全 文 ：第 30卷第 4期
2010年 8月
林　产　化　学　与　工　业
ChemistryandIndustryofForestProducts
Vol.30 No.4
Aug.2010
HPLC法测定吉林地区三种乌头双酯型
生物碱含量
　　收稿日期:2009-10-30
　　基金项目:吉林省林业厅资助项目(吉林科合字第 03号)
　　作者简介:姜贵全(1975-),男 ,山东菏泽人 ,副教授 ,博士生 ,主要从事植物资源化学方面的研究工作;
E-mail:Jiangguiquan11@163.com。
JIANGGui-quan　　
姜贵全1 , 高文韬 1 , 李亚荣2 , 庞久寅 1
(1.北华大学林学院 , 吉林 吉林 132013;
2.吉林市食品药品检验所 , 吉林 吉林 132013)
摘　要:　采用高效液相色谱法测定吉林地区 3种乌头中乌头碱 、新乌头碱和次乌头碱的含量。
结果表明 , 新乌头碱在 0.001 6～ 2.003 0g/L范围内线性关系良好 , r为 0.999 6;平均加标回收率为
98.6%,相对标准偏差(RSD)1.7%;乌头碱在 0.001 6～1.000 5g/L范围内线性关系良好 , r为 0.999 8;平均加标回收率
为 97.5%, RSD2.8%;次乌头碱在 0.001 6～ 1.000 0g/L范围内线性关系良好 , r为 0.999 5;平均加标回收率为 96.7%,
RSD1.9%。该方法简便易行 , 结果准确可靠 ,经对比分析得出 , 北乌头根中乌头碱(0.192 6%)、新乌头碱(0.465 8%)
和次乌头碱(0.104 5%)含量最高 ,可以作为今后驯化栽培的主要品种。
关键词:　高效液相色谱法;乌头碱;新乌头碱;次乌头碱
中图分类号:TQ351　　　　　　文献标识码:A　　　　　　文章编号:0253-2417(2010)04-0085-04
DeterminationofContentofThreeKindsofDiester-typeAlkaloidsin
AconituminJilinDistrictbyHPLC
JIANGGui-quan1 , GAOWen-tao1 , LIYa-rong2 , PANGJiu-yin1
(1.ForestryColege, BeihuaUniversity, Jilin132013, China;2.JilinFoodandDrugLaborary, Jilin132013, China)
Abstract:Thecontentsofthreekindsofdiester-typealkaloid, namely:aconitine, mesaconitineandhypaconitineinaconitumin
Jilindistrictweremeasuredbyhighperformanceliquidchromatography.Resultsshowedthatcontentofmesaconitinehasagood
linearrelationship(r0.999 6)in0.001 6-2.003 0g/Lwithaveragerecoveryof98.6%, relativestandarddaviation(RSD)
1.7%;Thecontentofaconitinehasagoodlinearrelationship(r0.999 8)in0.001 6-1.000 5g/Lwithaveragerecoveryof
97.5%, RSD2.8%;Thecontentofhypaconitinehasagoodlinearrelationship(r0.999 5)in0.001 6-1.000 0g/Lwith
averagerecoveryof96.7%, RSD1.9%.Thismethodissimple, accurateandreliable, andapplicabletoqualitycontrolof
aconitum.Fromcomparativeanalysis, thecontentsofaconitine(0.192 6%), mesaconitine(0.465 8%)andhypaconitine
(0.104 5%)werethehighestinAconitumkusnezofiReichb.root.Thisshowsthatitmaybeadoptedasthemainvarietyof
domesticationandcultivationinthefuture.
Keywords:HPLC;aeonitine;mesaconitine;hypaconitine
乌头是毛茛科乌头属(Aconitum)植物 ,是民间常用的中草药 ,具有驱寒止痛 、强心麻醉等作用。我
国分布有乌头属植物 208种 ,分布广泛 ,除海南外 ,各省区都有分布 , 北方各省(含河北 、山西 、内蒙古
等)是乌头属的第二大分布中心 ,有 62种 ,吉林省主要分布在中东部地区 [ 1-4] 。乌头多含双酯类二萜生
物碱 ,此类生物碱是其有效成分 ,亦是毒性成分 。由于产地及采收时间的不同 ,各地乌头中生物碱的含
量相差很大 。因此 ,测定乌头植物中生物碱的含量对于评价药材质量及杀虫毒力有着重要的意义 ,本研
究选用 HPLC法对采自吉林地区的北乌头(AconitumkusnezofiReichb.)、黄花乌头(A.coreanum)和蔓乌
