全 文 ：作者简介 陈梅(1982-),女,广东乐昌人,硕士研究生,研究方向:细
胞工程与种质创新。*通讯作者,E!mail:xiaotaomo@tom.com。
收稿日期 2007!06!19
长寿花(KalanchoebossfeldianaStapf)又称矮生伽蓝菜、
圣诞伽蓝菜、寿星花,为景天科多年生短日照植物,是优良
的室内观赏花卉。近年来,长寿花已经成为一种有发展潜力
的新品种花卉,前景看好。其普通的繁殖方法为茎段及叶片
扦插,易受季节影响,而用组织培养的方法不受天气、季节
的影响,且繁殖速度快,已经成为一种重要的育苗手段。
1 材料与方法
1.1 材料 取长寿花的幼嫩叶片作为外植体。
1.2 方法
1.2.1 培养基和培养条件。试验所用培养基配方见表1。培
养基均附加蔗糖30.0%,琼脂粉6.4%,pH值5.8～6.0,121℃
下高压灭菌20min。培养温度25～28℃,光照强度1500lx,
光照周期12h/d。
1.2.2 外植体处理。剪下从地里采集的完整植株带叶柄的
幼嫩叶片,用洗涤剂浸泡 10min,然后用自来水冲洗 20
min,晾干水分。在超净工作台上用75%(体积分数)的酒精
溶液消毒 30s;取出后放入 1g/L升汞(HgCl2)溶液中消毒
15min;然后用无菌水冲洗 3～5次,无菌滤纸吸干水分。在
超净工作台上,将其切成1～2cm的小块接种于诱导培养基
①～④中,每瓶接15个外植体,每个处理接种10瓶。
1.2.3 长寿花苗的增殖培养。将丛生芽团切成小块,接种于
②号培养基上进行继代增殖培养。
1.2.4 生根培养。将经增殖培养长成的无根苗切成单株,接
种于⑤～⑧号培养基上进行生根培养。
1.2.5 移栽。经生根培养长出完整植株后,打开培养基瓶盖
炼苗 3d,用自来水冲洗掉根部培养基后将其移栽至苗床,
移栽后注意遮阴保湿。
2 结果与分析
2.1 不同培养基对叶片再生的影响 接种后 30d,叶片明
显膨胀,厚度比原来增大2～3倍,叶片切口处产生少量结构
紧密的愈伤组织。接种后 50d左右,愈伤组织处开始分化
出绿色小芽;60d后,不定芽的发生频率迅速上升,形成簇
生芽,叶片再生率最高达80%(表2)。
由表2可以看出,培养基①～④都能够诱导长寿花的叶
片再生,其中添加了低浓度激素6!BA的培养基更适宜诱导
长寿花叶片再生,在 6!BA浓度相同的情况下,添加低浓度
NAA(0.1mg/L)其叶片再生频率为 60%,而添加高浓度的
NAA(0.5mg/L)其再生频率为80%。因此,适合长寿花叶片
诱导的培养基为MS+6!BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L。
由叶片分化得到的不定芽继续在培养基②上进行增殖
长寿花离体快繁研究
陈梅,莫 饶 *(华南热带农业大学农学院,海南儋州 571737)
摘要 [目的]研究长寿花离体快繁的培养基配方和培养条件。[方法]以长寿花的幼嫩叶片作为外植体,以MS为基本培养基,诱导出
不定芽进行快速繁殖,并比较添加4种浓度的BA和NAA对长寿花不定芽的诱导和生根效果的影响。[结果]长寿花幼嫩叶片的诱导
和生长与生长素、细胞分裂素2种激素有关系,两者的配比直接影响了叶片的再生频率。长寿花叶片诱导和不定芽增殖的最适培养
基为MS+6!BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L,最适生根培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L,不定芽在此培养基上的生根率最高,移栽成活率为
95%。通过直接诱导可获得较高的不定芽诱导率,同时增殖培养的增殖系数达到10,大大缩短了常规育苗时间。[结论]该研究建立了
长寿花组织培养的再生体系,为其快速繁殖及大规模的工厂化育苗提供科学依据。
关键词 长寿花;组织培养;快速繁殖
中图分类号 Q943.1 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2007)32-10336-02
StudyoninVitroRapidPropagationofKalanchoeblossfeldiana
CHENMeietal(ColegeofAgronomy,SouthChinaUniversityofTropicalAgriculture,Danzhou,Hainan571737)
Abstract [Objective]Theaimoftheresearchwastostudythemediumformulaandcultureconditionsforinvitrorapidpropagationof
Kalanchoeblossfeldiana.[Method]WithtenderleavesofK.blossfeldianaasexplantandMSasbasicmedium,adventitiousbudswereinducedfor
rapidpropagation.Andtheefectsofadding4concentrationsofBAandNAAontheinductionofadventitiousbudsandrootingefectofK.
