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薯莨提取物止血效果及化学成分的初步研究



全 文 :Science and Technology of Food Industry 营养与保健
2013年第12期
薯莨提取物止血效果及
化学成分的初步研究
安静波1,郭 健3,4,*,宋文东3,李秋萍2,纪丽丽4,仝绍伟1,韩丝银1
(1.广东海洋大学食品科技学院,广东湛江 524088;
2.广东海洋大学理学院,广东湛江 524088;
3.浙江海洋学院石化与能源工程学院,浙江舟山 316000;
4.东华大学环境科学与工程学院,上海 200051)
摘 要:以薯莨乙醇提取物对小白鼠的止血作用进行研究,并初步鉴定了其化学成分类型,以期利用薯莨的乙醇提取
物生产止血药物,提高薯莨的利用价值。本实验以80%的乙醇水溶液为溶剂,提取得到薯莨的乙醇提取物;实验分为
空白组、阳性对照组、低剂量组和高剂量组对小白鼠进行灌胃,给药10d后,对小白鼠的出血时间、凝血时间和血小板
数量进行了测定。结果表明,薯莨的乙醇提取物能有效缩短小鼠的出血时间和凝血时间,并可提高血小板数量,具有
良好的止血效果;其化学成分包括了酚类、苷类、黄酮、蒽醌、三萜、甾醇、有机酸等。
关键词:薯莨,乙醇提取物,止血作用,化学成分
Preliminary study of hemostatic effect and active ingredients
of the Dioscorea cirrhosa Lour extract
AN Jing-bo1,GUO-Jian3,4,*,SONG Wen-dong3,LI Qiu-ping2,JI Li-li4,TONG Shao-wei1,HAN Si-yin1
(1.College of Food Science and Technology,Guangdong Ocean University,Zhanjiang 524088,China;
2.College of Science,Guangdong Ocean University,Zhanjiang 524088,China;
3.Petrochemical and Energy Engineering College,Zhejiang Ocean University,Zhoushan,Zhejiang 316000,China;
4.Environmental Science and Technology College,Donghua University,Shanghai 200051,China)
Abstract:Hemostatic effects of the ethanol extract of Dioscorea cirrhosa Lour on mice and its active ingredients
were researched,in order to take advantage of the Dioscorea cirrhosa Lour ethanol extract to produce
hemostatic drugs and improve the use value of Dioscorea cirrhosa Lour. In this experiment,an aqueous
solution of 80% ethanol was used as solvent to get the Dioscorea cirrhosa Lour ethanol extract. These mice
were divided into blank group,the positive control group,low-dose group and high dose group. Those were
prepared by gavage administration. After 10 days,bleeding time,clotting time and platelet count were
measured. Results showed the Dioscorea cirrhosa Lour ethanol extract could effectively shorten bleeding time
and clotting time of mice and increase the number of platelets,and had a good hemostatic effect. Its active
ingredients were polyphenols,glycosides,flavonoids,anthraquinone,triterpenoids,sterols,organic acids,and
the like.
