全 文 :基金项目:国家自然科学基金(81160498)
作者简介:梅海霖(1989-),女,硕士,研究方向:新药研发,E-mail:m15899141087@163.com。
通信作者:聂继红,女,教授,主任药师,硕士生导师,研究方向:中药新制剂与新剂型研究,E-mail:xjnjh411@163.com。
·基础医学研究·
新疆白喉乌头及其炮制品对小鼠的
急性毒性实验研究
梅海霖1,赵翡翠2,李 娟2,卢 军2,聂继红2
(新疆医科大学1药学院,乌鲁木齐 830011,2附属中医医院药学部,乌鲁木齐 830000)
摘要:目的 研究新疆白喉乌头及其不同炮制品水煎液对小鼠的急性毒性。方法 通过对小鼠腹腔注射
白喉乌头及其3种不同炮制品(2010版《药典》法炮制品、文献法炮制品、哈萨克族法炮制品)水煎液,观察并记录小
鼠7d内的活动情况及中毒反应;采用改良寇氏法(Karber法)计算白喉乌头及其炮制品对小鼠的半数致死量
(LD50)。结果 新疆白喉乌头生品及2010版《药典》法炮制品(药典法)、文献法炮制品(文献法)、哈萨克族法炮
制品(哈萨克族法)的对小鼠的LD50依次为1.558、7.706、4.196、10.402g/kg,毒性大小顺序为生品>文献法炮制
品>《药典》法炮制品>哈萨克族法炮制品;白喉乌头及其3种炮制品对小鼠的毒性表现基本相似,都有部分小鼠
出现自由活动量减少,运动失调,抽搐,惊厥,反应低下,后肢强直,呼吸频率加快,心跳过快,腹泻,眼球突出,死前
角弓反张等毒性症状。结论 新疆白喉乌头生品毒性较大,可通过炮制降低毒性,其中以《药典》法和哈萨克族法
炮制品的毒性较小,初步表明哈萨克族法对白喉乌头的减毒作用最好,有关白喉乌头炮制减毒的机制还有待于进
行更深入研究。
关键词:白喉乌头;炮制品;急性毒性;半数致死量(LD50)
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1009-5551(2013)07-0918-04
The study on acute toxicity of Xinjiang aconitum leucostomum worosch
and Its processed products
MEI Hailin1,ZHAO Feicui 2,LI Juan2,LU Jun2,NIE Jihong2
(1 College of Pharmacy,Xinjiang Medical University,Urumqi 830011,China,2 Medicine Department
of Affiliated Traditional Medicine Hospital,Xinjiang Medical University,Urumqi 830000,China)
Abstract:Objective To study the acute toxicity of Aconitum leucostomum Worosch and its different pro-
cessed products of Aconitum in mice,observe the toxic effects and calculate median lethal dose(LD50).
Methods After an intraperitoneal injection of Aconitum leucostomum Worosch and its different processed
products in mice,observe and record the activities and toxic reactions of mice in 7days,calculate the medi-
an lethal dose of Aconitum leucostomum Worosch and its processed products by the method of Karber,and
compare the acute toxicity of Aconitum leucostomum Worosch and its processed products.Results The
LD50of Aconitum leucostomum Worosch of Xinjiang,the method of Pharmacopoeia(the 2010edition),the
method of literature,and the Kazakh method are 1.558,7.706,4.196,10.402g/kg.The size order of the
toxicity about Aconitum leucostmum Worosch and its processed products is:Aconitum leucostmum Wo-
第36卷 第7期 新 疆 医 科 大 学 学 报 Vol.36 No.7
2013年7月 Journal of Xinjiang Medical University July.2013
rosch of Xinjiang>the method of literature>the method of Pharmacopoeia>the method of Kazakh;with
the increase of dose of liquid medicine in every group,the death rate increased;the signs of toxicity in mice
are roughly the same,they are al as folows:the free activities of the mice decrease,the movements of
mice is out of order,hyperspasmia and convulsions occur,hind leg stiffens;their breath frequency speeds
up,opisthotonos is presented before its death.Conclusion The acute toxicity of Aconitum leucostomum
Worosch in Xinjiang is very severe,so we should process it before we use it to reduce its toxicity based on
the method recorded in Pharmacopoeia or the method of Kazakh.The experiment result suggested that the
method of Kazakh would be better in reducing toxicity.But the mechanism needs further studying.