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头(A.volubilePal)中不同部位双酯型生物碱含量进行了分析 [ 5-6] 。
1　实验部分
1.1　仪器与试剂
LC-2010A高效液相色谱仪 , CLASS-VP色谱工作站;新乌头碱对照品(批号:799-9001),乌头碱对
照品(批号:0720-9807),次乌头碱对照品(批号:798-9001),由中国药品生物制品检定所提供 ,供含量
测定用;乌头为采集样品 ,吉林市朱雀山。甲醇 、二氯甲烷为色谱纯;水为超纯水;其他试剂均为分析纯。
1.2　色谱条件与系统适用性试验[ 7-8]
色谱柱:AgilentTechnologiesZORBAXExtend-C18 4.6mm×250mm, 5μm;流动相为甲醇-水-氯
仿-三乙胺(体积比 70∶30∶2∶0.1);检测波长 235nm;流速 1.0mL/min;柱温 40℃。理论板数按乌头碱
峰计应不低于 2 000。
1.3　对照品溶液的制备
精密称取经五氧化二磷减压干燥 12h以上的新乌头碱对照品 、乌头碱对照品和次乌头碱对照品各
适量 ,分别加二氯甲烷制成 2g/L的对照品贮备液;再精密量取新乌头碱 、乌头碱和次乌头碱对照品储
备液各适量 ,加二氯甲烷制成含新乌头碱 0.08g/L、乌头碱 0.04g/L、次乌头碱 0.04g/L的混合溶液 ,
作为对照品溶液 。
1.4　供试品溶液的制备
取生药粉末(过 0.423～0.635mm筛)约 0.5g,精密称量 ,置锥形瓶中 ,加 10%氨溶液使其湿润 ,加
入乙醚 20mL,超声波(功率 250W,频率 50kHz)处理 10min,密塞 ,放置过夜 ,过滤 ,残渣用乙醚洗涤 3
次 ,每次 10mL,合并乙醚液 ,挥干 ,残渣加二氯甲烷溶解并转移至 2mL量瓶中 ,加二氯甲烷稀释至刻
度 ,摇匀 ,过滤 ,滤液作为供试品溶液 。
2　结果与讨论
2.1　专属性试验
分别精密吸取供试品溶液北乌头(根)和对照品溶液各 10μL注入液相色谱仪 ,记录色谱图见图 1。
由图 1可见 ,供试品色谱中 ,在与对照品色谱相应的位置上 ,有相同保留时间的色谱峰 ,证明本法可行 。
图 1　对照品(a)及北乌头根(b)两种样品的 HPLC图
Fig.1　HPLCspectraoftwosamplesofreferancesubstances(a)andA.kusnezoffiroot(b)
2.2　线性关系考察
精密吸取对照品贮备液新乌头碱 2.003 0g/L、乌头碱 2.001 0g/L、次乌头碱 2.000 0g/L各适量 ,
用二氯甲烷稀释配成质量浓度分别为新乌头碱:0.001 6、 0.080 1、 0.160 2、 1.001 5、 2.003 0g/L;乌头
碱:0.001 6、 0.008 0、 0.080 0、 0.200 1、 1.000 5g/L;次乌头碱:0.001 6、 0.008 0、 0.080 0、 0.200 0、
1.000 0g/L的溶液 ,摇匀 ,过滤 ,精密吸取滤液各 10μL注入液相色谱仪 ,记录峰面积。以峰面积(A)为
纵坐标 ,其质量浓度(c)为横坐标 ,线性回归 ,新乌头碱的回归方程为:A=673 570.9c+1 310 035.8,
r=0.999 6;乌头碱的回归方程为:A=664 794.6c+1 245 084.2, r=0.999 8 ,次乌头碱的回归方程为:
第 4期 姜贵全 ,等:HPLC法测定吉林地区三种乌头双酯型生物碱含量 87　
A=1 126 970.4c-40 376.0 , r=0.999 5;结果表明 ,新乌头碱在 0.001 6～ 2.003 0g/L范围内峰面积与其
质量浓度呈良好线性关系;乌头碱在 0.001 6～ 1.000 5g/L范围内峰面积与其质量浓度呈良好线性关
系 ,次乌头碱在0.001 6～1.000 0g/L范围内峰面积与其质量浓度呈良好线性关系。
2.3　精密度和稳定性试验
取北乌头(根)按 1.4节方法制备供试品溶液 ,重复进样 5次 ,进样量 10μL在上述色谱条件下求得
新乌头碱峰面积的相对标准偏差(RSD)为 0.5%,乌头碱峰面积的 RSD为 0.3%,次乌头碱峰面积的
RSD为 0.3%,表明精密度较好。取同一供试品溶液 ,在 0、 6、 12、 24、 48h分别进行测定 ,结果表明供
试品溶液在 48h内基本稳定 ,新乌头碱峰面积的 RSD为 0.4%,乌头碱峰面积的 RSD为 0.7%,次乌
头碱峰面积的 RSD为 0.3%。
2.4　重复性试验
取供试品北乌头(根)共 5份 ,分别按 1.4节方法制备供试品溶液进行测定 ,求得新乌头碱含量的
RSD为 1.1%,乌头碱含量的 RSD为 0.8%,次乌头碱含量的 RSD为 1.3%,表明重复性较好 。
2.5　加标回收率试验
精密称取已知含量的样品北乌头(根),新乌头碱质量分数 4.66mg/g,乌头碱质量分数 1.93mg/g,
次乌头碱质量分数 1.04mg/g适量 ,共 6份 ,分别置锥形瓶中 ,分别精密加入新乌头碱对照品贮备液
2.003 0g/L、乌头碱对照品贮备液 2.001 0g/L、次乌头碱对照品贮备液 2.000 0g/L各适量 ,按 1.4节方
法操作 ,得回收率试验溶液 ,依次测定 ,结果见表 1。
表 1　新乌头碱 、乌头碱 、次乌头碱加标回收率试验
Table1　Therecoveryratetestofaddingstandardsampleofmesaconitine, aeonitineandhypaconitine
序号
No.
