全 文 ：　第５０卷２０１４年第４期 　　　　　西　北　师　范　大　学　学　报 （自然科学版）
　Ｖｏｌ．５０　２０１４　Ｎｏ．４ 　　　　　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ）　
收稿日期：２０１３－１１－２５；修改稿收到日期：２０１４－０３－３０
基金项目：国家自然科学青年科学基金资助项目（３１３００５２１）；高等学校博士学科点专项科研基金资助项目（２０１３３６０３１２０００１）；
江西省教育厅青年基金资助项目（ＧＪＪ１３２５３）；江西农业大学青年科学基金资助项目（ＱＮ２０１１０３）
作者简介：邹娜 （１９８２—），女，河南南阳人，博士．主要研究方向为园林植物生物技术及栽培生理．
Ｅ－ｍａｉｌ：ｎｚｏｕｙｙ＠１２６．ｃｏｍ
千日红组织培养及试管开花研究
邹　娜１，邓光华１，苏　燕２，喻苏琴１，涂淑萍１，张宵娟１
（１．江西农业大学 园林与艺术学院，江西 南昌　３３００４５；
２．江西农业大学 农学院，江西 南昌　３３００４５）
摘要：以千日红种子为外植体，获得无菌苗，并采用正交试验设计方法进行无菌苗的增殖、生根壮苗培养和试管开花
诱导．无菌苗最佳增殖培养基为：ＭＳ＋１．０ｍｇ·Ｌ－１　ＢＡ＋０．５ｍｇ·Ｌ－１　ＮＡＡ，培养２８ｄ，增殖系数为３．１，苗高可达
３．３ｃｍ；最佳生根培养基为：１／２ＭＳ＋０．５ｍｇ·Ｌ－１　ＩＢＡ＋３０ｇ·Ｌ－１蔗糖＋０．５ｇ·Ｌ－１活性炭，并以透气膜为封口材料；
无菌苗接种于改良 ＭＳ＋５．０ｍｇ·Ｌ－１　ＰＰ３３３＋４０ｇ·Ｌ－１蔗糖＋７ｇ·Ｌ－１亚精胺，平均开花率达１１．１１％．采用组织培养
方法获得无菌苗，并诱导其在试管内开花，可为其优良品种的快速繁殖和开发利用提供技术支持．
关键词：千日红；组织培养；试管开花；正交设计
中图分类号：Ｑ　８１３．１＋３　　　　文献标志码：Ａ　　　　文章编号：１００１－９８８Ⅹ（２０１４）０４－００７１－０８
Ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｏｆ　Ｇｏｍｐｈｒｅｎａ　ｇｌｏｂｏｓａ
ＺＯＵ－Ｎａ１，ＤＥＮＧ　Ｇｕａｎｇ－ｈｕａ１，ＳＵ－Ｙａｎ２，ＹＵ　Ｓｕ－ｑｉｎ１，ＴＵ　Ｓｈｕ－ｐｉｎｇ２，ＺＨＡＮＧ　Ｘｉａｏ－ｊｕａｎ１
（１．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌａｎｄｓｃａｐｅ　ａｎｄ　Ａｒｔ，Ｊｉａｎｇｘｉ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｃｈａｎｇ　３３００４５，Ｊｉａｎｇｘｉ，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｊｉａｎｇｘｉ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｃｈａｎｇ　３３００４５，Ｊｉａｎｇｘｉ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｅｅｄｓ　ｏｆ　Ｇｏｍｐｈｒｅｎａ　ｇｌｏｂｏｓａ　ａｒｅ　ａｃｔｅｄ　ａｓ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｔｏ　ｇｅｔ　ａｓｅｐｔｉｃ　ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ａｎｄ　ｔｈｅｎ
ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ，ｒｏｏｔｉｎｇ　ａｎｄ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｂｙ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｄｅｓｉｇｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ
ｏｐｔｉｍａｌ　ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ　ｉｓ：ＭＳ＋１．０ｍｇ·Ｌ－１　ＢＡ＋０．５ｍｇ·Ｌ－１　ＮＡＡ，ａｆｔｅｒ　２８ｄａｙｓ　ｏｆ　ｃｕｌｔｕｒｅ，
ｔｈｅ　ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｉｓ　３．１ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｈｅｉｇｈｔ　ｒｅａｃｈ　ｔｏ　３．３ｃｍ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ
ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｉｓ　１／２ＭＳ＋０．５ｍｇ·Ｌ－１　ＩＢＡ＋３０ｇ·Ｌ－１　ｓｕｃｒｏｓｅ＋０．５ｇ·Ｌ－１　ａｃｔｉｖａｔｅ　ｃｈａｒｃｏａｌ　ｗｉｔｈ
ｂｒｅａｔｈａｂｌｅ　ｆｉｌｍ　ａｓ　ｓｅａｌｉｎｇ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ．Ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｉｓ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ＭＳ＋５ｍｇ·Ｌ－１　ＰＰ３３３＋４０ｇ·
Ｌ－１　ｓｕｃｒｏｓｅ＋７ｍｇ·Ｌ－１　ｓｐｅｒｍｉｄｉｎｅ，ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｒａｔｅ　ｉｓ　１１．１１％．Ａｓｅｐｔｉｃ　ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｉｓ
ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｂｙ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ，ｗｈｉｃｈ　ｉｓ　ｕｓｅｆｕｌ　ｔｏ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｔｅｃｈｎｉｃａｌ　ｓｕｐｐｏｒｔ
ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇｏｍｐｈｒｅｎａ　ｇｌｏｂｏｓａ　ｂｙ　ｒａｐｉｄ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｇｏｍｐｈｒｅｎａ　ｇｌｏｂｏｓａ；ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ；ｉｎ－ｖｉｔｒｏ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｄｅｓｉｇｎ
　　千日红（Ｇｏｍｐｈｒｅｎａ　ｇｌｏｂｏｓａ）别名火球花、红
光球、千年红等，是苋科千日红属一年生草本花
卉．千日红植株低矮，花繁色浓，不仅是配置秋季
花坛、种植钵和花镜的好材料，且干后花朵群集一
株，宛如繁星点点灿烂多姿；同时又因其花期长，
花色与花形经久不变，所以又是作鲜切花的良好材
料，而且其花序及全草皆可入药，具有清肝、散