blossfeldianawerecompared.[Result]TheinductionandgrowthoftenderleavesinK.blossfeldianahadrelationswith2kindsofhormone
includingauxinandcytokinin,andthematchingofauxinandcytokininhadadirectefectontheregenerationfrequencyofleaves.Theoptimum
mediumfortheinductionofleavesandtheproliferationofadventitiousbudswasMS+6!BA1.0mg/L+NAA0.5mg/Landtheoptimumrooting
mediumwas1/2MS+NAA0.5mg/Lonwhichtheadventitiousbudsobtainedhighestrootratewiththeirtransplantingsurvivingrateof95%.By
directinduction,higherinducementrateofadventitiousbudscouldbeobtainedandpropagationcoeficientofpropagationculturereached10,
whichshortenedthetimeofconventionalseedling.[Conclusion]TheresearchestablishedtheregenerationsystemoftissuecultureinK.
blossfeldianaandprovidedscientificbasisforitsrapidpropagationandfactory!cultivatedseedlinginlargescale.
Keywords Kalanchoeblossfeldiana;Tissueculture;Rapidpropagation
表1 培养基配方
培养基 基本成分
附加成分∥mg/L
6!BA NAA
① MS 1.0 0.1
② MS 1.0 0.5
③ MS 2.0 0.1
④ MS 2.0 0.5
⑤ 1/2MS
⑥ 1/2MS 0.1
⑦ 1/2MS 0.3
⑧ 1/2MS 0.5
表2 不同培养基对叶片再生的影响
培养基 接种数∥个 分化数∥个 再生频率∥%
① 150 90 60
② 150 120 80
③ 150 70 46
④ 150 60 40
安徽农业科学,JournalofAnhuiAgri.Sci.2007,35(32):10336-10337 责任编辑 金琼琼 责任校对 王 淼
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2007.32.061
培养,每20d转瓶 1次,其增殖速度非常快,增殖系数达到
10以上(图1)。
2.2 不同培养基对不定芽生根及移栽成活率的影响 将
壮苗培养后高1.5～2.0cm的不定芽切下,转入生根培养基
⑤～⑧中,结果都会生根,只是生根的数量和所需天数不尽
相同。通过比较观察,培养基⑧的生根时间最短,15d左右
即可生根(图2),并且根数多,根系良好,移栽成活率高。因
此,培养基⑧是长寿花生根的最适培养基。
将炼苗后的小苗从培养基中取出,轻轻洗去根部培养
基,注意不要伤根,并在0.5%的多菌灵溶液中消毒片刻,然
后移栽于椰糠∶河沙=1∶1的混合基质中。在移栽初期,注意
遮阴、保湿,1周后小苗成活率达95%(图3)。
3 小结与讨论
该试验以长寿花的幼嫩叶片为外植体,用 4种不同浓
度激素的诱导培养基和生根培养基组合进行对比试验。结
果表明:长寿花幼嫩叶片的诱导和生长与生长素、细胞分裂
素2种激素有关,两者的配比直接影响了叶片的再生频率,
长寿花叶片诱导和不定芽增殖的最适培养基为 MS+6#BA
1.0mg/L+NAA0.5mg/L,最适宜的生根培养基为 1/2MS+
NAA0.5mg/L。笔者通过直接诱导出芽的方式,获得了较高
的不定芽诱导率。同时增殖培养的增殖系数达到10,大大缩
短了常规育苗时间。该试验建立了长寿花组织培养的再生
体系,为其快速繁殖及大规模工厂化育苗提供了科学依据。
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陈 梅等 长寿花离体快繁研究35卷32期
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(上接第10221页)
胞膜结构和功能的损伤[5],该研究结果表明,金银花离体叶
片受到旱害后,随 PEG浓度增加,植株伤害加重,丙二醛含
量增加,膜质过氧化反应加剧。正常情况下,植物体内自由
基与清除系统保持平衡,体内自由基水平较低,不会引起伤
害。而逆境条件下,自由基大量产生,平衡被打破,产生伤
害,由于 SOD、POD能清除活性氧自由基,是膜结构的保护
酶[8],具有防止膜脂质过氧化,维持膜结构完整性的作用,在
一定程度上保护着细胞膜系统。金银花离体叶片受到旱害
后,随PEG浓度增加,其过氧化物酶活性升高,超氧化物歧
化酶活性升高,这是植物进行自我保护的一种自然反应[6]。
逆境中保护酶增强或维持较高水平,才能清除活性氧自由
基并使之保持较低水平,从而防止其对生物膜结构和功能
的破坏。外源激素KT可参与调节渗透胁迫对植物造成的伤
害,KT既是细胞内自由基产生的抑制剂,又是细胞内已形成
的自由基的消除剂,可以抑制衰老过程中自由基引发膜脂
质过氧化作用和膜透性增大[9],抑制叶片的衰老[10]。该研究
中,KT能有效促进金银花离体叶片的 SOD和 POD活性的
升高,大大延缓了由于 PEG渗透胁迫而造成的酶活性的降
低,表明 KT能促进 SOD活性增加,减轻因 PEG渗透胁迫
而造成的对细胞膜的伤害,减缓膜的脂质过氧化过程,从而
恢复细胞膜的选择透性,起到保护和恢复细胞膜正常功能
的作用。
参考文献
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