全 文 ：·生物技术· 北方园艺２０１２（１８）：１２８～１３０
第一作者简介：邵红（１９７９－），女，硕士，讲师，研究方向为植物生理
学与植物生物技术。Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｍｓｓｈｋｙ＠１２６．ｃｏｍ．
基金项目：佳木斯大学科学技术面上基金资助项目（Ｓ２０１０－５４）；佳
木斯大学大学生科技创新资助项目（Ｄｚ２０１１－０４４）。
收稿日期：２０１２－０５－２１
北马兜铃组培快繁技术
邵 红，孙 睿，张 丽 敏，张 卫 东，王 振
（佳木斯大学 生命科学学院，黑龙江 佳木斯１５４００７）
摘 要：利用植物组织培养技术对北马兜铃进行快速繁殖，建立北马兜铃植株再生体系。结
果表明：愈伤组织诱导的最佳外植体是叶片，在 ＭＳ＋ＩＢＡ ０．４ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ
０．５ｍｇ／Ｌ培养基中愈伤组织诱导结果较好；愈伤组织分化丛生芽的最佳培养基是 ＭＳ＋ＩＢＡ
０．４ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ ０．５ｍｇ／Ｌ；诱导试管苗生根的佳培养基为ＭＳ＋ＩＢＡ ０．４ｍｇ／Ｌ＋
ＮＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ ０．５ｍｇ／Ｌ。
关键词：北马兜铃；组织培养；愈伤组织；丛生芽
中图分类号：Ｓ ５６７．２３ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００１－０００９（２０１２）１８－０１２８－０３
北马兜铃（Ａｒｉｓｔｏｌｏｃｈｉａ ｃｏｎｔｏｒｔａ Ｂｕｎｇｅ）为马兜铃科
（Ａｒｉｓｔｏｌｏｃｈｉａｃｅａｅ）马兜铃属（Ａｒｉｓｔｏｌｏｃｈｉａ Ｌ）多年生攀援
草本植物［１］。它是一种重要的中草药，果实、叶和根均
可入药，具有清热解毒、止咳平喘、行气止痛、消肿降压
等功效，能治肺热咳嗽、高血压、肝炎等疾病。由于北马
兜铃具有多种药用价值，市场上售价较高。近年来由于
过度采挖，使北马兜铃更加稀少。为保护该种植物，并
尽可能扩大其繁殖量，该试验利用植物组织培养技术进
行快速繁殖，建立北马兜铃植株再生体系，以期短时间
内获得大量繁殖的植株，既满足医药市场的需求，也可
用于园林建设，美化环境。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
试验用北马兜铃采自佳木斯市四丰山。
１．２ 试验方法
１．２．１ 愈伤组织的诱导 取北马兜铃植株剪成４～５ｃｍ
长的根及带叶茎段，放于５００ｍＬ广口瓶中，用洗洁精水
振荡２０ｍｉｎ后用流水冲洗１ｈ，移至超净台上，７０％～
７５％乙醇灭菌１０ｓ，无菌水振荡冲洗２次，然后用０．０５％
的ＨｇＣｌ２溶液振荡灭菌３ｍｉｎ，再用０．０２５％的ＨｇＣｌ２溶
液振荡灭菌１３ｍｉｎ，用无菌水振荡冲洗６～８次。将消
毒灭菌后的根和茎段切成０．５ｃｍ长小段、叶片切成
０．５ｃｍ×０．５ｃｍ小块（表面划上多条伤口），置于表１附
加不同质量浓度植物生长调节剂组合的 ＭＳ培养基上
进行Ｌ９（３４）正交实验，培养基中蔗糖３％，琼脂０．７％，
ｐＨ ６．０（比正常植物培养时略高）。各外植体每种培
养基上接种６０块，重复３次。在温度为（２５±１）℃条
件下黑暗培养２０ｄ，诱导愈伤组织的发生，诱导率（％）＝
愈伤组织块数／接种外植体块数×１００。将各处理材料
转至１ ２００ｌｘ的光照条件下继续培养，进一步观察愈伤
组织的生长情况。
表１ Ｌ９（３４）正交实验
Ｔａｂｌｅ １ Ｌ９（３４）ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ
培养基序号 ＩＢＡ／ｍｇ·Ｌ－１ ＮＡＡ／ｍｇ·Ｌ－１ ６－ＢＡ／ｍｇ·Ｌ－１ ＫＴ／ｍｇ·Ｌ－１
１ ０ ０ ０ ０
２ ０ ０．２ １．０ ０．５
３ ０ ０．４ ２．０ １．０
４ ０．２ ０ １．０ １．０
５ ０．２ ０．２ ２．０ ０
６ ０．２ ０．４ ０ ０．５
７ ０．４ ０ ２．０ ０．５
８ ０．４ ０．２ ０ １．０
９ ０．４ ０．４ １．０ ０
１．２．２ 愈伤组织的分化 把生长状态较好的愈伤组织
切割成１ｃｍ２的小块后，接种到上述１～９号培养基中，
选愈伤组织分化率较高、愈伤组织生长良好的某几种培
养基中进行分化培养，诱导丛生芽和根的形成。
１．２．３ 试管苗的生根 将分化培养得到的长约
１．０ｃｍ、生长旺盛的不定芽从基部剪下，接种到附加不
