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白花长寿花组培快繁技术研究



全 文 :中国农学通报 第22卷 第 2期 2006年 2月
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长寿花 (Kalanchoeblossfeldiana)又叫矮生伽蓝
菜、寿星花、假川莲,是景天科伽蓝菜属多年生肉质植
物,原产马达加斯加[1]。长寿花有深红、橙红、粉红、白
色等花色,花期为冬、春两季,其植株小巧玲珑,株型
紧凑,叶片翠绿,花朵密集,是观叶和观花的优良花
卉,一直深得消费者喜爱。长寿花耐干旱,栽培易,装
饰效果好,已成为一种有发展潜力的“新品种花卉”,
前景看好。可用于水培盆栽、微型盆栽、大型盆栽、花
坛布置等室内外栽培。普通的繁殖方法为茎段及叶片
扦插,而用组培方法受季节影响小,繁殖速度快,已成
为一种重要的育苗手段[2]。长寿花的离体繁殖多用叶
片作外植体,以带芽茎段为材料的较少[3~5],而以叶片
为外植体诱导再生植株时间长且后代变异频率高[6]。
品种及外植体类型对离体器官再生成苗有很大影响,
不同基因型的植株有不同的适宜培养基,目前国内主
要是对长寿花的研究在红色长寿花品种上报道较
多[7~8]。作为特殊品种系列的白色长寿花,受到众多追
求个性消费者的青睐[9]。但对其研究的不多[10]。此项试
验以白色长寿花茎段为外植体,研究外植体的建立、
增殖、生根及移栽,以期建立简便、高效且能保持品
种优良性状的离体再生体系,为名优新品种大规模
工厂化生产和快速推广奠定基础
1材料与方法
1.1材料来源
2005年4月7日上午取材,试验材料选自于河南
农业职业学院花木中心,剪中上部枝条带回室内。
1.2外植体表面灭菌
对有腋芽的茎段,去除叶片,留1/3叶柄,剪成
3~5cm左右的带腋芽芽茎段,自来水清洗10min洗
去表面泥土,用洗洁精液浸泡洗涤2~3min,流水冲洗
60min后滤纸吸干水分置于超净工作台上,用体积浓
度70%~75%的酒精灭菌20苗,倒去酒精,再用0.1%
白花长寿花组培快繁技术研究
孙新政,李庆伟,梁明勤
(河南农业职业学院植物科学系,河南中牟451450)
摘 要:以白花长寿花的茎段为试材,通过组织培养进行快繁研究,结果表明,丛生芽的增殖以
MS+BA2.0mg/L+IBA0.1mg/L+GA32.0mg/L+蔗糖 40g/L最适;生根培养用 MS+BA0.1mg/L+IBA
0.4mg/L+GA31.5mg/L+蔗糖40g/L最好。试管苗移栽基质中成活率达99%。
关键词:白花长寿花;组织培养;快速繁殖
中图分类号:S681;Q949.751.1 文献标识码:A
ResearchontheTechnologyofKalanchoeblossfeldianawithWhiteFlower
TissueCultureandRapidReproduction
SunXinzheng,LiQingwei,LiangMingqing
(HenanVocationalColegeofAgriculture,ZhongmuHenan451450)
Abstract:ThestemofKalanchoeblossfeldianawithwhiteflowerwereusedasexplantsintissuecultureto
investigatetheoptimumforitsrapidpropagation.theexperimentalresultsshowedofMSsupplemented
with2.0mg/LBA,0.1mg/LIBA,2.0mg/LGA3and40g/Lsugarforproliferationofthesub-culturedbuds;
MSsupplementedwith0.4mg/LIBA,0.1mg/LBA,1.5mg/LGA3forand40g/Lsugarrooting.Theplantlets
aretransplantedintonutrientmatrixwith99%survivalratio.
Keywords:Kalanchoeblossfeldiana,Tissueculture,Propagation
基金项目:河南农业职业学院科研专项基金“两种植物快繁技术研究与开发”(2005K02178)。
第一作者简介:孙新政,男,1961年生,副教授,主要从事园艺植物栽培、生理研究与教学。E-mail:sunxinzheng@163.com。通信地址:451450河南中牟河南
农业职业学院植物科学系。通讯作者:李庆伟,E-mail:liqingwei2003@163.com,Tel:0371-67290723。
收稿日期:2005-11-09,修回日期:2005-11-13。
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升汞(每升加3滴吐温-80)灭菌7~9min,最后用无菌
水漂洗4~5遍,无菌滤纸吸干水分,用灭过菌的剪刀
剪去带腋芽茎段的两端及叶柄切口与灭菌剂接触部
分后,剪成有腋芽的茎段,接种到初代培养基上,芽
头向上。
1.3培养基
1.3.1芽的诱导培养基 将灭菌后的有腋芽茎段接种
到 MS培养基上,附加体积浓度 3%的蔗糖,质量浓
度0.7%的琼脂,PH5.5~6.0,以专用组培瓶(上海稼丰
园艺用品有限公司生产,型号是ZP5-330广口瓶)为
培养容器,每瓶 30ml培养基,121~123℃高压灭菌