Key words:Aconitum leucostomum Worosch;processed products;acute toxicity;LD50
白喉乌头 (Aconitum leucostomum Worosch.)
为毛茛科 (Ranuncul-aceae)乌头属 (Aconitum)的
多年生草本植物。广泛分布于新疆伊犁、阿勒泰、塔
城等地区的天然草场,尤其在退化草场上更是普遍
而大量地滋生,是当地主要的有毒植物之一,对家畜
有毒害作用[1]。然而,《哈萨克药志》记载白喉乌头
具有祛风除湿、温经止痛的功能,用于风寒湿痹等
疾患,为西北少数民族的常用民间草药之一[2]。
新疆位于亚洲大陆中心,地域辽阔,降雨稀少,干
旱高寒,生态环境恶劣。这种自然环境,使风湿类
疾病成为新疆地区常见病、多发病,且缠绵难愈,
给患者带来莫大的痛苦。尤其是风湿性关节炎、
类风湿性关节炎、强直性脊柱炎等的发病率高,危
害性大,严重影响患者生存质量。白喉乌头能祛
风散寒、消肿止痛、通经活络,在治疗风湿类疾病
方面,有其独特的优势[3-4]。目前我国针对白喉乌
头的研究仅见对其生药学鉴定及初步的化学成分分
析的相关报道[5-6],而对其毒性、炮制减毒方法及机
理研究的报道较少,这使白喉乌头的合理开发和利
用受到很大程度地限制。
白喉乌头为剧毒药材,炮制后方能入药,其所含
的乌头碱类成分,既是抗炎镇痛的有效成分,又是毒
性成分。因此,如何在降低毒性的同时,保证临床安
全有效应用是白喉乌头研究的主要内容。本实验主
要研究白喉乌头及其炮制品对小鼠的急性毒性,比
较白喉乌头炮制前后的毒性大小,初步评价其安全
性,为白喉乌头药理作用的研究及其安全有效的应
用于临床奠定基础。
1 材料与方法
1.1 动物 昆明种小鼠,清洁级,雌雄各半,300
只,体质量18~22g,由新疆实验动物研究中心提供
[合格证号:SCXK(新)2011-0003]。饲养温度20~
25℃,相对湿度30%~60%,自由饮水,进食普通饲
料,鼠笼垫料与饮水壶定时换洗,保持清洁。
1.2 试药及仪器 白喉乌头2012年秋季采自新疆
伊犁州尼勒克县,经新疆医科大学附属中医医院李
永和主任中药师鉴定为毛茛科植物白喉乌头
(Aconitum leucostomum Worosch.)的干燥根,甘草
(新疆仁济堂有限公司,批号:20120701),黑豆(安徽
省毫州市双华中药饮片厂,批号:20120701),衡新
ACS系列电子称(中山市衡新电子有限公司),
ZDX-35BⅠ型座式自动电热压力蒸汽灭菌锅(上海
申安医疗器械厂),KDC-40低速离心机(科大创新
股份有限公司中佳分公司),HH-4数显恒温水浴锅
(金坛市华峰仪器有限公司)。
1.3 实验方法
1.3.1 新疆白喉乌头生品及其炮制品提取物的制
备 《药典》法[7]:取净白喉乌头,大小个分开,用水
浸泡至内无干心,取出,加水煮沸4h,取大个切开
至内无白心、口尝微有麻舌感时,取出,晾至六成干
后切薄片,干燥,即得。文献法[8]:白喉乌头清洗、闷
润后,固定温度为126℃,压力为0.15MPa,蒸制
90min,70℃低温烘干,即得。哈萨克族法[9]:将白
喉乌头泡在水里,每天换2次水至除去苦味,然后取
8%甘草和10%黑豆浆与乌头一起用水煮沸4h至
内无白心、口尝无麻或微有麻舌感为度,取出晾干后
切成片状或其他形状晒干或烘干后,即得。
取白喉乌头生品及其3种炮制品各300g,加10