同浓度ＩＢＡ的生根培养基（Ⅰ：ＭＳ＋ＮＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ＋
６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ ０．５ｍｇ／Ｌ；Ⅱ：ＭＳ＋ＩＢＡ ０．２ｍｇ／Ｌ＋
ＮＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ ０．５ｍｇ／Ｌ；Ⅲ：
ＭＳ＋ＩＢＡ ０．４ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋
ＫＴ ０．５ｍｇ／Ｌ）上进行生根培养。
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北方园艺２０１２（１８）：１２８～１３０ ·生物技术·
２ 结果与分析
２．１ 不同外植体和植物生长调节剂组合对愈伤组织诱
导的影响
黑暗条件下培养２０ｄ后观察，不同外植体接种后诱
导结果见图１。由图１可知，不同外植体生成愈伤组织
的能力为叶片＞茎段＞根。以叶片作为外植体对愈伤
组织的诱导率最高，除１号对照外，诱导率均达８５％以
上；以茎段为外植体的愈伤组织诱导率较高，除１号对
照外，诱导率可达２５％以上；根在各培养基中均没有愈
伤组织生成。就不同的植物生长调节剂而言，６、７、８号
培养基中茎段愈伤组织大，颜色鲜绿；６号培养基中叶片
生成的愈伤组织大，颜色鲜绿。将各处理转至光照条件
下培养１０ｄ后观察，４号培养基中叶片形成小球形黄绿
色愈伤组织；６号培养基中原已形成的愈伤组织有褐化
现象；７号培养基中叶片和茎段生成的愈伤组织均生长
旺盛，颜色最为鲜绿；８号中茎段愈伤组织生长较好，茎
段仍保持绿色。
表２ 外植体与植物生长调节剂组合对
愈伤组织的诱导率
Ｔａｂｌｅ ２ Ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｒａｔｅ ｏｆ ｅｘｐｌａｎｔｓ ａｎｄ
ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｏｎ ｃａｌｕｓ ％
培养基序号
外植体
茎段 叶片 根
１ ０ ８．３ ０
２ ５１．７ ９１．７ ０
３ ６０．０ ８６．６ ０
４ ２６．７ ８８．３ ０
５ ２６．７ ９１．７ ０
６ ７３．３ ９５．０ ０
７ １００ ８８．３ ０
８ ７８．３ ９３．３ ０
９ ５０．０ １００ ０
图１ 不同外植体诱导培养后的生长状态
注：Ａ．叶片愈伤组织；Ｂ．茎段愈伤组织。
Ｆｉｇ．１ Ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｓｔａｔｅ ａｆｔｅｒ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
Ｎｏｔｅ：Ａ．Ｃａｌｕｓ ｏｆ ｌｅａｆ；Ｂ．Ｃａｌｕｓ ｏｆ ｓｔｅｍ ｓｅｃｔｉｏｎ．
２．２ 不同植物生长调节剂组合对愈伤组织分化的影响
选用能使愈伤组织分化率较高、愈伤组织生长良好
的６～８号培养基进行愈伤组织的分化培养，分化培养
２５ｄ。由图２可以看出，７号培养基中有叶片愈伤组织
分化成丛生芽；６号培养基中有叶片愈伤组织分化成根；
８号培养基中愈伤组织继续生长，不分化。各种培养基
均未能使茎段愈伤组织分化。
图２ 不同植物生长调节剂组合对愈伤组织分化的影响
注：Ａ．叶片愈伤组织丛生芽的分化；Ｂ．叶片愈伤组织根的分化。
Ｆｉｇ．２ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ
ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｏｎ ｃａｌｕｓ
Ｎｏｔｅ：Ａ．Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｌｕｍｐｙ ｂｕｄ ｏｆ ｌｅａｆ ｃａｌｕｓ；Ｂ．Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
ｏｆ ｒｏｏｔ ｏｆ ｌｅａｆ ｃａｌｕｓ．
２．３ 不同浓度的ＩＢＡ对试管苗生根的影响
将丛生芽移入生根培养基中，培养１８ｄ后观察，在
生根培养基Ⅲ上生根率最高，为７０％，同时试管苗根系
发达、叶片伸展、茎粗壮、生长旺盛；生根培养基Ⅱ中生根
率为４５％，根系细弱；生根培养基Ⅰ中生根率仅有８％，生
根数目少，根系不发达。
３ 结论与讨论
通过组培快繁技术，可以扩大北马兜铃数量，保护
北马兜铃种质资源。该试验以北马兜铃茎段、叶片和根
为外植体，配以适当浓度的植物生长调节剂进行组织培