称样量 /g
amountof
sample
样品
samples
已知含量 /mg
knowncontents
加入量 /mg
dosage
测得量 /mg
measured
content
回收率 /%
recoveryrate
1 0.2513
新乌头碱 mesaconitine 0.17 1.20 2.36 99.17
乌头碱 aconitine 0.49 0.60 1.06 95.00
次乌头碱 hypaconitine 0.26 0.60 0.84 96.67
2 0.2506
新乌头碱 mesaconitine 1.17 1.20 2.35 98.33
乌头碱 aconitine 0.48 0.60 1.06 96.67
次乌头碱 hypaconitine 0.26 0.60 0.83 95.00
3 0.2498
新乌头碱 mesaconitine 1.16 1.20 2.32 96.67
乌头碱 aconitine 0.48 0.60 1.05 95.00
次乌头碱 hypaconitine 0.26 0.60 0.83 95.00
4 0.2476
新乌头碱 mesaconitine 1.15 1.20 2.37 101.67　
乌头碱 aconitine 0.48 0.60 1.09 101.67
次乌头碱 hypaconitine 0.26 0.60 0.86 100.00
5 0.2531
新乌头碱 mesaconitine 1.18 1.20 2.35 98.33
乌头碱 aconitine 0.49 0.60 1.07 96.67
次乌头碱 hypaconitine 0.26 0.60 0.84 96.67
6 0.2529
新乌头碱 mesaconitine 1.18 1.20 2.35 97.50
乌头碱 aconitine 0.49 0.60 1.09 100.00
次乌头碱 hypaconitine 0.26 0.60 0.84 96.67
由表 1数据显示 , 新乌头碱 、乌头碱 、次乌头碱的平均加标回收率分别为 98.6%、 97.5%、
96.7%, RSD分别为 1.7%、 2.8%和 1.9%。说明此方法所测结果准确可靠 ,可适用于乌头的质量
控制。
2.6　样品含量测定
分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各 10μL注入液相色谱仪 ,测定 10个样品中新乌头碱 、乌
头碱 、次乌头碱峰面积 ,按外标法计算其含量(n=5),样品含量以干品计 ,结果见表 2。
由表 2可以看出 ,北乌头的乌头碱 、新乌头碱和次乌头碱含量远高于蔓乌头和黄花乌头 ,而且这 3
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种生物碱主要集中于北乌头的根和花中。而且吉林省北乌头植物资源丰富 ,应加强其作为杀虫剂的基
础性研究[ 9] 。
表 2　10批样品含量测定结果(n=5)
Table2　Thecontentmeasurementresultoftenpiecesofsample
批号
No.
试样
samples
部位　
parts　
平均质量分数 averagemassfraction/%
新乌头碱
mesaconitine
乌头碱
aconitine
次乌头碱
hypaconitine
相对标准偏差 RSD/%
新乌头碱
mesaconitine
乌头碱
aconitine
次乌头碱
hypaconitine
1
2
3
4
北乌头
A.kusnezofi
根 root 0.4658 0.1926 0.1045 0.9 0.7 1.3
花 flower 0.1510 0.2326 0.0418 1.1 1.6 0.7
叶 leaf 0.0842 0.0818 0.0019 1.3 0.9 1.1
茎 stem 0.0050 0.0015 0.0016 1.3 1.1 0.7
5
6
7
蔓乌头
A.volubile
叶 leaf 0.0019 — — 1.7 — —
根 root 0.0074 — — 1.7 — —
茎 stem 0.0015 — 0.0007 1.1 — 2.1
8
9
10
黄花乌头
A.coreanum
叶 leaf — — 0.0007 — — 2.3
根 root 0.0145 — 0.0012 1.3 — 1.9
茎 stem 0.0156 — — 1.5 — —
3　结 论
3.1　新乌头碱在 0.001 6～ 2.003 0g/L范围内线性关系良好 , r为 0.999 6;平均加标回收率为 98.6%,
相对标准偏差(RSD)1.7%;乌头碱在 0.001 6～ 1.000 5g/L范围内线性关系良好 , r为 0.999 8;平均加
标回收率为 97.5%, RSD2.8%;次乌头碱在 0.001 6～1.000 0g/L范围内线性关系良好 , r为 0.999 5;
平均加标回收率为 96.7%, RSD1.9%。该方法简便易行 ,结果准确可靠 ,可适用于乌头的质量控制。
3.2　经对比分析可以看出 ,吉林地区北乌头 、蔓乌头和黄花乌头这 3种乌头品种中 ,北乌头根中乌头碱
(0.192 6%)、新乌头碱(0.465 8%)和次乌头碱(0.104 5%)含量最高 ,杀虫毒性也最大 ,可以作为今
后驯化栽培的主要品种 ,也为植物源农药的开发利用奠定了基础。
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