结、止咳和定喘之效［１］．此外，从千日红花序中
提取的千日红色素还是一种优质的食用天然色素资
源［２］，现在千日红也可作为花茶饮用．由此可见，
千日红是天生的干燥花，同时也是风味绝佳的花草
茶，具有较高的观赏、药用和食用价值．
千日红多用种子繁殖，由于其体积太小，采收
不易，即使采收到的种子再进行播种繁殖也很难保
１７
西　北　师　范　大　学　学　报 （自然科学版）　　 第５０卷　
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ）　　 Ｖｏｌ．５０　
证其具有母株原有的优良性状［３］，而且露地播种
繁殖还具有明显的季节限制．应用现代组织培养技
术不仅可以在一定程度上解决这些问题，在短期内
进行扩增繁殖获得大量的千日红无菌苗，还有利于
进一步提高千日红的经济价值．
试管开花是指用组织培养的方法，使植物的开
花过程在培养容器中完成［４］．研究试管开花不仅
可以为研究植物的花芽分化提供一个良好的实验系
统，还可为了解植物成花转变即由营养生长向生殖
发育的转变，提供良好的实验材料；同时，试管花
具有一定的观赏价值，也可作为旅游商品进行开
发［３，４］，而目前对千日红试管开花的研究较少．正
交试验设计，是利用一套已有的规格化的正交表来
安排多因素试验，并对试验结果进行统计分析，找
出较优试验方案的一种科学方法［５］．通过运用正
交试验表还可以处理多个试验指标，各种指标同时
分析，综合考虑获得最佳效果，因此是目前最流
行、效果相当好的方法［６］．本文以优良千日红Ｆ１
代种子为外植体，在获得无菌苗的基础上，采用正
交试验设计方法研究不同培养基对其增殖、生根壮
苗及开花诱导的影响，筛选千日红组织培养及试管
开花诱导最佳培养基，以期为相关研究和应用提供
一定的参考和技术支持．
１　材料与方法
１．１　材料
千日红种子购自北京市芳萱苑种子有限公司．
１．２　方法
１．２．１　种子的灭菌消毒　千日红种子在自来水下
浸泡冲洗３０ｍｉｎ，转入超净工作台，用７５％酒精
浸泡１０～３０ｓ，再用０．１％升汞添加吐温２０的消
毒液剧烈振荡灭菌８ｍｉｎ，无菌水清洗５次，滤纸
吸干表面水分，接种到 ＭＳ基本培养基表面并放置
于培养室进行种子萌发（图１：Ａ）．
１．２．２　继代增殖培养　当无菌苗长到２ｃｍ以上时，取
其顶端１ｃｍ接种到以Ｌ８（４×２４）正交设计方法配置的各
继代增殖培养基中．研究基本培养基（ＭＳ，１／２ＭＳ）、
细胞分裂素ＢＡ浓度（０．５，１．０，２．０，３．０ｍｇ·Ｌ－１）、生长
素 ＮＡＡ 浓 度 （０．１，０．５ ｍｇ·Ｌ－１）及 多 效 唑
（２．０ｍｇ·Ｌ－１　ＰＰ３３３）对千日红试管苗增殖培养的影响．
１．２．３　生根壮苗培养　当试管苗长到２ｃｍ以上
时，取顶端２ｃｍ接种到以Ｌ８（２７）正交试验设计方
法配置的各生根壮苗培养基中．研究基本培养基
（ＭＳ，１／２ＭＳ）、０．５ｍｇ·Ｌ－１不同种类生长素种类
（ＮＡＡ，ＩＢＡ）、蔗糖含量（３０，１５ｇ·Ｌ－１）、活性炭
（０，０．５ｇ·Ｌ－１）和封口材料（透气封口膜、塑料瓶
盖）对千日红无菌苗生根的影响．
１．２．４　开花诱导培养　当生根培养基中无菌苗长
到２ｃｍ以上时，取顶端２ｃｍ接种到以Ｌ４（２３）正
交试验设计方法配置的各开花诱导培养基中．研究
基本 培 养 基 （改 良 ＭＳ，ＭＳ）、蔗 糖 含 量 （４０，
２０ｇ·Ｌ－１）及多效唑（０，５ｇ·Ｌ－１）对千日红试管苗生
长和试管开花诱导的影响．
１．３　培养条件
培养室温度（２５±１）℃、光照时间１２ｈ·ｄ－１，
光照强度为２　０００ｌｕｘ．开花处理每培养基中添加
７ｍｇ·Ｌ－１亚精胺，如无特殊说明各培养基均添加
琼脂６．５ｇ·Ｌ－１，蔗糖２０ｇ·Ｌ－１，ｐＨ　５．８，１２１℃
