全 文 ：第 1期~第 3期 光谱仪器与分析 201

野木瓜中总皂甙及齐墩果酸含量的测定

陆秋艳，吴霞琴*，章宗穰
(上海师范大学 生命与环境科学学院化学系，上海 200234)

摘 要：本文采用超声波提取法从野木瓜中提取皂甙，并用高氯酸-香草醛比色法测定了野木瓜中总
皂甙的含量，用反相高效液相色谱法测定了野木瓜中齐墩果酸的含量。所用的色谱柱为 Hypersil
C18(4.6×150mm,5 　 m)，在选定的色谱条件下，齐墩果酸在 5.4—43.2 　 g.mL-1 浓度范围内具有良好
的线性关系。样品的回收率为 92.1-97.9%，相对标准偏差为 1.56-2.78%。
关键词：野木瓜；皂甙；齐墩果酸；分光光度法；高效液相（HPLC）

皂甙具有广泛的药理作用和生物活性，如免疫作用、抗肿瘤、防治心血管疾病等，而且还可以
用作食品的天然甜味剂、抗氧化剂等[1]。野木瓜中含有丰富的皂甙，已有相关的临床研究报道[2]。其
中，齐墩果酸属五环三萜类皂甙,具有极高的药用价值，如护肝、抗炎、增强免疫能力、抑制变态反应
以及降血脂、降血糖等作用。然而，由于齐墩果酸的结构比较复杂，人工合成步骤较为繁琐，目前主要
依赖从植物中提取[3]。所以，从野木瓜中直接提取齐墩果酸，对进一步开发野木瓜的药用价值具有重
要的意义。
本文采用超声波法从野木瓜中提取皂甙，用分光光度法测定野木瓜中总皂甙的含量。同时，探索用
反相高效液相色谱法（HPLC）测定野木瓜提取液中齐墩果酸的含量，建立一种简便、快速的中药有效成
份的分析检测方法。
1 仪器及试剂
1.1 仪器
用于野木瓜中有效成分提取的主要仪器是 SK2200H 型超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）、
RE-85C 旋转蒸发器（上海青浦沪西仪器厂）、SHZ—Ⅲ循环水式真空泵（上海亚荣生化仪器厂）。
UV 8500 紫外可见分光光度计（上海天美科学仪器有限公司）用于分光光度法测试野木瓜中总皂甙。
高效液相色谱法测试齐墩果酸是用 Agilent 1100 高效液相色谱仪进行。其中，色谱柱为 Hypersil
C18（4.6×150 mm,5 　 m）、DAD 检测器，检测波长为 215.8 nm，流动相选择乙腈-水(85:15)、流速为
1.0 mL/min；柱温控制在 25℃，进样量是 10 　 L。

基金项目：上海市教委基金（03DZ07）、上海师范大学校基金（SK200406）资助项目。
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1.2 试剂
齐墩果酸标准品（购自 Sigma 公司），野木瓜粉末（广东省和平药业有限公司提供的野木瓜树枝、
树叶，由顺天堂国药房加工），乙腈（色谱纯），无水乙醇、高氯酸、香草醛、冰醋酸、乙醚和正丁醇等
试剂均为分析纯。
2 实验方法与结果
2.1 高氯酸－香草醛比色法测定野木瓜中总皂甙含量
2.1.1 最大吸收波长的确定[4]
精确称取齐墩果酸标准品 3.3 mg，用无水乙醇定容至 10 mL，溶液浓度为 0.33 mg.mL-1。从中移
取标准溶液 100 µL 放入 10 mL 的比色管中，置于 70℃水浴上蒸干后依次加入 0.3 mL 新配制的 5%香草
醛-冰醋酸混合溶液和 1.0 mL 高氯酸（70—72%），置于 60℃水浴中加热 20 min，用流水冷却后再加入
5 mL 冰醋酸、摇匀，在 400-800 nm 范围内进行波长扫描。结果表明，齐墩果酸与香草醛及高氯酸反应
后的生成物在 549.5 nm 处有一最大吸收峰。因此,后续实验选择该波长作为测定波长。
2.1.2 工作曲线的建立
按 2.1.1 节所述方法配制齐墩果酸标准溶液。分别移取 100、200、300、400、500、600 µL 标准溶
液于 6 个 10 mL 的比色管中，70℃水浴上蒸干后分别加入 0.3 mL 新配制的 5%香草醛-冰醋酸溶液，以
及 1.0 mL 高氯酸，置于 60℃水浴加热 20 min，用流水冷却后再在每个比色管中分别加入 5mL 冰醋酸、
摇匀，测量 549.5 nm 波长处的吸光度值 A。测试结果表明是一很好的线性关系（图１）。
5 10 15 20 25 30
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
Ab
so
rb
an
ce
C(µg.mL-1)

