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青皮竹中酚酸类
和碳苷黄酮类 HPLC分析方法的建立
马 娜1，刘孟华2，丁林伟3，付卫明1，2，* ，何敬愉1，*
( 1.广州中国科学院先进技术研究所生物工程研究中心，广东广州 511458;
2.南方医科大学药学院，广东广州 510515;
3.广州海关化验中心，广东广州 510623)
收稿日期:2016－01－20
作者简介:马娜( 1988－ ) ，女，硕士，研究方向:食品添加剂与营养控制，E－mail: na.ma@ giat.ac.cn。
* 通讯作者:付卫明( 1976－ ) ，男，副研究员，研究方向:分子药理学，E－mail: wm.fu@ giat.ac.cn。
何敬愉( 1983－ ) ，男，助理研究员，研究方向:天然产物化学，E－mail: jy.he@ giat.ac.cn。
基金项目:国家自然科学基金项目( 81503376) ;广州市科技计划项目( 2014J4100045) 。
摘 要:建立了一种高效液相色谱( HPLC) 法对青皮竹提取物中的三种酚酸和四种碳苷黄酮进行定量分析的方法，并
进行了方法学考察。得到最佳色谱条件为: C18柱( 4.6 mm × 150 mm，5 μm) ，以甲醇: 0.1%磷酸水为流动相，流速为
1.0 mL /min，UV检测波长 254 nm，洗脱程序为 0～10 min，10% ～22%甲醇; 10～30 min，22% ～35%甲醇; 30～40 min，
35% ～60%甲醇。结果表明，对羟基苯甲酸、香草酸、对香豆酸、荭草苷、异荭草苷、牡荆素、异牡荆苷的线性范围分别在
0.08～100、0.04～100、0.25～50、0.24～60、0.22～56、0.06～56、0.12～60 μg /mL 之间，Ｒ2 大于 0.9996，加标回收率在 96% ～
103%之间，ＲSD小于 3%，日内精密度和日间精密度都小于 3.48%，该方法灵敏度高，重复性好，方法学验证符合要求。
此方法可用于青皮竹中三种酚酸和四种碳苷黄酮的含量检测。
关键词:青皮竹，酚酸，碳苷黄酮，HPLC
HPLC method development for analysis of phenolic acids
and flavone C－glycosides in Bambusa textiles McClure
MA Na1，LIU Meng－hua2，DING Lin－wei3，FU Wei－ming1，2，* ，HE Jing－yu1，*
( 1.Bioengineering Ｒesearch Center，Guangzhou Institute of Advanced Technology，
Chinese Academy of Sciences，Guangzhou 511458，China;
2.School of Pharmaceutical Sciences，Southern Medical University，Guangzhou 510515，China;
3.Guangzhou Customs Laboratory，Guangzhou 510623，China)
Abstract: An analytical method based on high performance liquid chromatography ( HPLC ) was developed for
quantification of three phenolic acids and four flavone C－glycosides in Bambusa textiles McClure，and was also
validated.The optimum chromatographic conditions were determined using a C18 column( 4.6 mm × 150 mm，5 μm)
at the detection wavelength of 254 nm and a flow rate of 1.0 mL/min.Mobile phase was a binary eluent of methanol
( A) and 0.1% aqueous phosphoric acid ( v /v) ( B) with gradient conditions as follows: 0～10 min，10% ～22% A，
10～30 min，22%～35% A，30～40 min，35% ～60% A.As a result，p－hydroxybenzoic acid，vanillic acid，p－ coumaric
acid，orientin，isoorientin，vitexin and isovitexin had good linearity( Ｒ2≥0.9996) within range of 0.08～100，0.04～100，
0.25～50，0.24～60，0.22～56，0.06～56 and 0.12～60 μg /mL，respectively.The recoveries of the analytes were between
96% to 103% ( ＲSD ＜ 3% ) ，and the ＲSD of intraday and interday precisions were all less than 3.48% .The method
was of high sensitivity，good reproducibility，and meets the methodological requirements.The method could apply
to determine the contents of three phenolic acids and four flavone C－glycosides in B.textiles.
