全 文 ：2%以内 ,其他杂质的量均 <1% 。
3　讨论　
3.1　展开剂的选择　核糖霉素的分子结构与新霉素
B相似 ,仅 3位上的取代基不同 ,两者的极性相似 。参
照 《中华人民共和国药典》2005年版(二部)硫酸新霉
素中新霉胺的限度检查方法[ 2] ,确定展开剂为:2-丁酮-
甲醇-异丙醇-浓氨水-水(10：12：3：8：2)。在此展
开系统中 ,核糖霉素主斑点的 Rf值约为 0.25,核糖霉
素 、新霉胺以及其他降解产物均分离完全 。笔者曾对
此展开系统中有机相和水相的比例做一系列的调整以
增大 Rf值 ,但效果均不理想 。若增大有机相的比例 ,可
使斑点更清晰 ,但同时 Rf值减小 。同时采用 10%醋酸
铵代替展开剂中的水 ,可使 Rf值约为 0.4,但斑点的清
晰度下降。最终选择 2-丁酮 -甲醇 -异丙醇-浓氨水 -水
(10：12：3：8：2)为展开剂 。
3.2　显色剂的选择　取最低检测限实验样品 ,依法展
开后 ,分别选择①碘蒸气 , ② 0.02 g茚三酮溶于 50 mL
乙醇和 10mL冰醋酸 , ③ 0.2%茚三酮水饱和正丁醇三
种显色剂显色。结果表明 ,三种显色剂的最小检测量
均为 0.5μg;显色剂①所显斑点大 ,色浅 ,且易褪色;显
色剂③比显色剂②所显斑点颜色深 ,且褪色较慢。分
析原因可能有:显色剂③中茚三酮的浓度比②的大;茚
三酮的显色反应的最适 pH值为 5 ～ 7,而显色剂②中
冰醋酸的比例较大 ,使显色剂呈酸性。故选 0.2%茚三
酮的水饱和正丁醇溶液作为显色剂 。
实验结果表明 ,笔者所建立的薄层色谱法检查注
射用硫酸核糖霉素的有关物质 ,核糖霉素主斑点与其
他杂质斑点分离完全 ,方法简单易行 ,可用于注射用硫
酸核糖霉素有关物质的检查 。
[参考文献 ]
[ 1] 　吴丽辉.硫酸核糖霉素无菌喷雾工艺的改进 [ J] .福建化
工 , 2005, 34(4):25-26.
[ 2] 　国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[ Z] .北
京:化学工业出版社 , 2005:748-749.
白花土元胡药材的高效液相色谱法指纹图谱研究
施　菁 1 ,王　炜 1 ,陈柳蓉 2
(1.浙江医学高等专科学校 ,杭州　310053;2.浙江大学药学院 ,杭州　310003)
[摘　要 ] 　目的　研究白花土元胡药材的高效液相色谱(HPLC)法指纹图谱。方法　采用反相高效液相色谱(RP-
HPLC)法 , SymmetryC
18
色谱柱(4.6 mm×150 mm, 5 μm), 以乙腈为流动相 A, 以 0.1%磷酸溶液(用三乙胺调节 pH
6.00)为流动相 B,梯度洗脱 ,检测波长 220nm。结果　共标出 9个共有峰 , 方法学考察表明 , 本研究建立的分析方法有
较好的重复性;不同部位的白花土元胡药材指纹图谱差异有显著性。结论　建立的方法用于白花土元胡药材的鉴别和
质量评价简便 、准确 ,为深入研究白花土元胡药材的质量标准提供了实验基础。
[关键词 ] 　白花土元胡;梯度洗脱;指纹图谱;色谱法 ,高压液相
[中图分类号 ] 　R282.71;R927　　　[文献标识码 ] 　A　　　[文章编号 ] 　1004-0781(2008)09-1108-03
FingerprintProfileofCorydalishumosaMigo.byHPLC
SHIJing1 , WANGWei1 , CHENLiu-rong2(1.ZhejiangMedicalColege, Hangzhou310053, China;2.Colege
ofPharmay, ZhejiangUniversity, Hangzhou310031, China)
ABSTRACT　Objective　ToestablishanHPLCmethodtomapfingerprintprofileCorydalishumosaMigo.　Methods　
AnRP-HPLCmethodwasusedwithgradientelutionandaSymmetryC18 column(4.6mm×150 mm, 5 μm).ThemobilephaseAwasacetonitrile, andthemobilephaseBwas0.1% phosphoricacid(adjustedtopHto6.00withtriethylamine).Thedetective
wavelengthwasat220 nm.　Results　Ninecommonpeakswereconfirmedinfingerprints.Themethodologicalevaluationshowed
thattheRP-HPLChadagoodrepeatability.ThefingerprintsfromdifferentpartsofCorydalishumosaMigo.werediverse.　