图1 齐墩果酸测试的标准曲线
经统计分析得到回归方程为：
Ｙ = 0.03949 + 0.03189 Ｘ
式中，Ｙ为吸光度，Ｘ为齐墩果酸含量(　 g.mL-1)，R=0.9978。
2.1.3 样品溶液的制备
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称取干燥的野木瓜粉末 5.0 g,放入锥形瓶中，加 50 ml 无水乙醇,置于超声波器内振荡 30 min 后
过滤得到含野木瓜皂甙等有效成分的滤液，残渣再重复振荡提取两次，滤液合并，并用少量无水乙醇洗
涤容器，洗液均并入滤液中；将滤液减压浓缩至膏状后用适量超纯水溶解提取物，然后，用乙醚萃取水
液 4 次（30 mL/次），弃去乙醚层，再用正丁醇萃取水液 4 次（30 mL/次），合并萃取液，用旋转蒸发器
把萃取液蒸干，回收正丁醇，用无水乙醇定容至 25mL。
2.1.4 测试方法的精密度与重现性
为了评价所用方法的精密度，取 6 个不同浓度的标样，并按 2.1.2 所述方法操作，在 549.5 nm 波
长下测定 A值，并从工作曲线上求得其相应的浓度，标准偏差及相对标准偏差均在允许的误差范围内（表
1）。
表 1 分光光度法测试标样的精密度
标样浓度
(μg/mL)
测定平均值（n=9）
(μg/ml)
标准偏差

相对标准偏差(%)
5.24
10.48
15.71
20.95
26.19
31.43
5.124
10.359
15.473
21.052
26.339
31.864
0.09
0.23
0.29
0.33
0.63
0.75
1.75
2.22
1.87
1.57
2.39
2.35
2.1.5 回收率试验
取样品液 6 份,往其中 3 份加入一定量的齐墩果酸标准品,按上述方法测定野木瓜总皂甙含量,经计
算得回收率，结果见表 2。
表2 分光光度法测试野木瓜提取物中总皂甙的回收率试验
编号 野木瓜样品液
（μg/mL）
加入标液量
（μg/mL）
理论值
（μg/mL）
实测值
（μg/mL）
回收率（%）
1
2
3
13.443
17.061
20.688
10.076
10.076
10.076
23.519
27.137
30.764
24.033
28.346
31.217
105.1
112.0
104.5
2.1.6 实际样品的分析
取 2.1.3 中所述的样品溶液 3 份，按照 2.1.2 中香草醛－高氯酸法显色后,在 549.5 nm 波长处测定
其吸光度，根据工作曲线计算得野木瓜中总皂甙含量为 5.89 mg.g-1（n=3）。
2.2 高效液相法测定野木瓜中齐墩果酸的含量[5，6]
由于高氯酸－香草醛分光光度法测定的是总皂甙含量,提取液中色素等成分会对测定产生干扰，从
而使测定结果偏高。HPLC 法则可以测定游离的齐墩果酸的含量,并具有简便快速等优点，为此，我们探
索了应用 HPLC 法测定野木瓜中齐墩果酸的实验条件。
2.2.1 标准曲线的测试
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准确称取齐墩果酸标准品 5.4 mg，加入无水乙醇，定容至 5 mL，即配制成齐墩果酸标准溶液。将
此标准溶液逐级稀释，分别进样 10 　 L，按 1.1 节所述的色谱分析条件，以相应组分的色谱峰(Y)对其
浓度(X,　 g.mL-1)进行线形回归分析，计算得回归方程如下：
Y=3.33086X-0.615793
相关系数 R=0.9997。齐墩果酸的检出下限为 2 　 g.g-1。
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
0
20
40
60
80
100
120
140
160
A
re
a
Amount[µg/mL]

图2 HPLC测定齐墩果酸的标准曲线
2.2.2 样品溶液的制备
称取干燥的野木瓜粉末 5.0 g,放入锥形瓶中，加无水乙醇 50 ml,用超声波振荡器振荡 30 min,将
提取液过滤，残渣再重复振荡提取两次，合并滤液，并用少量无水乙醇洗涤容器，洗液并入滤液中，减
压浓缩至膏状，除去醇液，真空干燥，用适量无水乙醇溶解后定容至 20mL,摇匀，放置备用。
2.2.3 齐墩果酸的色谱定性分析
齐墩果酸在紫外吸收区的吸收波长较低（215 nm），使用甲醇洗脱，背景值高，易造成基线漂移。
因此，本实验选用了透光率较好的乙腈为流动相，收到了较为理想的分析结果。测得野木瓜提取液样品
和对照品齐墩果酸标准溶液的色谱图分别示于图 3 和图 4。

图 3 野木瓜提取物色谱图 图 4 齐墩果酸标准品的色谱图
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2.2.4 方法的精密度和回收率试验[6]
称取野木瓜粉末样品 4 份（每份 5.0 g）,各加入齐墩果酸对照品 0.3 mg,4 份样品同时提取,其方
法同野木瓜样品溶液的制备,用乙醇定容至 20 mL。然后，分别吸取 10μL 进样,进行 HPLC 测定,用外标
法计算得到齐墩果酸含量（表 3）。

表3 齐墩果酸的回收试验结果
成分 加标准品量（mg） 回收率 X（%） RSD%
齐墩果酸 0.3
0.3
0.3
0.3
93.7
92.1
97.9
93.2
1.56
1.69
2.40
2.78
2.2.5 样品的定量分析
按野木瓜样品制备方法（2.2.2）制备样品溶液,经 0.45 　 m 滤膜过滤后作为测试样品。按所定的
色谱条件进样 10 　 L,测得野木瓜中齐墩果酸的平均含量为 59.65 　 g.g-1。
3 结论
采用反相高效液相法能将待测物与其它物质分离，操作简便，结果准确，且样品经提取、浓缩、定
容后不需要进一步纯化，适用于野木瓜提取液中齐墩果酸的直接测定。

参考文献
[1] 高学敏，顾鹏，李力，等.皂甙分析方法的研究进展.中国食品添加剂，2000,(3):54-57.
[2] 郑庆安，杨崇仁.木通科植物的化学分类.植物学通报，2001，18（3）：332—339.
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