全 文 ：· 198· China Pharm acy 2009 Vol.20 No.3 中国药房 2009年第 20卷第 3期
Δ海南省重点科技项目计划(06201)
*助教 ,硕士。研究方向:新药研发。电话:0898-31350722。E-
mail:jnmaomao2004@163.com
#通讯作者:教授 , 硕士。研究方向:中药质量标准与安全性评价
及中药药动学。电话:0898-66895337。E-mail:jun-qzhang2004@
56.com
HPLC 法测定黎药山苦茶中没食子酸的含量 Δ
毛彩霓* ,杨卫丽 ,赖伟勇 ,张俊清 #(海南医学院/海南省热带药用植物研究开发重点实验室 ,海口市 571101)
中图分类号 R284.1;R927.2 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2009)03-0198-02
摘 要 目的:建立以高效液相色谱法测定黎药山苦茶中没食子酸含量的方法 。方法:色谱柱为 C18(250 mm×4.6 mm , 5μm),流
动相为甲醇-0.1%磷酸(5∶95),检测波长为 272 nm ,柱温为 30 ℃,流速为 1.0 mL ·min -1;以外标法计算样品含量 。结果:没食
子酸检测浓度在 5 ～ 60 μg ·mL -1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r =0.999 2);平均回收率为 99.07%, RSD =2.80%
(n =9)。结论:本方法简便 、快捷 ,可用于山苦茶中没食子酸的含量测定 。
关键词 黎药;山苦茶;高效液相色谱法;没食子酸;含量测定
Determination of Gall ic Acid in Hainan Mallotus f uret ianus by HPLC
M AO Cai -ni , YANG Wei-li , LAI Wei-yong ,ZHANG Jun -qing(Hainan Medical Co llege ,Key Laborat ory o f
Hanan Inst itute fo r Resea rch and Development o f T ropical Plant Aamedica ,Haikou 571101 ,China)
ABSTRACT OBJECTIV E:T o establish a HPLC method fo r the determination of gallic acid in Mallotus f uret ianus.METH_
ODS :The sample w as de termined by HPLC on C 18 colum n(250 mm×4.6 mm , 5μm)using MeOH-0.1%H 3PO 4(5∶95)as a
m obile phase at a flow ra te of 1.0 mL ·min -1.The UV detection w aveleng th w as set a t 272 nm and the co lumn temperature
w as set at 30 ℃.RESULTS:The linear range of gallic acid w as 5 ～ 60μg ·mL -1(r =0.999 2)and t he average recovery w as
99.08%(RSD =2.80%, n =9).CONCLUSION :The established method is accura te , rapid and suitable fo r the de te rmination
o f gallic acid in Ma llotus f uret ian us.
KEY WORDS Medicine o f the Li nationality ;Ma llotus f uret ianus ;HPLC ;Gallic acid;Content dete rmination
但超声提取法较为简便 ,故采用超声提取法提取样品 。
3.2 提取时间的选择
笔者考察了超声提取 15 、30 、45 min的结果 , 发现提取 30
m in 就已将样品中咖啡酸提取完全 , 故将提取时间定为 30
m in 。
3.3 流动相的选择
笔者参考 2005年版《中国药典》(一部)“蒲公英”项下的流
动相及文献 [3 ～5 ] 报道的流动相进行试验 , 考察了甲醇-水系
统 、乙腈-水系统 、甲醇-磷酸盐缓冲液系统 。最终选定甲醇-
乙腈-水系统作为流动相 , 得到的供试品色谱中咖啡酸峰形较
好 ,与其它组分均可达到基线分离 ,阴性对照亦无干扰 。
参考文献
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(第 8册)[ S] .北京:化学工业出版社 , 1995:151.
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绿原酸 、咖啡酸的含量[ J].中国药房 ,2007 ,18(12):912.
(收稿日期:2008-02-12 修回日期:2008-04-03)
山苦茶 , 大戟科灌木 , 野桐属植物 , 学名 Mallotus f ureti_
anus(Baill.)Muell.-Arg.别名禾姑茶 、鹧鸪茶等 ,广泛分布于
海南万宁、保亭等地 ,为海南民间喜用的茶饮料及药材 [1] 。民间
主要用其去油腻 、治疗肝胆疾病。曾有人从该药材中分离得到
多种化学成分 [2 ] ,但其有效成分目前尚不明确 ,未有文献报道 。
黎药是海南特有资源 。与藏药 、蒙药等民族药相比 ,黎药始
终是一块处女地 , 尚未被开发利用 。为了挖掘其丰富的药用资
源 , 笔者建立了黎药山苦茶中指标成分没食子酸的含量测定方
法 ,旨在为今后开发利用该药材奠定科学基础 。
1 仪器与试药
LC-6AD 型高效液相色谱 (HPLC)仪 , 包括 SPD -
10Avp紫外检测器 、CTO -10ASV P恒温箱 、N2010色谱工作站
(日本岛津仪器公司);BS210型电子天平 (上海精密仪器仪表