Conclusion　HPLCwasasimpleandprecisemethodtoidentifyfingerprintofCorydalishumosaMigo., moreoverprovidedan
experimentalbaseforfurtherqualitycontrol.
KEYWORDS　CorydalishumosaMigo.;Gradientelution;Fingerprintchromatogram;HPLC
　　白花土元胡 CorydalishumosaMigo.属于紫堇属延
胡索类药材 ,为浙江省特有分布植物种 ,是宝贵的药用
植物种质资源 , 因不良生态环境等因素而日趋濒
危 [ 1] 。该植物分布区域狭窄 ,现知仅分布于浙江西部
海拔 500 ～ 1 000 m的山区 ,浙江天目山区 ,临安西天
目 、清凉山 、安吉龙王山均有分布 ,仅在民间使用。白
·1108· HeraldofMedicineVol.27 No.9September2008
花土元胡在系统发育上与延胡索相近 ,但其形态及所
含成分又与延胡索不尽相同而为一个独立的种 ,而目
前国内外对其研究报道极少 [ 2] 。其块茎含有延胡索
甲素 、乙素及一些未知成分 ,而具有一定的生理活性。
由于受产地 、生态环境 、采收季节等影响 ,仅对其中某
几个成分进行定性 、定量分析 ,并不能有效地控制其质
量 。笔者根据指纹图谱技术要求 ,采用高效液相色谱
(HPLC)法对白花土元胡药材的指纹图谱进行了初步
研究 ,以期为传统中药延胡索提供新药源 ,并为延胡索
的育种 、复壮工作提供间接资料 。
1　仪器与试药　
1.1　仪器　Waters2695液相色谱仪(包括梯度泵 、自
动进样 器等 ), Waters996 二极 管阵 列检 测 器 ,
Milennium工作站 (美国 Waters公司)。 MetlerAE
240电子天平 (梅特勒公司);水浴锅 (上海实验仪器
厂);超声波震荡器(上海金利仪器公司)。
1.2　试药　延胡索乙素对照品(中国药品生物制品检
定所);乙腈为色谱纯;三乙胺和磷酸为分析纯;水为超
纯水 。 10批白花土元胡药材来源见表 1。上述药材由
浙江省医学科学院张渝华教授采集并鉴定。
表 1　白花土元胡药材的来源及编号　
编号 产地 采收季节
1 临安西天目 2000年春
2 临安西天目 2005年春
3 临安西天目 2006年春
4 浙江清凉山 2005年春
5 浙江安吉 2000年秋
6 浙江安吉 2005年秋
7 浙江安吉 2006年春
8 浙江清凉山 2005年秋
9 浙江清凉山 2004年秋
10 临安西天目 2005年秋
2　方法与结果　
2.1　色谱条件 　SymmetryC18色谱柱 (4.6 mm×
150mm, 5μm),流动相 A为乙腈 ,流动相 B为 0.1%
磷酸溶液(用三乙胺调节 pH6.00),梯度洗脱。检测
波长 220 nm,柱温 30℃。
2.2　溶液的制备　
2.2.1　供试品溶液的制备　精密称取样品药材 1 g,
[收稿日期 ] 　2007-09-24　　　[修回日期 ] 　2007-11-02
[作者简介 ] 　施　菁(1973-), 女 , 浙江杭州人 , 副教授 ,
硕士 , 从事药物分析教学与科研工作。 电话:0571 -87692683,
E-mail:shij136@hotmail.com。
[通讯作者 ] 　陈柳蓉 , 女 , 副教授 , E-mail:linda@hotmail.
