全 文 ：CHINA MODERN MEDICINE 中国当代医药
2012 年 9月第 19卷第 25期 ·论 著·
爵床科假杜鹃属植物，在全球有 230～250 种。 分布于东
半球的热带至亚热带地区，非洲种类特多。 我国有假杜鹃 B.
cristata L.等 4种 1个变种，常生于南部和西南部海拔 1 000 m
以下地区，以广东、广西、贵州、云南、四川分布最广 [1]。 文献
报道假杜鹃属植物具有多种生理活性，如花叶假杜鹃地上部
分的甲醇提取物具有非常显著的神经药理活性， 与 GAGBA
受体呈现良好的剂量相关性 [2]，并具有明显的抗炎活性 [3]。 根
的提取物能明显干扰雄鼠精子生成，但对精原细胞无明显影
响[4]。
植物遗传学认为，假杜鹃属植物亲缘关系相近，化学成
分相近， 药理作用相近 [5]。 由于假杜鹃属植物花叶假杜鹃
（Barleria lupulina Lindl.）有神经药理作用方面的报道，且民
间常用于减缓压力，因此，笔者对我国南方分布广泛的假杜
鹃开展相关研究，希望能开发出新的药用资源植物。 本课题
将着眼于发挥天然植物药的优势，对假杜鹃的神经药理活性
进行初步评估和探讨，为今后有关研究奠定实验依据。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 动物 昆明种小鼠，体重（20±2） g，雌雄各半，由山东大
学实验动物中心提供。
1.1.2 仪器 YLS-1A 多功能小鼠自主活动记录仪， 山东省医
学科学院设备供应维修站；1 mL 一次性注射器，上海双鸽实
业有限公司；R-201 旋转蒸发仪， 上海申生科技有限公司；
ZK-82A 电热真空干燥箱，上海实验仪器厂。
1.1.3 药品及试剂 假杜鹃于 2006 年 12 月在广州白云山脚
采挖，经南方医科大学中医药学院药用植物与鉴定学教研室
马骥教授鉴定为爵床科假杜鹃属植物假杜鹃 （Barleria
crisrara）。 本实验所用为该植物地上部分，简单铡成小段后，
常温下晾干，备用。乙醇购自齐鲁石化化学试剂厂，石油醚和
丙二醇购自上海试剂一厂，其他试剂均为分析纯。 戊巴比妥
钠购自 sigma 公司。
1.2 方法
1.2.1 假杜鹃乙醇提取物的制备 干燥植物粉碎成粗末，称取
250 g 用 8倍（2 000 mL）、5 倍（1 250 mL）、5 倍（1 250 mL）乙
醇分别在 65℃水浴下回流 3 h、2 h 和 2 h。 抽滤合并乙醇液，
45℃下减压回收乙醇，流浸膏于真空烘箱中 45℃减压烘干后
研粉，滤纸包裹用石油醚（30～60℃）55℃索氏回流约 10 h 脱
脂。 烘干称重得 18.6 g，收率为 7.44%。 冰箱中冷贮，备用。
1.2.2 急性毒性实验 通过预试验摸索出假杜鹃乙醇提取物
对小鼠的最大致死量为 5 g/kg，在此基础上开展急性毒性实
验。 取体重（20±2） g小鼠 24 只，随机分成 3 组，从 4.8 g/kg的
剂量开始，组距间比设为 0.958，即分别为 4.4 g/kg、4.6 g/kg、
4.8 g/kg 给 3 组小鼠于晚上 20 时一次腹腔注射给药，注射容
量为 0.2 mL/10 g ，然后连续观察 7 d，记录逐日的小鼠毒性
反应及死亡数[6]。
1.2.3对小鼠自主活动的影响实验 取体重（20±2） g小鼠 27 只，
随机分成 3 组，分别给予 0.9%氯化钠溶液（空白对照组），提
取物剂量 400 mg/kg（低剂量组）、700 mg/kg（中剂量组 ）和
1 000 mg/kg（高剂量组），腹腔注射，注射容量为 0.2 mL/20 g，
30 min 后放在多功能小鼠自主活动记录仪的箱格中适应
3 min，分别记录 5 min 内小鼠的活动次数[7]。
1.2.4 延长戊巴比妥钠的睡眠时间实验 取体重 （20±2） g 小
鼠 40 只，随机分成 4 组，分别给予 0.9%氯化钠溶液（空白对
照组），提取物剂量 400 mg/kg（低剂量组）、700 mg/kg（中剂量
组）和 1 000 mg/kg（高剂量组）腹腔注射，注射容量为 0.2 mL/
20 g， 给药 30 min 后分别腹腔注射戊巴比妥钠 70 mg/kg，观
假杜鹃提取物对小鼠镇静催眠作用的实验研究
余 霞
山东药品食品职业学院，山东淄博 255011
[摘要] 目的 探讨假杜鹃提取物对小鼠的镇静催眠作用。 方法 小鼠腹腔注射给药， 观察小鼠延长戊巴比妥钠的睡
眠时间及自主活动次数。 结果 假杜鹃提取物能显著延长小鼠戊巴比妥钠睡眠时间（P < 0.01），减少小鼠自主活动
次数（P < 0.05）。 结论 假杜鹃提取物对小鼠有明显的镇静催眠作用。
[关键词] 假杜鹃；镇静；催眠；首演研究
[中图分类号] R-33 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2012）09（a）-0005-03
Experimental study on effects of extracts from Barleria cristata on the seda-
tion and hypnosis in mice
YU Xia
Shandong Drug and Food Vocational College, Zibo 255011, China
[Abstract] Objective To investigate the effects of extracts from Barleria ctrigosa on the sedation and hypnosis in mice.