Key words:Dioscorea cirrhosa Lour;ethanol extract;hemostatic effect;active ingredients
中图分类号:TS255.1 文献标识码:A 文 章 编 号:1002-0306(2013)12-0344-04
收稿日期:2012-12-03 * 通讯联系人
作者简介:安静波(1986-),女,在读硕士研究生,研究方向:水产品加
工与贮藏工程。
薯莨(Dioscorea cirrhosa Lour)是薯蓣科薯蓣属
的一种藤本植物,药用其块茎[1]。味微苦、涩,性微寒,
具有清热解毒,止血活血,收敛止痒,行气止痛,活血
祛瘀,抗菌等功能[2]。长期以来其生长处于自生自灭
的野生状态,目前主要用于提取其中的色素作为天
然染料[3],民间将其作为草药主要用于止血等[4],对其
药用有效成分的研究很少,并且有效成分尚不明确,
而薯莨中化学成分的研究也多集中于其色素成分单
宁方面,使得薯莨的综合利用也受到了极大的局限。
我国中药止血药应用历史悠久,研究中发现了大量
的止血活性成分几乎囊括了各类化学成分,主要有
氨基酸类、生物碱类、萜类、甾体、酚类、黄酮类、醌类
化合物、苯丙素类、脂类等[5-14]。本文对薯莨乙醇提取
物的止血效果进行了研究,并初步鉴定了其中的化
学成分,以期利用薯莨的乙醇提取物生产止血药物,
提高薯莨的利用价值。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
344
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2013.12.015
营养与保健
2013年第12期
Vol . 34 , No . 12 , 2013
组别
BT(s)
给药前 给药后
对照组 348.39±12.44 347.65±13.94
云南白药组 350.7±11.47 290.71±10.38△△▲▲**
低剂量组 349.5±14.83 333.28±9.53△*
高剂量组 349.57±13.05 152.26±11.47△△▲▲**
注:△与正常组相比较p<0.05,△△与正常组相比较p<0.01;▲
与薯莨低剂量组相比较p<0.05,▲▲与薯莨低剂量组相比较
p<0.01;*与给药前相比较p<0.05,**与给药前相比较p<0.01;
表2、表3同。
表1 薯莨提取物对小鼠出血时间(BT)的影响(x±s)
Table 1 Effect of the extract of Dioscorea cirrhosa Lour on
bleeding time in mice(x±s)
薯莨块茎 采自广东省佛山市顺德区大良;小
白鼠 昆明种小鼠,雌雄兼用,体重20~25g,由广东
医学院提供。
JM-C203T型分析天平 余姚纪铭称重校验设
备有限公司;SAM-1560型粉碎机 台州市黄岩迪胜
塑料厂;EV201型旋转蒸发仪 北京莱伯泰科仪器
有限公司;GZX-9070MBE型数显鼓风干燥箱 上海
博迅实业有限公司医疗设备厂;DH-1831型血气分
析仪 南京南分医用实验仪器有限责任公司;ZG12020
型云南白药 云南白药集团股份有限公司;乙醇 分
析纯,广东光华科技股份有限公司;其他实验所用试
剂 均为分析纯。
1.2 实验方法
1.2.1 薯莨乙醇提取物的制备 以80%的乙醇水溶
液为溶剂,料液比为2∶1,于60℃的热水中水浴浸提2h,
放暗处静置12h,过滤、旋转蒸发浓缩,50℃鼓风干燥。
1.2.2 给药方式 实验共分四个剂量组,即空白组
给予生理盐水灌胃、高剂量(0.66g/kg)、低剂量组