com。
置 5 mL量瓶中 ,加入约 5 mL的 50%甲醇 ,冷浸过夜
后 ,超声提取 60 min, 将提取液高速离心 20 min
(14 000r·min-1),取上清液用孔径 0.45 μm微孔滤
膜过滤 ,即得样品溶液 。
2.2.2　对照品溶液的制备　精密称取延胡索乙素对
照品适量 ,甲醇制成含延胡索乙素 100 μg· L-1的溶
液 ,用孔径 0.45μm微孔滤膜过滤 ,作为对照品溶液 。
2.3　方法学考察　
2.3.1　精密度考察　取 1号供试液 ,连续进样 6次 ,
记录图谱 , 11号峰(延胡索乙素)相对保留时间和相对
峰面积的 RSD分别为 0.23%和 1.73%,其他 11个共
有峰的相对保留时间的 RSD为 0.05% ～ 0.26%,相对
峰面积的 RSD为 1.32% ～ 4.25%,表明精密度良好。
2.3.2　白花土元胡 HPLC指纹图谱的重复性　取 1
号白花土元胡粉末 6份 ,精密称定 ,按照 2.2.1方法制
备供试液 ,分别进样 ,记录图谱 , 11号峰(延胡索乙素)
相对保留时间和相对峰面积的 RSD为 0.28%和
2.51%,其他 11个共有峰的相对保留时间的 RSD为
0.03% ～ 0.76%, 相对峰面积的 RSD为 1.88% ～
4.28%。
2.3.3　白花土元胡 HPLC指纹图谱的稳定性实验　
取 1号供试液 ,在 0, 3, 6, 9, 12, 18h进样 ,记录图谱 ,在
12h内 ,测定 11号峰(延胡索乙素)相对峰面积的 RSD
为 4.37%,其他 11个共有峰的相对峰面积的 RSD为
0.64% ～ 2.78%,表明样品溶液在 12h内稳定。
3　指纹图谱及各项技术参数　
3.1　共有峰的确定　根据 10批供试品溶液的 HPLC
谱提供的相关参数 ,比较各批样品的色谱图 ,其中共有
峰 12个 ,见图 1;第 11号峰为延胡索乙素 。
图 1　白花土元胡药材指纹图谱　
11.延胡索乙素
3.2　共有峰的相对保留时间 、相对峰面积　5号峰在
10批样品中都是主峰 ,且稳定 ,所以定 5号峰为参照
峰 。共有峰的相对保留时间和相对峰面积分别见表
2, 3。
4　讨论　
本实验对供试品制备 、色谱条件进行了优化选择。
·1109·医药导报 2008年 9月第 27卷第 9期
　　　　　　　　　　　　　　　　表 2　白花土元胡药材指纹图谱相对保留时间　 min
序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
1 0.317 0.774 0.815 0.921 1.000 1.076 1.216 1.289 1.648 1.721 2.149 2.446
2 0.328 0.776 0.817 0.922 1.000 1.088 1.175 1.290 1.588 1.675 2.097 2.402
3 0.318 0.776 0.817 0.920 1.000 1.087 1.181 1.217 1.597 1.687 2.108 2.413
4 0.329 0.778 0.819 0.924 1.000 1.080 1.180 1.291 1.593 1.678 2.103 2.415
5 0.313 0.777 0.815 0.925 1.000 1.079 1.202 1.299 1.628 1.712 2.145 2.453
6 0.319 0.772 0.812 0.918 1.000 1.090 1.180 1.289 1.598 1.686 2.113 2.420
7 0.318 0.779 0.818 0.920 1.000 1.077 1.181 1.326 1.600 1.686 2.106 2.409
8 0.315 0.701 0.820 0.921 1.000 1.079 1.179 1.286 1.593 1.678 2.095 2.391
9 0.316 0.707 0.817 0.918 1.000 1.071 1.183 1.324 1.604 1.691 2.116 2.414
