全 文 ：综合专辑
广西师范大学学报
J O UR NL A OF G U A N GX I N OR M AL U N IV R E ST I Y 19 99年第 2 期
王棕胚组织培养研究
王 秉 新
(广西师范大学 )
王棕树 (尺卿 t on 。 ,么明 .认 (月丑K ) 0 . ;I’ . Q义〕代 , 又名大王椰子树 〕株高叶阔 , 四季常青 , 是
个优 良的风景树品种 ,但因为这种树多为不育株 , 种苗难 以大量繁殖 。 本试验试图通过组织培
养的方法 , 开辟王棕育苗的新途径 , 以促进其广泛种植 ,美化环境 。 经过研究 , 我们已成功地由
胚组织诱导 出愈伤组织和胚状体 , 同时还分化出了少量试管苗 。 现简要报道如下 :
1 材料和方法
采集王棕的种子 , 选出饱满坚硬 、黑色的成熟种子 , 剥去外壳 , 备用 。
培养基用 M S 为基本培养基 , 添加不 同的激素物质 , 配制成 培养基 工、 培养基 n 、 培养基
m
、培养基W ;去分化培养基为 :
( 1 ) M S + N A A ( Z m g L/ ) + B A ( l m g L/ )
( 2 ) M S + 石油助长剂 ( 0 . 3 2m lL/ )
各培养基均在 l . s k g c/ m Z 下高压灭菌 1 5m in .
接种前 ,种子先在 75 % 酒精中消毒 4m in ,再在 0 . 2 % 升汞溶液 中消毒 1 0m in , 用水 冲洗干
净后用漂白粉过饱和上清液在超净工作台上浸泡 5一 10 im n ,然后用无菌水 冲洗 4 次 。 最后在
无菌条件下用刀片剖开种子 , 切下种胚组织将其接种在培养基上 。
诱导愈伤组织和胚状体的温度为 24 一 25 ℃ , 分化时温度为 25 一 3 0℃ ,每天在室 内用 日光
灯补充照明 8一 1 0 h 。
2 结果及讨论
2
.
1 胚状体的诱导及其植株的生成
接种后 s d 左右 ,胚组织细胞分裂 ,膨胀 , 色泽 由浅黄色变为白色 。 到 巧 d 左右 , 胚组织分
裂成一个细胞团 ,颜色由白色变为绿色 , 但也有部分保持 白色 。 到 4 0 d 左右 ,不论绿的或白色
的细胞团都初步分化出根和芽点 , 即成为胚状体 。 这时 ,再把胚状体全部转人分化培养基中培
养 ,胚状体生长迅速 , 大多数都分化出根和芽 ,约再过 1个半月便得到高 4cnT 的植株 。 每个胚
状体长出的芽最多的为 3 条 ,最少的也有 2 条 。
在分化诱导胚状体过程 中 ,发现部分胚状体长出愈伤组织 ,而且长得较快 ,仅 1d5 便长 出
直径 cI m 的团块 。 然后再过 1 5d 愈伤组织中有根和芽长出 。
2
.
2 愈伤组织 的诱导结果
由胚组织直接诱导愈伤组织较为困难 。 接种的胚组织没有膨胀现象 ,而是萎缩且变成黄
1 2 7
DOI : 10. 16088 /j . i ssn. 1001 -6600. 1999. s1. 045
褐色 。 接种后约 1 个月左右 , 有愈伤组织出现 , 2 个月后长成直径约 I Cm 大小的胶质团块 , 呈
乳白色或淡黄色 ,较干硬 。 在愈伤组织 2 一 3 m m 时 , 转人去分化的培养基中诱导植株 , 其分化
的速度也是很慢 , 分化 l 个半月仅出现个别绿色的芽点和长出一些根 。
2
.
3 诱导植株的三条途径及各 自特点
归纳上述 1 . 1 和 1 . 2 可以得出 ,诱导植株有三条途径 : 第一条途径是胚组织产生胚状体 ,
由胚状体诱导出植株 ,这条途径具有程序简单 ,遗传特性较稳定的优点 ,但繁殖 的苗数不够理
想 。 第二条途径是胚组织诱导成胚状体 、再由胚状体诱导愈伤组织 , 最后由愈伤组织分化出植
株 ,这一途径较易较快得到愈伤组织 , 从理论上说有可能繁殖出很多苗 ,但 由于在形成愈伤组
织时 ,细胞中染色体会发生变异 ,会产生突变株 。 第三条途径是直接从胚组织诱导愈伤组织 ,
再 由愈伤组织分化苗 ,这条途径具有第二条途径的特点 , 但诱导愈伤组织很慢 ,且分化也困难 。
在这三条途径 中 , 第二条途径似应较为可取 ,因其容易获得较多愈伤组织 , 分化出较多 的苗 ,从
而有效地解决种苗繁殖问题 ;同时也可利用突变株来选出新品种 。
2
.
4 诱导频率与培养基
诱导胚状体和愈伤组织的诱导频率与培养基的关系如下表 :
培 养 基 接种胚总数
胚状体 愈伤组织 诱导频率
数量 占总数
3 1
.
3 %
42
.
7 %
10 %
7 1
.
4
`沁
5 1
.
3%
6 6
.
7%
50 供,
4 7
.
4 %
50%
,l丫刁才nU.几ù匕日ì,óM S + 石油助长剂 ( 0 . 3m l L/ )
M S + 2
.
4
一
D (Z m g乃砂 ) + K T (0 . s m g -[/ )
M S + 2
.
4
一
D ( Zm g I/
』
)
M S + N A A ( s
n飞g L/ )
w h i t e + 2
.
4
一
D ( Zm g L/ ) + K T ( ()
.
s m g l/
矛
)
w h i et + 石油助长剂 (0 . 15 n 、 l l/ _ )
占总数
6 9%
2 0%
1 4%
5 0
`沁
3 7%
50 %
805340713
刃犯l)2ǐ只扒`又匡卜ùh
从表中可知 ,不论以 M S 或 w ih t e 基本培养基 , 都有愈伤组织和胚状体形成 , 但诱导频率
是 M S 培养基高于 w hi t e 培养基 ; 同时 ,含有石油助长剂的培养基有利于提高诱导率 。 这可能
是胚状体和愈伤组织的形成与培养基中的含氮量有关 。 在细胞分裂 中蛋 白质合成时 , 需要氮
素作为合成材料 , 可以认为胚状体与愈伤组织的形 成与培养基 中的含氮量成正 比关 系 。 在
M S 培养基 中的 N可 多于 w hi t e 培养基 。 至于石油助长剂是否会分离出 N戌 尚未有定论 ,
但其促进胚状体的生成是显而易见的 。
从表中还可看到 ,在 M S + 石油助长剂和 M S + 2 . 4 一D 的两种培养基中 ,前 者有利于形成
胚状体 ,后者则不利于形成胚状体而利于形成愈伤组织 。 这可能是石油助长剂具有促进胚状
体形成的作用 , 2 . 4 一 D 却有抑制作用 ,但 2 . 4 一 D 能促进细胞分裂形成愈伤组织 。
在实验中还发现 ,石油助长剂诱导根生成的作用特别强 。 在含有石油助长剂去分化培养
基的植株 , 小苗根长得粗壮 ,有的甚至只诱导根的生长而没有芽的形成 。 这可能是石油助长剂
有类似生长素叫噪乙酸的作用 。
参 考 文 献
中国科学院上海植物生理研究所编译 . 植物细胞和组织的培养 . P 150 一 189 .
罗 士韦等 . 植物组织培养在农业上 的应用 , 198 3 .
(责任编辑 刘文俊 )
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