(0.33g/kg),云南白药组(0.40g/kg)。每个剂量组10只
小鼠,雌雄分配均匀,每天灌胃1次,连续给药10d。
1.2.3 小鼠止血指标的测定
1.2.3.1 小鼠出血时间的测定[15] 末次给药40min后,
剪断鼠尾远端1/3段,立即用秒表计时,用滤纸每隔30s
吸一次,至无血痕为止,此时的时间即为出血时间。
1.2.3.2 小鼠凝血时间的确定 [15] 末次给药40min
后,用眼科弯镊迅速摘去一侧眼球即有血液流出,于
载玻片上滴1滴血(弃掉第1~2滴),血滴直径约5mm,
立即记时,每隔30s用清洁大头针自血滴边缘向里轻
轻挑动1次,并观察有无血丝挑起。从采血开始至挑
起血丝止,所历时间即为凝血时间。
1.2.3.3 小鼠血小板数量的检测 在小鼠眼球后静
脉丛取血后,采用摘除眼球法取血放入肝素钠采血
管,用全自动血细胞分析仪检测血小板数量。
1.2.4 薯莨提取物化学成分的鉴定[16-17]
1.2.4.1 黄酮类颜色反应 方法a:(三氯化铝反应)将
提取液滴在滤纸上,喷洒1%三氯化铝的乙醇溶液,干
燥后,由黄酮类化合物产生的黄色斑点于紫外灯下显
荧光;方法b:(铅盐反应)1%醋酸铅及碱式醋酸铅水
溶液,碱式醋酸铅反应更强,可生成黄-红色沉淀。
1.2.4.2 蒽醌类颜色反应 方法a:(碱液反应)取提取
液1mL置于试管中,加入10% NaOH,观察颜色变化。溶
液呈现红色或者紫红色,加入双氧水后红色不褪,调
酸性后,红色褪去。羟基蒽醌类遇碱显红-紫红色,这
是蒽醌类一个很重要的鉴别反应;方法b:(醋酸镁反
应)取提取液1mL,加入5%醋酸镁的醇溶液,反应生成
橙红、紫红、蓝紫色配位化合物,表示有羟基蒽醌。
1.2.4.3 多酚类、单宁的颜色反应 方法a:(香草醛-
盐酸反应)取提取液点于滤纸片上,干后,喷雾或滴
加香草醛-盐酸试剂,立即呈现红色斑点,说明可能
含有酚类或单宁;方法b:(三氯化铁反应)样品溶液
加醋酸酸化后,滴加1%三氯化铁试剂。呈现蓝、墨绿
或蓝紫色,证明可能含有酚类或单宁(鞣质)。含有没
食子酸的单宁呈蓝色,含有儿茶酚的单宁呈绿色。
1.2.4.4 皂甙颜色反应 方法a:(泡沫反应)取提取
液2mL置于试管内,激烈振摇3min,如果产生持续性
泡沫,可能含有皂甙。一般来说,典型的皂甙反应,产
生的泡沫很显著,在试管内能持续10min以上,加热
或加入乙醇,泡沫都不会明显减少;方法b:(醋酐-浓
硫酸反应)取提取液2mL,将溶剂蒸发掉,残渣中加
入0.5mL的冰醋酸溶解,再滴加醋酐-浓硫酸试剂3~5
滴,如果呈紫红色,并且溶液上层逐渐变绿,表明含
甾体皂甙或三萜皂甙。甾体皂甙显绿色,三萜皂甙显
红紫色或蓝色。
1.2.4.5 三萜、甾醇类颜色反应 方法a:(醋酐-浓硫
酸反应)取提取液2mL,将溶剂蒸发掉,残渣中加入
0.5mL的冰醋酸溶解,再滴加醋酐-浓硫酸试剂3~5
滴,如果呈紫红色,并且溶液上层逐渐变绿,表明含
甾体皂甙或三萜皂甙。甾体皂甙显绿色,三萜皂甙显
红紫色或蓝色;方法b:(氯仿-浓硫酸反应)样品溶于
氯仿,加入浓硫酸后,在氯仿层呈现红色或蓝色,硫
酸层有绿色荧光出现。
1.2.4.6 有机酸类颜色反应 方法a:pH试纸检查;
方法b:(溴酚蓝反应)具体分析方法如下:提取液滴
于滤纸片上,喷洒0.1%溴酚蓝溶液立即在蓝色的背
景上显现黄色的斑点。若反应不明显,再喷洒氨水,
暴露在盐酸气体中,背景逐渐由蓝色变黄色,而含有
有机酸(盐)的斑点仍为蓝色。
1.2.4.7 生物碱类颜色反应 方法a:(碘-碘化钾反
应)取适量提取液加盐酸至酸性,加碘-碘化钾鉴别
试剂后,立即有浅棕或暗棕色沉淀出现;方法b:(硅
钨酸反应)取适量提取液加盐酸至酸性,加硅钨酸鉴