Key words: Bambusa textiles McClure; phenolic acid ; flavone C－glycosides; HPLC
中图分类号:TS201.2 文献标识码:A 文 章 编 号:1002－0306(2016)14－0090－04
doi:10． 13386 / j． issn1002 － 0306． 2016． 14． 009
竹子是重要的森林资源，不仅在工业、农业等方
面具有很高的经济价值，而且具有食用和多种药用
价值。有研究表明，竹叶中含有多种生物活性成分，
包括黄酮及其苷类、活性多糖、氨基酸、有机酸等，具
有降血脂、降血糖、抗氧化、抗衰老、抗癌等多种生理
功能［1］。
91
青皮竹(Bambusa textiles McClure)属竹亚科
(Bambusoideae)簕竹属(Bambusa)，主要分布在华南
地区，是我国一种常见经济竹种［2］。许周典等人对青
皮竹叶中化学成分进行了研究，鉴定了 12 个酚类化
合物，其中 10 个是黄酮及其苷类［3］。现有的文献一
般采用分光光度法和高效液相色谱法测定竹叶中黄
酮类物质的含量，但是分光光度法测定容易受到花
青素、酚酸等成分的干扰，仅能用于总黄酮含量的测
定。高效液相色谱法在分析过程中存在色谱条件优
化的问题，因为荭草苷和异荭草苷、牡荆素和异牡荆
苷的结构和极性极其相似，样品中的成分很难达到
基线分离［4］。Yu Zhang［5］和 Zhaolin Lv［6］等人采用高
效液相色谱法对竹叶粗提物中的四种碳苷黄酮进行
了定量分析，但没有取得很好的分离效果。郭妍等［7］
人采用 HPLC波长切换法同时测定了淡竹叶中香草
酸、对香豆酸和牡荆素，该方法取得了较好的分离
度，但是波长切换法不够简便。王进［8］采用高效液相
色谱法测定了 7 种簕竹属竹叶中的碳苷黄酮，该方
法未能检测到青皮竹中的荭草苷和牡荆苷。本研究
提出一种简便有效的 HPLC分析方法，建立同时测定
青皮竹提取物中对羟基苯甲酸、香草酸、对香豆酸、
荭草苷、异荭草苷、牡荆素、异牡荆苷的分析方法，并
对此方法进行方法学考察。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
青皮竹(Bambusa textiles McClure) 不同采集点
的 3 批次，分别标为青皮竹－1、青皮竹－2、青皮竹－3，
广东省广宁县;色谱级甲醇 赛默飞世尔科技(中
国)有限公司;荭草苷(纯度≥98%)、异荭草苷(纯度
≥98%)、牡荆素(纯度≥98%)、异牡荆苷(纯度≥
98%) 成都曼斯特生物技术有限公司;对羟基苯甲
酸(纯度纯度≥97%)、对香豆酸(纯度≥97%) 中
国药品生物制品鉴定所;香草酸(纯度≥97%) 阿
拉丁试剂(上海)有限公司。
Agilent 1260 系列高效液相色谱 美国安捷伦公
司;PUＲELAB Classic 超纯水仪 威立雅水处理技术
(上海)有限公司;BS110S 电子天平 瑞士 Sartorius
公司;KQ600DE超声清洗器 昆山市超声仪器有限
公司。
1.2 实验方法
1.2.1 标准品溶液的制备 精密称取标准品至容量
瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀，即得对羟基苯甲酸
(0.1 mg /mL)、香草 酸 (0.1 mg /mL)、对 香 豆 酸
(0.1 mg /mL)、荭草苷 (0.06 mg /mL)、异荭草苷
(0.056 mg /mL)、牡荆素(0.056 mg /mL)、异牡荆苷
(0.06 mg /mL)单标储备液，4 ℃保存不超过一周。
1.2.2 供试品溶液的制备 取 1 g 经干燥、粉碎后
的青皮竹叶－1，精密称定，加入 25 mL甲醇，在室温
条件下超声(600 W，80 kHz)提取 3 次，每次
20 min，过滤后合并滤液，减压浓缩到约 25 mL，转
移至 25 mL容量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀，即得
供试品溶液。
1.2.3 色谱条件 色谱柱 Agilent Eclipse XDB－ C18
column(4.6 mm × 150 mm，5 μm);流动相:甲醇－
0.1%磷酸水;检测波长 254 nm;流速 1.0 mL /min;柱