养快速繁殖，可直接诱导产生愈伤组织，分化丛生芽和
根系后得到再生植株。叶片是愈伤组织诱导的最佳外
植体，在 ＭＳ＋ＩＢＡ ０．４ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ
０．５ｍｇ／Ｌ培养基中愈伤组织诱导结果较好；愈伤组织分
化丛生芽的最佳培养基是 ＭＳ＋ＩＢＡ ０．４ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ
２．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ ０．５ｍｇ／Ｌ；诱导试管苗生根的最佳培养
基为 ＭＳ＋ＩＢＡ ０．４ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ
２．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ ０．５ｍｇ／Ｌ。一般认为茎尖和茎段是植
物组织培养较理想的外植体，有利于愈伤组织的生成及
芽的分化［２－８］。而对于北马兜铃而言，叶片是生成愈伤
组织和分化丛生芽的最理想外植体。
参考文献
［１］ 中国科学院植物研究所．中国高等植物图鉴（第一册）［Ｍ］．北京：科
学出版社，１９７２：５４８．
［２］ 苏文潘，张美华，黎萍．美丽马兜铃的组织培养和快速繁殖［Ｊ］．广西
热带农业，２００８（１）：１３－１４．
［３］ 周香君．大蒜多倍体化学诱导技术研究［Ｄ］．杨凌：西北农林科技大
学，２００８．
［４］ 赵琛．矮牵牛组织培养研究进展［Ｊ］．现代农业科技，２００７（２）：９－１０．
［５］ 顾地周，丛小力，宋丽利，等．木通马兜铃组织培养和快速繁殖［Ｊ］．植
物生理学通讯，２００８，４４（１）：１３６．
［６］ 魏明杰，姚振远，梅丹娜，等．樱桃组培快繁技术研究［Ｊ］．落叶果树，
２０１２，４４（２）：９－１３．
［７］ 王燕，陈丙义，章镇，等．黄毛草莓组织培养与快繁技术研究［Ｊ］．西南
农业学报，２０１２，２５（１）：２５２－２５６．
［８］ 孙利娜，龙定建，王华新，等．三角梅外植体消毒和愈伤组织诱导研
究［Ｊ］．安徽农业科学，２０１１，３９（２０）：１２０２４－１２０２５．
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·生物技术· 北方园艺２０１２（１８）：１３０～１３２
第一作者简介：乔永旭（１９７８－），男，硕士，副教授，研究方向为植物
细胞工程和植物资源开发与利用。Ｅ－ｍａｉｌ：ｑｉａｏｙｘ１２３＠１６３．ｃｏｍ．
基金项目：唐山市科技局科研资助项目（１０１５０２０２Ａ－１０）。
收稿日期：２０１２－０５－１８
非 洲 菊 再 生 体 系 的 建 立
乔 永 旭，张 永 平，张 红 心，陈 超，王 桂 兰，袁 晓 龙
（唐山师范学院 生命科学系，河北 唐山０６３０００）
摘 要：以非洲菊幼嫩花托为外植体，以 ＭＳ为基础培养基，研究了添加６－ＢＡ和ＮＡＡ的培
养基对愈伤组织诱导、丛生芽发生和丛生芽生根的影响。结果表明：花托的大小影响到愈伤组织
的诱导和褐化，０．８ｃｍ的花托愈伤组织的诱导率高且褐化率低；愈伤组织诱导和芽分化的适宜培
养基为ＭＳ＋６－ＢＡ １０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ，丛生芽增值的适宜培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ １．０ｍｇ／Ｌ＋
ＮＡＡ ０．１ｍｇ／Ｌ，生根培养基为１／２ＭＳ＋ＩＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ。
关键词：非洲菊；花托；愈伤组织；芽分化
中图分类号：Ｓ ６８１．９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１２）１８－０１３０－０３
非洲菊（Ｇｅｒｂｅｒａ ｊａｍｅｓｏｎ）为菊科大丁草属多年生宿
根花卉，别名扶郎花，非洲菊花大色美，娇姿悦目，花色
丰富，切花率高，条件适宜可以周年供应。随着鲜花产
业及市场的不断发展，非洲菊已成为世界五大切花之
一［１］，其繁育工作也逐步受到科研工作者的重视。由于
非洲菊多年栽培，其花朵的品质和产量逐年下降，严重
影响到生产者的积极性，因此采用组织培养的方法繁育
脱毒苗已成为目前重要的繁殖手段［２］；另外，以再生体
系为平台，进行分子育种也逐步提上日程。基于此，该
试验以非洲菊幼嫩花托为外植体，接种在添加６－ＢＡ和
ＩＡＡ培养基中，筛选最适合的外植体诱导与分化的最佳