有限公司);KQ2200E型超声波清洗器(南京安铎贸易有限责
任公司);UV -1600型紫外分光光度计(北京瑞利分析仪器公
司)。甲醇、乙腈为色谱纯 ,盐酸 、磷酸为分析纯;没食子酸对照
品(中国药品生物制品检定所 ,批号:110831-200302);山苦茶
(采于海南万宁市 , 经中国医学科学院药用植物研究所兴隆分
所陈伟平教授鉴定为真品)。
2 方法与结果
中国药房 2009年第 20卷第 3期 Ch ina Pharmacy 2009 V ol.20 No.3 · 199·
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2.1 色谱条件
色谱柱:C 18(250 mm×4.6 mm , 5 μm);流动相:甲醇-
0.1%磷酸(5∶95);检测波长:272 nm;柱温:30 ℃;流速:1.0
mL ·min -1;进样量:20μL 。色谱见图 1。
2.2 检测波长的选择
量取没食子酸对照品溶液 2 mL , 置于 25 mL 容量瓶中 ,
用甲醇定容至刻度 ,摇匀 。以纯甲醇作参比 ,在 200 ～ 400 nm 波
长范围内扫描 。结果表明 ,没食子酸在 272 nm 波长处有最大吸
收 ,故拟定本方法的检测波长为 272 nm 。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取没食子酸对照品 0.01 g , 置于 25 mL 容量瓶中 ,
加入无水甲醇 ,超声溶解 ,并用 50%甲醇稀释至刻度 ,摇匀 , 即
得(每 1 mL 含 0.40 mg 没食子酸)。
2.4 供试品溶液的制备
精密称取样品 0.50 g ,加入 20%盐酸 50 mL , 沸水浴加热
提取 3 h ,冷却 ,过滤于 100 mL容量瓶中 ,用水定容至刻度 ,摇
匀 。精密吸取 10 mL ,置于 50 mL容量瓶中 ,用 50%甲醇定容
至刻度 ,摇匀 ,即得 。
2.5 检测限与定量限测定
吸取对照品溶液 20μL 注入色谱仪 , 当进样浓度为 0.02
μg ·mL -1时 , 主峰的信噪比为 3 , 即没食子酸的检测限为
0.002 μg ·mL -1 ×20 μL =0.04 ng ;当进样浓度为 0.032
μg ·mL -1时 , 主峰的信噪比为 10 , 即定量限为 0.032 μg ·
mL -1 ×20 μL=0.64 ng 。
2.6 线性关系考察
分别精密吸取对照品溶液 0 、0.25 、0.50 、0.75 、1.00 、1.50
mL , 置于 10 mL量瓶中 , 加 50%甲醇分别制成没食子酸浓度
为 0 、10 、20 、30 、40 、60μg ·mL -1的溶液 。取上述溶液各 20 μL
注入色谱仪 , 以峰面积积分值(Y )对浓度(X)进行线性回归 ,
得回归方程为 Y =34 888X —43 167(r =0.999 2)。结果表明 ,
没食子酸的检测浓度在 5 ～ 60μg ·mL -1范围内与峰面积积
分值呈良好线性关系 ,
2.7 精密度试验
精密吸取对照品溶液 20μL 注入色谱仪 , 记录色谱图 , 重
复 5次 。结果 , R SD =1.4%,表明仪器精密度良好 。
2.8 稳定性试验
分别于 1 、4 、8 、24 、48 、72 h吸取供试品溶液 20μL 注入色
谱仪 ,记录色谱图 。结果 , R SD =1.1%,表明供试品溶液在 72
h 内稳定性良好 。
2.9 重现性试验
精密称取样品 0.45 g ,共 6份 ,照“2.4”项下方法制备供试
品溶液 ,分取上述溶液 20μL 注入色谱仪 ,记录色谱图 。结果 ,
RSD=1.2%,表明方法重现性良好 。
2.10 加样回收率试验
精密称取已知含量的样品 0.25 g , 共 9份 , 每 3份分别加
入没食子酸对照品 2.5 、5.0 、11.5 mg , 照“2.4”项下方法制备
供试品溶液 。取上述各溶液 20 μL 注入色谱仪 , 测定并记录色
谱图 ,计算加样回收率 ,结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果(n=9)
Tab 1 Recovery of galic ac id(n=9)
样品含量/mg 加入量/mg 测得量/mg 回收率/ % x/ % RSD/ %
6.74 2.5 9.21 98.80
99.08 2.80
6.74 2.5 9.12 95.20
6.74 2.5 9.32 103.20
6.74 5.0 11.62 97.60
6.74 5.0 11.50 95.20
6.74 5.0 11.80 101.20
6.74 11.5 18.14 99.13
6.74 11.5 18.36 101.04
6.74 11.5 18.28 100.34
2.11 样品含量测定
精密称取 3批样品 ,每批 3份 ,每份 0.45 g ,照“2.4”项下
方法制备供试品溶液 。分取上述溶液 20μL注入色谱仪 , 记录
色谱图 。结果 , 3批样品中没食子酸的含量在 2.66%～ 2.76%
范围内 ,平均含量为 2.71%。
3 讨论
本试验曾对甲醇 、乙醇与盐酸 3种提取溶剂进行筛选 。结
果表明 , 样品在盐酸介质中没食子酸的提取率最高 , 故选用盐
酸作为提取溶剂 。另对盐酸溶液的浓度(5%、10%、20%、30%)
进行筛选 。结果表明 , 在 20%盐酸酸性条件下 , 样品中没食子
酸的提取率最高 ,故选用 20%盐酸提取样品 。
试验曾对样品提取时间分别设为 1 、2 、3 、4 h进行筛选。结
果表明 , 样品置沸水浴提取 3 h没食子酸的提取率最高 , 故选
用沸水浴 3 h来提取样品 。
试验结果表明 ,本方法简便 、快捷 ,可用于山苦茶中没食子
酸的含量测定 。
参考文献
[ 1] 陈焕镛.海南植物志(第 2卷)[M ] .北京:科学出版社 ,
1965:156.
[ 2] 林连波 , 符小文 ,艾朝晖 , 等.海南山苦茶叶的化学成分
研究 Ⅰ[ J] .中国中药杂志 , 2006 , 31(6):477.
(收稿日期:2008-02-16 修回日期 2008-09-04)