温 30 ℃;进样量 10 μL。
洗脱程序:0 ～ 10 min，10% ～ 22% 甲醇;10 ～
30 min，22% ～35%甲醇;30～40 min，35% ～60%甲醇。
1.2.4 线性关系考察 精密量取对照品储备液至
10 mL容量瓶，加甲醇至刻度，摇匀，得到对羟基苯甲
酸溶液(0.08、0.4、4、20、50、100 μg /mL)，香草酸溶液
(0.04、0.4、4、20、50、100 μg /mL)、对香豆酸(0.25、1、
2、5、20、50 μg /mL)、荭草苷(0.24、1.2、6、12、30、
60 μg /mL)、异 荭 草 苷 (0.22、1.1、5.6、11.2、28、
56 μg /mL)、牡 荆 素 (0.06、1.1、5.6、11.2、28、
56 μg /mL)、异 牡 荆 苷 (0.12、1.2、6、12、30、
60 μg /mL)，按 1.2.3 中色谱条件进样，记录峰面积，
以浓度(X)对峰面积(Y)进行线性回归，得标准曲线
方程。
1.2.5 重复性、稳定性实验 精密吸取混合标准品
溶液(对羟基苯甲酸 4 μg /mL、香草酸 4 μg /mL、对香
豆酸4 μg /mL、荭草苷6 μg /mL、异荭草苷 5.6 μg /mL、
牡荆素 5.6 μg /mL、异牡荆苷 6 μg /mL)和青皮竹－1
样品溶液各 10 μL，按 1.2.3 色谱条件，同一日重复进
样 5 次，连续进样 3 d，记录峰面积，计算峰面积的
ＲSD值。
1.2.6 加标回收率考察 取青皮竹－1 样品约 1 g，精
密称取，以约 1∶ 1加标量加入 1.0 mL混合标准品溶液
(对羟基苯甲酸 0.07 mg /mL、香草酸 0.14 mg /mL、对
香豆酸 0.03 mg /mL、荭草苷 0.21 mg /mL、牡荆素
0.01 mg /mL、异牡荆苷 0.12 mg /mL)及异荭草苷
1.10 mg，按照 1.2.2 供试品溶液的制备方法及 1.2.3
色谱条件进样，记录峰面积，计算三种酚酸和四种碳
苷黄酮化合物的含量和回收率。
1.2.7 供试样品中三种酚酸和四种碳苷黄酮类含量
的测定 取 3 批次的青皮竹叶按照 1.2.2 中供试品溶
液的制备方法制备成青皮竹叶提取物溶液，采用
1.2.3 中液相条件对青皮竹叶提取物样品中的三种有
机酸和四种碳苷黄酮类进行测定。
1.2.8 数据分析 采用 SPSS 17.0 软件分析青皮竹
中三种酚酸和四种碳苷黄酮的平均含量，以 珔X ± S
表示。
2 结果与分析
2.1 线性关系考察
表 1 结果表明，在一定的浓度范围内，青皮竹提
取物中三种酚酸和四种碳苷黄酮类化合物的峰面积
与浓度呈现良好的线性关系，相关系数 Ｒ2 均大
于 0.9996。
2.2 重复性、稳定性实验
由表 2 可知，三种酚酸和四种碳苷黄酮标准品
的 ＲSD均小于 3.36%，该结果表明方法的重复性
好。青皮竹叶提取物中各成分的日内及日间精密
度的 ＲSD均小于 3.48%，表明方法的稳定性和重现
性好。
2.3 加标回收考察
由表 3 可知，三种酚酸和四种黄酮类化合物的
92
表 1 7 种化合物的标准曲线及线性范围
Table 1 Standard curves and linear ranges of seven compounds
名称 标准曲线 Ｒ2 线性范围(μg /mL) 检测限(μg /mL) 定量限(μg /mL)
对羟基苯甲酸 Y =30.851X + 3.278 0.9999 0.08～100 0.02 0.06
香草酸 Y =55.244X + 4.302 1.0000 0.04～100 0.01 0.03
对香豆酸 Y =6.394X－0.737 1.0000 0.25～50 0.05 0.15
荭草苷 Y =17.86X + 8.012 0.9999 0.24～60 0.04 0.12
异荭草苷 Y =44.608X + 1.836 1.0000 0.22～56 0.05 0.15
牡荆素 Y =92.464X + 5.14 1.0000 0.06～56 0.02 0.05
异牡荆苷 Y =40.235X + 18.115 0.9996 0.12～60 0.02 0.06
图 1 七种化学成分标准品(A)和青皮竹叶
甲醇提取物(B)高效液相色谱图
Fig.1 HPLC chromatograms of a mixture of
