第一次;b .第二次。
50000
25000
0
图8 金丝桃苷标准曲线
Fig.8 Relationship between hyperoside concentraction and its
HPLC peak area
4
3
2
1
0
峰
面
积
(×
10
6 )
0 50 100 150
金丝桃苷浓度(μg/ml)
Y=19584X+79633.3
r=0.999
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3 结论与讨论
3.1 测定总黄酮含量时,多选择芦丁作为对照品,该
物质价格较便宜且较易获得。但有研究表明,罗布麻(罗
布红麻和罗布白麻)叶中的芦丁含量极少(约 0.07%)[11-12],
其主要的黄酮类成分为金丝桃苷和异槲皮苷。因
此,本实验在测定总黄酮含量时,选用了金丝桃苷
作为对照品。
3.2 本实验采用 HPLC法测定金丝桃苷含量,主要参
考了贯叶金丝桃苷中金丝桃苷含量测定[10]方法,并略有
修改。结果表明,该方法可以用来检测大叶白麻体内
金丝桃苷的含量,其中,叶中含量较高,花、根和
茎中几乎检测不到。
3.3 现在市场上销售的罗布麻茶有叶茶和花茶两种,
前者主要以大叶白麻叶为原料,后者以大叶白麻花为原
料。由本实验结果可知,大叶白麻叶中的总黄酮和金
丝桃苷含量较高,而花中的含量很低。叶菊等对罗布
麻(Apocynum venetum Linn.)不同部位总黄酮含量的测定
结果也表明,叶中含量最高[ 1 3 ]。因此,以黄酮类作为
主要药用保健成分时,罗布麻叶茶效果优于花茶。
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