10 0.314 0.772 0.812 0.911 1.000 1.075 1.173 1.316 1.586 1.671 2.085 2.380
平均 0.318 0.761 0.816 0.920 1.000 1.080 1.185 1.293 1.603 1.689 2.110 2.414
表 3　白花土元胡药材指纹图谱相对峰面积　
序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
1 0.125 0.197 0.129 0.249 1.000 0.424 0.168 0.190 0.299 0.203 0.353 0.064
2 0.122 0.162 0.151 0.228 1.000 0.511 0.095 0.174 0.316 0.146 0.384 0.043
3 0.031 0.075 0.154 0.511 1.000 0.442 0.158 0.071 0.166 0.889 0.069 0.012
4 0.094 0.140 0.127 0.220 1.000 0.161 0.155 0.133 0.267 0.148 0.283 0.047
5 0.106 0.180 0.159 0.262 1.000 0.438 0.113 0.155 0.312 0.185 0.343 0.057
6 0.084 0.113 0.107 0.179 1.000 0.499 0.115 0.159 0.215 0.137 0.205 0.035
7 0.035 0.060 0.148 0.472 1.000 0.231 0.146 0.020 0.157 0.860 0.065 0.008
8 0.078 0.348 0.128 0.334 1.000 0.737 0.207 0.011 0.161 1.030 0.067 0.010
9 0.053 0.207 0.135 0.345 1.000 0.312 0.279 0.028 0.161 1.041 0.063 0.005
10 0.055 4 0.128 0.250 0.840 1.000 1.055 0.261 0.161 0.268 1.478 0.113 0.022
平均 0.082 4 0.157 0.147 0.350 1.000 0.532 0.176 0.109 0.323 0.629 0.194 0.030
通过对不同的提取溶剂(甲醇 、丙酮 、醋酸乙酯 、三氯甲
烷),不同提取方法(超声 、回流)进行实验比较 ,确定
了以上供试品的制备方法 ,所得指纹图谱出峰数较多 。
经实验比较多种流动相:乙腈-水 ,甲醇-水 ,乙腈 -醋酸 ,
乙腈-0.1%磷酸等溶剂系统 。结果表明乙腈 -0.1%磷
酸梯度洗脱 ,能较好地使样品中各色谱峰分离且出峰
最多 ,分析时间 70 min。采用 DAD对检测波长进行选
择 ,记录并比较不同波长的色谱图 ,结果在 220 nm波
长下 ,色谱图中色谱峰较多 ,信息丰富 ,故确定 220 nm
为检测波长 。
通过对同一产地白花土元胡药材地上部分(叶 、
茎)与其块茎的指纹图谱的比较研究 ,结果表明不同部
位药材的指纹图谱有显著差异 ,其中有效成分延胡索
乙素的含量叶中远远高于块茎。因此 ,为更好地利用
白花土元胡药材的有效成分 ,必须规范药用部位 。
由于野生的白花土元胡很稀少 ,只能对分布在浙
江省内安吉县 、西天目 、清凉山等地的野生白花土元胡
进行 HPLC分析 ,结果表明不同产地 、同一采收期的指
纹图谱进行了比较研究 ,各主要特征性成分均出现 ,指
纹图谱差异不大 ,而同一产地不同采收期的药材指纹
图谱差异较大 ,因此需要固定采收季节 。
[参考文献 ]
[ 1] 　奚镜清 , 金联城 ,忻纳新.中药材延胡索的品种整理及文
献考证 [ J] .现代应用药学 , 1995, 12(4):12.
[ 2] 　浙江植物志编辑委员会.浙江植物志(总论)[ M] .杭州:
浙江科学技术出版社 , 1993:256.
·1110· HeraldofMedicineVol.27 No.9September2008