别试剂后,立即有浅黄或灰白色沉淀出现。
1.2.4.8 蛋白类颜色反应 方法a:(加热沉淀反应)
取提取液1mL置于试管中,加热至沸或加5%盐酸,如
发生混浊或有沉淀表明含有水溶性蛋白质;方法b:(茚
三酮反应)取检品的水溶液1mL,加入0.1%茚三酮试
液2~3滴,混匀后加热煮沸1~3min,观察颜色由粉色
变紫红色再变蓝色。
2 结果与分析
2.1 薯莨乙醇提取物对小鼠出血时间(BT)的影响
如表1所示,给药10d后的云南白药组和薯莨高
剂量组的BT较给药前和对照组均有极明显的缩短
345
Science and Technology of Food Industry 营养与保健
2013年第12期
化学成分 反应试剂 现象 结果
黄酮
AlCl3 形成黄色斑点,紫外灯下有荧光 +
醋酸铅 红色沉淀 +
蒽醌
碱液 碱性条件下呈紫色,酸性时颜色退去 +
醋酸镁 溶液呈蓝紫色 +
有机酸
pH pH5~6 +
溴酚蓝 蓝色背景下出现黄色斑点 +
多酚、单宁
香草醛-盐酸 呈现红色斑点 +
FeCl3 溶液呈现墨绿色 +
皂甙
泡沫反应 溶液持续产生泡沫 +
醋酐-浓硫酸 溶液呈紫红色,上层逐渐变绿 +
三萜、甾醇
醋酐-浓硫酸 溶液呈紫红色,上层逐渐变绿 +
氯仿-浓硫酸 氯仿层呈蓝色,硫酸层有绿色荧光出现 +
生物碱
I-KI 无沉淀出现 -
硅钨酸 无沉淀出现 -
蛋白
5% HCl 无浑浊或沉淀出现 -
印三酮 无明显的颜色变化 -
表4 薯莨乙醇提取物的成分鉴定结果
Table 4 The active ingredients of Dioscorea cirrhosa Lour ethanol extract
注:+ 颜色反应结果为阳性;- 颜色反应结果为阴性。
(p<0.01),薯莨低剂量组的BT也明显小于给药前和
对照组(p<0.05);薯莨高剂量组和云南白药组的BT
明显小于薯莨低剂量组(p<0.01)。由此可见,薯莨的
乙醇提取物具有良好的止血作用。
2.2 薯莨乙醇提取物对小鼠凝血时间(CT)的影响
如表2所示,给药10d后的薯莨高剂量组的CT较
给药前和对照组均有极明显的缩短(p<0.01),云南
白药组和薯莨低剂量组的CT也明显小于给药前和对
照组(p<0.05);薯莨高剂量组的CT明显小于薯莨低
剂量组(p<0.01),由此可见薯莨提取物的低剂量组
和高剂量组都具有良好的凝血作用。
2.3 薯莨乙醇提取物对小鼠血小板数量(Plt)的影响
如表3所示,给药10d后的薯莨高剂量组和云南
白药组的Plt较给药前和对照组均有极明显的提高
(p<0.01),薯莨低剂量组的Plt也明显小于给药前和
对照组(p<0.05);薯莨高剂量组和云南白药组的Plt
较薯莨低剂量组也有极明显的提高(p<0.01)。发生
止血和凝血效应的机制有多种,但大都与血小板的
作用有关系,血小板通过释放血管收缩物质、血小板
粘聚成团堵塞损伤的血管和促进凝血从而有助于暂
时止血。由表3可以看出,薯莨提取物可以明显提高
小鼠血小板的数量,从而达到止血的效果。
2.4 薯莨乙醇提取物的成分鉴定结果
我国中药止血药应用历史悠久,目前已发现的
止血活性成分主要有氨基酸类、生物碱类、萜类和甾
体、酚类、黄酮类、醌类化合物、苯丙素类、脂类等,本
实验对薯莨的乙醇提取液的成分鉴别,可以推断薯
莨的乙醇提取液中除了薯莨的主要成分酚类和甙
类,还可能含有黄酮、蒽醌、三萜、甾醇、有机酸等止
血成分,从而综合的提高其止血功能。
3 结论与讨论
目前,国内外关于薯莨的各方面的研究尚处于
空白或萌芽阶段,其临床应用受到了极大的局限,这
对于薯莨的综合利用十分不利。因此,挖掘这一宝贵
资源的药用潜力,深入研究薯莨的化学成分和药理