15~20min。
1.3.2芽的增殖与生根培养基 以 MS为基本培养
基,采用 L16(45)设计进行 4因素 4水平的正交实验
(见表1),附加质量浓度0.7%的琼脂。根据设计安排
16组实验,每组接种 5瓶,每瓶接种 3个 1~2cm初
代培养萌发的腋芽,重复3次。
以上培养条件为:温度为(25±1)℃,以日光灯为
光 源 , 每 天 连 续 光 照 10~12h, 光 照 强 度 是
2000~3000Lx,空气相对湿度70%~80%。
1.4瓶苗移栽
在温室中,瓶苗移栽至草炭:珍珠岩:蛭石 =1:1:1
的混合基质中,保持较高空气湿度,基质见干见湿。
1.5增殖率与平均生根数计算
增殖率=增殖芽苗数/接种外植体数,取三次重
复的平均值。平均生根数=生根条数/接种外植体
数。
2结果与分析
2.1芽的诱导过程观察
在接种后7天左右,腋芽开始出现萌动;第10天
时腋芽萌发露出新梢第一对小叶;第20天左右,第
一节茎段长出;30天腋芽长出的两个新梢达 3~5cm
(见图1)。
2.2芽的增殖与生根情况
对表2直观分析可以看出,不同处理间的茎段增
殖与生根差异较大,茎段平均增殖率最高的可达
15.4,最低仅为1;诱导生根的最大平均生根数为7.4
条,而最小平均生根数只有0.6条。说明在不同的激
素水平的组合中,总有对芽的增殖和生根起重要影
响因子的激素。R为极差,其值越大,表示该因素越
重要,R代表处理中最大增殖系数之和与最小增殖
系数之和的差。通过表2可以看出,对芽的增殖各激
素的影响顺序为:BA>IBA> GA3>蔗糖;对生根影
响最大的激素浓度也是 BA,其次是 IBA和蔗糖,
GA3影响最小。
低浓度 BA水平对芽的增殖效果较小,仅为
1.100;随着BA浓度水平的升高,芽的增殖效果也非
常明显,最高可达14.775。但是,在低浓度 BA水平
下,随着生长素IBA浓度水平的增大,长寿花的根数
量明显增多;细胞分裂素BA从低浓度到高浓度变化
过程中,每次随着浓度的递增,IBA同一浓度水平下
平均生根数明显减少,说明激素对植物材料的作用
是相互影响的。GA3对芽的增殖效果随其浓度的增
大而效果也增大,但是对根的诱导也随其浓度的增
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大而增大,但不算明显(为 0.100),这可能与其生理
特性有密切关系9。蔗糖总体来讲,对芽的增殖和生
根诱导效果都影响不大(R=0.250或0.126)。
对L16(45)正交试验进行单因子方差分析,结果
表明,BA表现极显著,IBA表现显著,GA3和蔗糖表
现不显著。这与直观分析基本相吻合。笔者认为,最
适宜的芽增殖培养基是:MS+BA2.0mg/L+IBA
0.1mg/L+GA32.0mg/L+蔗糖40g/L;最适宜生根培养
基是:MS+BA0.1mg/L+IBA0.4mg/L+GA31.5mg/L+蔗
糖 40g/L。因这两种培养基配方并没有在试验中出
现,笔者又对其进行了结果验证,验证结果表明:在
MS+BA2.0mg/L+IBA0.1mg/L+GA3 2.0mg/L+ 蔗 糖
40g/L中芽的增殖率为 11.386(见图 2),略低于试验
最高增殖率;在 MS+BA0.1mg/L+IBA0.4mg/L+
GA31.5mg/L+蔗糖40g/L中平均生根数为6.5(见图
3),和试验最大数基本一致。
2.3瓶苗移栽
长寿花瓶苗移栽须经一周左右时间炼苗。在瓶苗
长之 4~5cm高时,有 6~8条根系,放入温室内,先打
开瓶口,进行瓶内外空气互换后盖上,散射光下 3d;
打开瓶口,加少许水与培养瓶中,直接开口,并逐渐
增加直射光照射,至全见光,计4~5d。炼苗结束后,取
出试管苗,用清水洗去根基部培养基,放入800倍多
菌灵水溶液中浸泡 3~5秒后栽植于配制好的基质
(草炭:珍珠岩:蛭石=1:1:1)中,并浇透水。栽植后保
持较高空气湿度,进行遮荫5~7d,栽植成活率可达
99%(见图4)。
3讨论
(1)在长寿花的茎段组织培养过程中,使用 75%
酒精+0.1%升汞两种灭菌剂同时对外植体进行表面
灭菌,并在0.1%升汞中添加3滴吐温—80,有效地提
高了表面灭菌效果。这对以后其他植物组织培养的表
面灭菌提供了借鉴。
(2)使用茎段培养具有诱导率和生根率高、增殖速
度快、易于移栽等优点。而利用叶片或其他器官进行
培养在培养过程中容易发生不同程度、不同方向和
不确定的变异,且变异的频率较高。茎段培养可以作
为离体繁殖长寿花种苗的重要途径。
(3)不同激素配比对长寿花茎段的增殖和生根有
明显的影响,在生长素浓度相对高时,容易诱导根系
产生。细胞分裂素浓度较高时,可以产生大量从生芽
苗,但以浓度低时,从生芽苗质量好。
(4)正交设计的应用,能大大减少试验次数,同时
准确率也较高。此项试验是通过正交设计来筛选适
宜长寿花茎段增殖和生根的最佳培养基配方,在试
验中取得了事半功倍的效果。由于植物材料的初代
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培养对培养基要求不甚严格,加上初代培养的灭菌
接种等技术的原因,在初代培养中采用正交设计来
筛选增值培养基,可能会因为污染等问题而影响试
验结果。
参考文献
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(责任编辑:秦守亮)
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