高压灭菌２０ｍｉｎ．
１．４　实验观察与数据处理
增殖、生根及开花诱导阶段的试验数据分别在
接种之后的第３５，２１和６０ｄ进行测量．增殖系数
＝增殖后无菌苗数／接种无菌苗总数，生根率＝生
根无菌苗数／接种无菌苗总数×１００％，根长＞１ｃｍ
（％）为根长大于１ｃｍ的无菌苗占生根苗的比例，
根数＞５（％）为生根数大于５的无菌苗占生根苗的
比例．开花率＝开花无菌苗数／接种无菌苗总数×
１００％．每处理分别接种２０～３０个外植体，各试验
至少设２次重复．试验测得数据采用统计软件
ＤＰＳ７．０５进行方差分析，多重比较采用Ｄｕｎｃａｎ新
复极差检验．
２　结果与分析
２．１　不同因素对千日红增殖及生长的影响
在进行千日红增殖培养过程中，除了关注增殖
系数外，还观测了试管苗的苗高和叶片数．对增殖
系数进行极差分析得到结果（ＲＡ′排序）：ＰＰ３３３＞基
本培养基＞ＢＡ浓度＞空白列（ＢＡ与ＮＡＡ的交互作
用）＞ＮＡＡ浓度，说明ＰＰ３３３对千日红无菌苗增殖系
数影响作用最强，其次是基本培养基和ＢＡ浓度，
而ＢＡ与ＮＡＡ的交互作用以及ＮＡＡ浓度对千日红
增殖系数影响较小．从各因素不同水平来看，培养
基中不添加ＰＰ３３３对千日红增殖效果更好，基本培养
基以ＭＳ对千日红的增殖效果优于１／２ＭＳ，ＢＡ浓度
以１ｍｇ·Ｌ－１效果最好，其增殖系数分别比０．５，２．０和
３．０ｍｇ·Ｌ－１ＢＡ时提高２１．８０％，３３．９８％和１２．９３％，
ＮＡＡ浓度以０．１ｍｍｏｌ·Ｌ－１稍优于０．５ｍｍｏｌ·Ｌ－１，
相应的增殖系数提高６．８２％（图１：Ａ，Ｂ）．
２７
　２０１４年第４期 　　　　　邹　娜等：千日红组织培养及试管开花研究
　２０１４　Ｎｏ．４ Ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｏｆ　Ｇｏｍｐｈｒｅｎａ　ｇｌｏｂｏｓａ
Ａ．千日红种子萌发；Ｂ．无菌苗增殖；Ｃ．生根壮苗培养；Ｄ．试管开花
Ａ．Ｓｅｅｄ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇｏｍｐｈｒｅｎａ　ｇｌｏｂｏｓａ；Ｂ．Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｅｄ　ａｘｉｌａｒｙ　ｂｕｄ；Ｃ．Ｒｏｏｔｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ　ｏｆ
Ｇｏｍｐｈｒｅｎａ　ｇｌｏｂｏｓａ；Ｄ．ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｏｆ　Ｇｏｍｐｈｒｅｎａ　ｇｌｏｂｏｓａｉｎ　ｖｉｔｒｏ
图１　千日红组织培养及试管开花诱导
Ｆｉｇ　１ Ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｏｆ　Ｇｏｍｐｈｒｅｎａ　ｇｌｏｂｏｓａ
　　采用同样的方法，分析不同因素水平对千日红
苗高和叶片数的影响．对苗高的极差而言，基本培
养基＞ＢＡ浓度＝ＰＰ３３３＞空白列（ＢＡ与ＮＡＡ的交
互作用）＞ＮＡＡ浓度（ＲＢ′排序）；而从叶片数极差
来看，基本培养基＞ＢＡ浓度＞ＰＰ３３３＞ＮＡＡ浓度
＞空白列（ＢＡ 与 ＮＡＡ 的交互作用）（ＲＣ′排序）．
这些结果表明基本培养基是影响千日红无菌苗苗高
生长和增加叶片数的最主要的因素，其次是ＢＡ和
ＰＰ３３３，而ＮＡＡ以及ＢＡ与ＮＡＡ间的交互作用对
千日红苗高和叶片数生长影响较小．从各因素不同
水平来看，基本培养基以ＭＳ优于１／２ＭＳ，ＢＡ浓
度以１．０ｍｇ·Ｌ－１对千日红无菌苗生长效果最好，
培养基中不添加ＰＰ３３３时无菌苗高度及生长量更大，