活性,发现其发挥药理作用的药效作用部位及其作
用机制,开发出疗效质量稳定的新药,实现中药现代
化非常必要。
本实验通过对薯莨乙醇提取物的止血效果进行
了初步的探究,并对其起止血作用的化学成分进行
了初步的鉴定。结果证明薯莨的乙醇提取物具有良
好的止血和凝血效果,其中主要鞣质及甙类是薯莨
组别
Plt(109/L)
给药前 给药后
对照组 250.29±24.01 251.89±27.58
云南白药组 251.18±25.05 564.79±22.12△△▲▲**
低剂量组 247.09±25.43 276.58±20.79△*
高剂量组 249.59±26.35 921.57±21.73△△▲▲**
表3 薯莨提取物对小鼠血小板数量(Plt)的影响(x±s)
Table 3 Effect of the extract of Dioscorea cirrhosa Lour on
platelet count in mice(x±s)
(下转第352页)
组别
CT(s)
给药前 给药后
对照组 97.42±11.27 96.83±11.57
云南白药组 96.32±12.05 84.43±11.31△*
低剂量组 96.23±10.77 82.44±11.91△*
高剂量组 95.70±9.58 45.05±10.80△△▲▲**
表2 薯莨提取物对小鼠凝血时间(CT)的影响(x±s)
Table 2 Effect of the extract of Dioscorea cirrhosa Lour on
clotting time in mice(x±s)
346
Science and Technology of Food Industry 专 题 综 述
2013年第12期
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(上接第346页)
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的主要化学成分,鞣质即植物单宁,又称植物多酚可
使创伤后渗出物中蛋白质凝固,形成痂膜,致减少分
泌和防止感染,并能使创面的微血管收缩,有局部止
血作用,可外用于创伤、灼伤。用极细粉敷于外伤出
血处,能当即止血,因而具有快速高效特点,可用于
应急救治药物[18]。本实验证明薯莨的乙醇提取液的
止血成分除了鞣质及甙类,还有黄酮、蒽醌、三萜、甾
醇、有机酸等止血成分,从而综合提高其止血功能。
血小板的主要功能是凝血和止血,修补破损的血
管。当人体受伤流血时,血小板受到损伤部位激活因
素刺激出现血小板的聚集,成为血小板凝块,起到初
级止血作用,血小板和血液中的其他凝血物质——
钙离子和凝血酶等,在破损的血管壁上聚集成团,形
成血栓,堵塞破损的伤口和血管,血小板还能释放肾
上腺素,引起血管收缩,促进止血。薯莨的乙醇提取
物能有效提高Plt,从而缩短出血时间和凝血时间。实
验表明薯莨的乙醇提取物具有良好的止血效果,高
剂量组的出血时间、凝血时间和血小板数量与正常
对照组和注射前相比具有极明显的缩短和增加;低
剂量组的出血时间、凝血时间和血小板数量与正常
对照组和注射前相比也具有明显的缩短和增加。薯
莨具有良好的止血的作用,因此薯莨的乙醇提取物
可用于止血药物的制备,一方面可以提高薯莨的利
用价值,对薯莨资源的合理利用具有一定的意义,另
一方面也为新的有效止血药物提供新的资源。但薯
莨提取物是否还能通过加强血管收缩、间接刺激子
宫收缩、提高凝血因子数量等方面来促进止血和凝
血的作用,还有待于进一步的研究。
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