倍量水浸泡1h,煮沸后煎50min,四层纱布过滤。二
煎加8倍量水,煮沸后煎30min,四层纱布过滤,合并
2次滤液,按每100mL水煎液加入40mL 95%的乙
醇溶液,置4℃冰箱内48h,2 000r/min离心10min,
取上清液置65℃恒温水浴锅内,浓缩成300%的
药液[10]。
1.3.2 急性毒性实验[11] 最小全致死量、最大全
不致死量的测定:小鼠100只,随机分组,每组4只。
919 第6期 梅海霖,等:新疆白喉乌头及其炮制品对小鼠的急性毒性实验研究
各药液的每个浓度组选择一组小鼠进行实验。每只
小鼠均按0.2mL/10g腹腔注射给药1次,分别观
察小鼠7d内出现的死亡时间,最后计算出各药物
的最小全致死量、最大全不致死量。
1.3.3 半数致死量(LD50)的测定 小鼠200只,分
别按体质量分层后再随机分为20组,给药前均禁食
24h,不禁水。新疆白喉乌头生品、药典法炮制品、
文献法炮制品、哈萨克族法炮制品4个样品依据最
小全致死量和最大全不致死量的值,等比各设5个
剂量组。每只小鼠均按0.2mL/10g给药,分别观
察小鼠腹腔注射后的中毒症状、7d内死亡情况及
死亡时间、体质量变化情况。用改良寇氏(Karber)
法计算小鼠腹腔注射各药物的半数致死量(LD50)及
其95%可信区间。
1.3.4 中毒症状的观察 在给药后的1~2h内,
观察并记录小鼠的外观特征、精神状况、行为活动、
呼吸、分泌物、排泄物、进食量、体质量、尿液及粪便
特征等中毒症状。
2 实验结果
2.1 新疆白喉乌头及其炮制品对小鼠的急性毒性
大小 新疆白喉乌头生品及其炮制品对小鼠的毒性
大小顺序为:生品>文献法炮制品>药典法炮制品
>哈萨克族法炮制品。根据改良改良寇氏(Karber)
法计算小鼠腹腔注射各药物的半数致死量:新疆白
喉乌头生品 LD50=1.558g/kg,95%可信区间为
1.54~1.58g/kg;药典法炮制品LD50=7.706g/kg,
95%可信区间为7.43~7.99g/kg;文献法炮制品
LD50=4.196g/kg,95%可信区间为3.93~4.48g/kg;
哈萨克族法炮制品LD50=10.402g/kg,95%可信
区间为10.08~10.73g/kg,见表1~4。
表1 新疆白喉乌头生品对小鼠的急性毒性实验结果
组别
剂量
g/kg 对数
动物数/只 死亡数/只 死亡率/p 存活率/q p·q
生品1 1.450 0.161 10 1 0.1 0.9 0.09
生品2 1.500 0.176 10 3 0.3 0.7 0.21
生品3 1.550 0.190 10 5 0.5 0.5 0.25
生品4 1.600 0.204 10 7 0.7 0.3 0.21
生品5 1.700 0.230 10 9 0.9 0.1 0.09
组间对数 剂量差 i=0.017 Σp=2.5
表2 新疆白喉乌头《药典》法炮制品的急性毒性实验结果
组别
剂量
g/kg 对数
动物数/只 死亡数/只 死亡率/p 存活率/q p·q
药典法1 6.094 0.785 10 2 0.2 0.8 0.16
药典法2 6.968 0.843 10 3 0.3 0.7 0.21
药典法3 7.838 0.894 10 5 0.5 0.5 0.25
药典法4 8.712 0.940 10 7 0.7 0.3 0.21
药典法5 10.450 1.019 10 9 0.9 0.1 0.09