Methods The sleep time of sodium pentobarbital extending and the times of autonomous activity of mice were observed by
intraperitoneal injection the extracts of Barleria strigosa. Results The extracts of Barleria strigosa obviously exetended the
sleep time of sodium pentobarbital (P < 0.01), and decreased the times of autonomous activity of mice (P < 0.05). Conclu-
sion The extracts of Barleria strigosa has obvious effects on the sedation and hypnosis of mice.
[Key words] Barleria strigosa; Sedation; Hypnosis; Experimental study
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中国当代医药 CHINA MODERN MEDICINE
·论 著· 2012 年 9月第 19卷第 25期
察睡眠小鼠只数，并记录小鼠的睡眠时间（以翻正反射消失
为入睡时间，从翻正反射消失至恢复时间为睡眠持续时间）[7]。
1.3 数据处理
统计方法采用 SPSS 10.0 软件包对数据进行 t 检验和卡
方检验分析数据，t检验结果以 x±s表示。 以 P ＜ 0.05 为差异
有统计学意义。
2 结果
2.1 急性毒性实验结果
不同给药剂量所引起的小鼠死亡数见表 1。
表 1 急性毒性实验结果
用寇氏改进法计算腹腔注射乙醇提取物小鼠的 LD50
为（4.645±0.094） g/kg（P < 0.05）。
2.2 对小鼠自主活动的影响
结果见表 2。 实验结果表明，假杜鹃提取物各剂量组均
能减少小鼠活动次数，并且与空白组比较，差异均有统计学
意义（P < 0.05）。 随着剂量的增大，小鼠自主活动次数减少。
各组之间剂量变化与活动次数之间存在一定的关系。
表 2 假杜鹃提取物对小鼠自主活动的影响（n = 9）
注：与空白对照组比较，﹡P < 0.05
2.3 延长戊巴比妥钠的睡眠时间
结果见表 3、4。 实验结果表明，小鼠注射戊巴比妥钠后，
各组均有小鼠入睡，且均比空白对照组入睡率高，差异具有
统计学意义（P < 0.05）。 假杜鹃提取物对注射戊巴比妥钠的
小鼠睡眠时间有一定影响。 与空白对照组比较，各剂量组均
能明显延长小鼠睡眠时间，差异有统计学意义（P < 0.001）。
说明假杜鹃提取物在一定程度上能够改善小鼠睡眠，具有一
定催眠作用。
表 3 假杜鹃提取物对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡只数的影响（n）
3 结论
假杜鹃提取物具有明显的镇定、催眠作用，明显抑制小
鼠自主活动次数，明显增加阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡
数目，显著延长阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间，提示
该植物具有一定的镇静催眠作用。 此外通过急性毒性实验，
假杜鹃提取物会对正常小鼠产生一定的毒性，大剂量腹腔注
射能引起小鼠死亡。
4 讨论
精神疾病主要是一种以表现在行为、心理活动上的紊乱
为主的神经系统疾病。临床上的治疗方案主要以心理引导为
主，辅以药物治疗。 临床常用的苯二氮卓类（benzodiazepines，
BZs）和巴比妥（barbiturates）类药物，均通过作用不同的受体，
增加抑制大脑神经冲动的递质浓度从而达到改善睡眠的目
的[8]。尽管化学药物有一定的治疗效果，但是日渐突出的不良
反应，如长期服用后易引起依赖及明显的阈下效应、对生活
和工作质量的影响，有的甚至能引起癫痫等更为严重的神经
疾病等， 这些副反应极大地限制了化学药物在该领域的应
用。 近年来，从植物药中寻找具有抗精神疾患的药物受到关
注，特别是欧洲在植物药领域取得的瞩目成就，如缬草、卡瓦
胡椒等天然植物的成功开发与应用，天然药物的多靶点治疗
作用、安全和副作用少等特点逐渐引起药学界的重视。
据文献报道，假杜鹃属植物主要含有环烯醚萜类的化合
物。 Suksamrarn 等经硅胶柱层析，用氯仿－甲醇反复洗脱，从
花叶假杜鹃（Barleria lupulina Lindl.）中分离得到 9 个环烯醚
萜苷[7]。Kanchanapoom 等经制备型 ODS 柱从泰国传统草药糙
伏毛假杜鹃（Barleria strigosa）中也分离到了一个新的环烯醚
萜苷，除此外，还分离到一个四胺甜菜碱和一个新的苯乙烷
类糖苷[8]。 而 V.Suba 等[9]则认为花叶假杜鹃的物质以黄酮类、