seven standard compounds(A)and the methanol
extract of B.textilis leaves(B)
注:1，对羟甲苯甲酸;2，香草酸;3，对香豆酸;4，荭草苷;
5，异荭草苷;6，牡荆素;7，异牡荆苷。
加样回收率在 96% ～103%之间，ＲSD 小于 3%，结果
表明方法准确。
表 4 青皮竹叶提取物成分测定(n = 3)
Table 4 Ｒesults of composition determination(n = 3)
化合物 青皮竹叶－1(μg /g) 青皮竹叶－2(μg /g) 青皮竹叶－3(μg /g)
对羟基苯甲酸 68.25 ± 2.74 59.28 ± 1.66 65.41 ± 1.43
香草酸 144.03 ± 2.11 100.95 ± 1.37 120.57 ± 1，01
对香豆酸 32.76 ± 1.03 24.63 ± 0.85 25.41 ± 0.69
荭草苷 211.80 ± 1.97 195.90 ± 2.43 163.48 ± 2.74
异荭草苷 1184.95 ± 9.22 1047.92 ± 9.50 1100.06 ± 8.16
牡荆素 8.00 ± 0.02 6.03 ± 0.01 8.48 ± 0.02
异牡荆苷 122.96 ± 1.79 119.83 ± 0.73 131.47 ± 1.05
( 下转第 97 页)
2.4 供试样品中 7 种化合物的测定
表 4 结果表明，测定的 7 种化合物都能在青皮竹
表 2 重复性、稳定性实验结果
Table 2 Ｒesults of precision and stablity
名称
混合标准品溶液 样品溶液
日内
ＲSD
(%，n =5)
日间
ＲSD
(%，n =15)
日内
ＲSD
(%，n =5)
日间
ＲSD
(%，n =15)
对羟基苯甲酸 1.09 2.36 3.28 3.48
香草酸 0.71 1.32 1.13 1.31
对香豆酸 0.98 2.18 1.20 1.94
荭草苷 1.53 2.34 1.55 2.09
异荭草苷 1.01 2.11 0.17 0.22
牡荆素 1.49 2.19 0.35 0.51
异牡荆苷 1.08 2.10 0.79 1.84
表 3 回收率测定结果(n = 6)
Table 3 Ｒesults of recovery test(n = 6)
标准品 平均回收率(%) ＲSD(%)
对羟基苯甲酸 102.39 2.41
香草酸 97.06 2.71
对香豆酸 96.11 2.97
荭草苷 101.23 2.01
异荭草苷 102.97 0.87
牡荆素 98.47 1.99
异牡荆苷 98.17 1.22
叶样品中检出，异荭草苷是青皮竹中的主要成分，但
不同批次间香草酸和荭草苷的含量差异较大。
3 结论
针对青皮竹提取物中的三种酚酸和四种碳苷黄
酮，本研究建立了一种高效液相色谱方法对其进行
97
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定性定量分析，得到最佳色谱条件为:C18 柱(4.6 mm
×150 mm，5 μm)，以甲醇:0.1%磷酸水为流动相，流
速为 1.0 mL /min，UV 检测波长 254 nm，洗脱程序为
0～10 min，10% ～22%甲醇;10～30 min，22% ～35%甲
醇;30～40 min，35% ～60%甲醇。对该方法进行方法
学考察，对羟基苯甲酸、香草酸、对香豆酸、荭草苷、
异荭草苷、牡荆素、异牡荆苷的线性范围分别在 0.08
～100、0.04～100、0.25～50、0.24～60、0.22 ～56、0.06 ～
56、0.12～60 μg /mL之间，Ｒ2 大于 0.9996，加标回收率
在 96% ～103%之间，ＲSD小于 3%，日内精密度和日
间精密度都小于 3.48%，实验结果表明，该方法灵敏
度高，重复性好，方法学验证符合要求。本研究建立
的方法可以对青皮竹提取物中三种有机酸和四种碳
苷黄酮同时进行有效分离，实现对青皮竹叶中酚酸
和碳苷黄酮成分准确的定量，为青皮竹叶功能性产
品的质量控制提供了一种简便可靠的方法。
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