组间对数 剂量差 i=0.058 Σp=2.6
表3 新疆白喉乌头文献法炮制品的急性毒性实验结果
组别
剂量
g/kg 对数
动物数/只 死亡数/只 死亡率/p 存活率/q p·q
文献法1 3.522 0.551 10 2 0.2 0.8 0.16
文献法2 3.866 0.587 10 3 0.3 0.7 0.21
文献法3 4.180 0.621 0.621 10 4 0.4 0.60.24
文献法4 4.548 0.658 10 6 0.6 0.4 0.24
文献法5 4.916 0.692 10 9 0.9 0.1 0.09
组间对数 剂量差 i=0.035 Σp=2.4
029 新 疆 医 科 大 学 学 报 第36卷
表4 新疆白喉乌头哈萨克族法炮制品的急性毒性实验结果
组别
剂量
g/kg 对数
动物数/只 死亡数/只 死亡率/p 存活率/q p·q
哈萨克族法1 8.000 0.903 10 1 0.1 0.9 0.09
哈萨克族法2 9.188 0.963 10 3 0.3 0.7 0.21
哈萨克族法3 10.500 1.021 10 5 0.5 0.5 0.25
哈萨克族法4 12.126 1.084 10 8 0.8 0.2 0.16
哈萨克族法5 13.932 1.144 10 9 0.9 0.1 0.09
组间对数 剂量差 i=0.060 Σp=2.6
2.2 新疆白喉乌头及其炮制品对小鼠的毒性反应
症状 给小鼠腹腔注射后1~2h内,各组的部分小
鼠出现各系统的不同中毒症状,主要表现为对中枢
神经系统,心血管系统,消化系统等的影响,均出现
自由活动量减少,运动失调,抽搐,惊厥,后肢强直,
呼吸频率加快,张口呼吸,喘息,心跳过快,腹泻及死
前角弓反张等中毒症状。此外还出现眼球突出,结
膜浑浊,拒食等症状,死亡时间一般在1~4h内。
3 讨论
白喉乌头大量分布于天然退化草场,由于不合
理的使用导致了大批牲畜的中毒和死亡。因此本实
验采用3种不同炮制方法(2010版《药典》法、文献
法、哈萨克族法)炮制白喉乌头,对其进行减毒,这3
种炮制方法分别代表了目前乌头类药材所常用的加
热水煮、高压蒸、加辅料共煮炮制方法,具有一定的
代表性。本实验也观察了白喉乌头及其不同炮制品
中毒表现,并计算其对小鼠的半数致死量LD50。实
验结果表明,白喉乌头及其炮制品对小鼠的毒性主
要表现为对中枢神经系统,心血管系统,消化系统等
的影响,均出现自由活动量减少,运动失调,抽搐,惊
厥,后肢强直,呼吸频率加快,张口呼吸,喘息,心跳
过快,腹泻及死前角弓反张等症状,这与乌头类药材
的中毒表现一致。白喉乌头经过药典法和哈萨克族
法炮制后毒性大大降低,尤其是哈萨克族法对白喉
乌头的减毒作用最好,可能与哈萨克族法炮制方法
中使用甘草汁与黑豆汁作为炮制辅料有关。该结果
为白喉乌头的炮制及其临床用药安全提供了一定参
考。同时,也为白喉乌头及其炮制品的毒理药效的
研究奠定了基础,目前我国关于白喉乌头的研究仅
见对其生品的生药学鉴定及初步的化学成分分析的
相关报道[5-6],而对其炮制减毒机制的研究还很少,
因此还有待于进行更深入地研究。
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[收稿日期:2013-03-10]
(本文编辑 杨晨晨)
129 第6期 梅海霖,等:新疆白喉乌头及其炮制品对小鼠的急性毒性实验研究