类固醇和单宁酸为主。 化学研究表明，假杜鹃属植物主要含
有环烯醚萜、黄酮、苯苯乙烷类糖苷等成分 [9-11]。 关于本属植
物活性成分的研究，国外存在争议，其中以环烯醚萜苷的报
道最多，也没有文献能确切显示假杜鹃属植物的药理活性与
这类物质相关，更缺乏假杜鹃的报道，因此值得作进一步探
讨。
[参考文献]
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1
2
3
8
8
8
4.4
4.6
4.8
0
3
7
0.0
37.5
87.5
分组 动物数 剂量（g/kg） 死亡数（n） 死亡率（%）
空白对照组
低剂量组
中剂量组
高剂量组
0.2 mL
400
700
1 000
113.4±48.0
22.0±3.9﹡
18.9±4.1﹡
16.6±4.2﹡
分组 剂量（mg/kg） 活动次数（x±s，次）
空白对照组
低剂量组
中剂量组
高剂量组
0.2 mL
400
700
1 000
10
10
10
10
0
9
5
2
0
90
50
20
分组 剂量（mg/kg） 实验小鼠数 入睡数 入睡率（%）
空白对照组
低剂量组
中剂量组
高剂量组
0.2 mL
400
700
1 000
37.10±1.45
58.80±4.03﹡
104.20±7.68﹡
167.30±16.47﹡
分组 剂量（mg/kg） 睡眠时间（x±s，min）
表 4 假杜鹃提取物对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的影响（n = 10）
注：与对照组比较，﹡P < 0.001
（下转第 8页）
6
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·论 著· 2012 年 9月第 19卷第 25期
（上接第 6页）
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（收稿日期：2012-05-15 本文编辑：林利利）
1.2.2 细胞组化检测 TIMP-3 在细胞中的表达 取MCF-7 细
胞经消化离心后以 5×107个/L的密度接种于预置盖玻片的 6孔
板中，待细胞贴壁、基本长满盖玻片后，更换无血清培养基饥
饿 24 h，24 h后分别向各孔中施加 TCPT，使其终浓度分别为10、
40、80 mg/L，24 h后吸出细胞培养液，取出细胞爬片，0.01 mol/L
PBS冲洗 3 次，每次 3 min，用 4 g/L 多聚甲醛固定，每一浓度
组制备 16张标本。 对细胞爬片进行 TIMP-3免疫组化 SP法
染色，染色结果在显微镜下观察并摄影。
1.3 数据统计
采用 SAS 8.2 统计软件对数据进行分析处理 ，mRNA
相对表达量以均数±标准差表示，组间均数比较采用 t 检验，
以 P < 0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
免疫细胞组化结果显示，TIMP-3 在 MCF-7 细胞内均有
表达， 仅从表观上看，HCPT 对其诱导表达作用差异不明显，
但 HCPT 处理组细胞呈现明显的空泡化，见图 1。
A：HCPT 诱导组；B： PBS 空白对照组（×200）；C：阴性对照（×400）
A:HCPT induction group;B:PBS control group;C:Negative control.
图 1 免疫组化检测 TIMP3 细胞表达
Fig.1 TIMP-3 expression detected by Immunocytochemistry
3 讨论
近年来有研究表明 ，HCPT 及其衍生物可通过作用于
DNA 拓扑异构酶Ⅰ来抑制 DNA 复制、转录和有丝分裂，达
到抗肿瘤作用。 HCPT 衍生物 7-乙基羟基喜树碱可以募集
S 期细胞，促进吉西他滨（抗肿瘤药物）代谢物的聚集，减少
关卡蛋白激酶 1 的合成，即 7-乙基羟基喜树碱有助于肿瘤
细胞敏化，促进其他化疗药物的效应 [7]。 HCPT 的抑癌机制
的研究深入将有助于进一步对其进行结构改造和临床应
用。 以往的研究发现，HCPT 对乳腺癌细胞株 MCF-7 细胞
的增殖起抑制作用。 基因表达谱研究发现，HCPT 诱导后，
共获得了差异表达信号转导相关基因 55 个， 涉及 6 个信
号通路 [8]。
本实验利用免疫细胞化学法检测了羟基喜树碱（HCPT）
对乳腺癌 MCF-7细胞的空泡化作用。 HCPT 对 TIMP-3诱导
表达作用差异不明显，但 HCPT 处理组细胞呈现明显的空泡
化，因此，HCPT 可诱导乳腺癌 MCF-7细胞空泡化作用，希望
本研究对寻找羟基喜树碱在乳腺癌治疗中的潜在新靶点有
所帮助，并为临床治疗乳腺癌提供新思路。
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（收稿日期：2012-05-02 本文编辑：林利利）
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