培养基，以期建立高效稳定的再生体系，为培育优良的
非洲菊品种奠定基础。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
采用唐山市西郊苗圃日光温室内的非洲菊花蕾为
外植体。２个切花品种：黄瓣黑蕊、红瓣黄蕊。花瓣直径
分别为０．８ｃｍ左右、１．５ｃｍ左右。
１．２ 试验方法
１．２．１ 不同消毒时间的比较 采用大小一致且直径为
０．８ｃｍ左右的花蕾作为外植体，将采取的花蕾用洗衣粉
溶液浸泡５ｍｉｎ，再用自来水反复冲洗３０ｍｉｎ，７５％的酒
精溶液浸泡３０ｓ，然后分２个处理，①０．１％ ＨｇＣｌ２溶液
处理５ｍｉｎ；②０．１％ ＨｇＣｌ２溶液处理１０ｍｉｎ。之后用无
菌水冲洗４～６次，用滤纸将花蕾表面水分吸干，备用。
将经过２种灭菌时间处理后的花蕾剥去苞片及花瓣，留
下花托，并将花托一分为二，花托朝下，花序朝上接种于
ＭＳ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ培养基中，培养
１个月，每３ｄ观察１次，记录试验结果。
１．２．２ 花蕾大小对非洲菊诱导分化效果的比较 将直
Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｏｆ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｒａｐｉｄ Ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｏｆ
Ａｒｉｓｔｏｌｏｃｈｉａ ｃｏｎｔｏｒｔａ Ｂｕｎｇｅ
ＳＨＡＯ Ｈｏｎｇ，ＳＵＮ Ｒｕｉ，ＺＨＡＮＧ Ｌｉ－ｍｉｎ，ＺＨＡＮＧ Ｗｅｉ－ｄｏｎｇ，ＷＡＮＧ Ｚｈｅｎ
（Ｃｏｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｉａｍｕｓｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉａｍｕｓｉ，Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ １５４００７）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｒｉｓｔｏｌｏｃｈｉａ ｃｏｎｔｏｒｔａ Ｂｕｎｇｅ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｆｏｒ ｒａｐｉｄ ｐｒｏｐａｇａｔｅｄ ｂｙ ｐｌａｎｔ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，ａｎｄ ｔｈｅ
ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｆｏｒ ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｌｅａｖｅｓ，
ｔｈｅ ｍｅｄｉｕｍ ｏｆ ＭＳ＋ＩＢＡ ０．４ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ ０．５ｍｇ／Ｌ ｆｏｒ ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｂｅｔｔｅｒ；ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ
ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｌｕｍｐｙ ｂｕｄ ｗａｓ ＭＳ＋ＩＢＡ ０．４ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ ０．５ｍｇ／Ｌ；ｔｈｅ ｂｅｔｔｅｒ ｍｅｄｉｕｍ
ｆｏｒ ｒｏｏｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｗａｓ ＭＳ＋ＩＢＡ ０．４ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ ０．５ｍｇ／Ｌ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ａｒｉｓｔｏｌｏｃｈｉａ ｃｏｎｔｏｒｔａ Ｂｕｎｇｅ；ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ；ｃａｌｕｓ；ｃｌｕｍｐｙ ｂｕｄ
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