在含有０．１ｍｍｏｌ·Ｌ－１　ＮＡＡ培养基中的千日红无
菌苗叶片稍多，但平均株高不及０．５ｍｍｏｌ·Ｌ－１
ＮＡＡ培养基中的千日红（表１）．
表１　千日红增殖生长试验组合及结果Ｌ８（４×２４）
Ｔａｂ　１ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　Ｇｏｍｐｈｒｅｎａ　ｇｌｏｂｏｓａ
处理号
Ｃｏｄｅ
ａｄｊｕｓｔｅｄ　ｒａｎｇｅ　ＲＣ′
ＢＡ／
（ｍｇ·Ｌ－１）
ＮＡＡ／
（ｍｇ·Ｌ－１）
空白列
Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ
ｃｏｌｕｍｎ
基本培养基
Ｂａｓｉｃ
ｍｅｄｉｕｍ
ＰＰ３３３
浓度／
（ｍｇ·Ｌ－１）
增殖系数
Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ
ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ
苗高
Ｓｅｅｄｌｉｎｇ
ｈｅｉｇｈｔ
叶片数
Ｌｅａｆ　ｎｕｍｂｅｒｓ
苗的长势
Ｓｅｅｄｌｉｎｇ
ｇｒｏｗｔｈ
ｐｏｔｅｎｔｉａｌ
１　 ０．５　 ０．１　 １．０ ＭＳ　 ０．０　 ２．５５ａｂ　 ２．７８ａｂ　 ７．９２ａｂ ＃＃＃＃
２　 ０．５　 ０．５　 ２．０　 １／２ＭＳ　 ２．０　 １．７８ｂ ２．２０ｂ ５．６７ｂ ＃＃＃
３　 １．０　 ０．１　 １．０　 １／２ＭＳ　 ２．０　 ２．１８ａｂ　 ２．１５ｂ ８．３８ａｂ ＃＃
４　 １．０　 ０．５　 ２．０ ＭＳ　 ０．０　 ３．０９ａ ３．３１ａ １０．４８ａ ＃＃＃＃＃
５　 ２．０　 ０．１　 ２．０ ＭＳ　 ２．０　 ２．１４ａｂ　 ２．５５ａｂ　 ８．７６ａｂ ＃＃＃＃
６　 ２．０　 ０．５　 １．０　 １／２ＭＳ　 ０．０　 １．７９ｂ ２．１３ｂ ７．５４ａｂ ＃＃＃
７　 ３．０　 ０．１　 ２．０　 １／２ＭＳ　 ０．０　 ２．５２ａｂ　 ２．０２ｂ ９．１０ａ ＃＃＃
８　 ３．０　 ０．５　 １．０ ＭＳ　 ２．０　 ２．１４ａｂ　 ２．４１ａｂ　 ８．３２ａｂ ＃＃＃＃
极差ＲＡ
ｒａｎｇｅ　ＲＡ
０．６７　 ０．１５　 ０．２２　 ０．４１　 ０．４３
调整ＲＡ′
ａｄｊｕｓｔｅｄ　ｒａｎｇｅ　ＲＡ′
０．４２　 ０．２１　 ０．３１　 ０．５９　 ０．６１
极差ＲＢ
ｒａｎｇｅ　ＲＢ
０．５２　 ０．１４　 ０．１５　 ０．６４　 ０．２３
调整ＲＢ′
ａｄｊｕｓｔｅｄ　ｒａｎｇｅ　ＲＢ′
０．３３　 ０．１９　 ０．２１　 ０．９１　 ０．３３
极差ＲＣ
ｒａｎｇｅ　ＲＣ
２．６４　 ０．５４　 ０．４６　 １．２０　 ０．９８
调整ＲＣ′
ａｄｊｕｓｔｅｄ　ｒａｎｇｅ　ＲＣ′
１．６８　 ０．７６　 ０．６６　 １．７０　 １．３９
３７
西　北　师　范　大　学　学　报 （自然科学版）　　 第５０卷　
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ）　　 Ｖｏｌ．５０　
　　Ａ，Ｂ，Ｃ分别为增殖系数、苗高和叶片数；Ｒ为各因素水平极差；Ｒ′为调整后的极差；＃表示苗生长势，＃越多表示幼
苗生长越好．同列数字后不同字母，表明差异显著．下同．
Ａ，Ｂ　ａｎｄ　Ｃ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｔｈｅ　ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ，ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｈｅｉｇｈｔ　ａｎｄ　ｌｅａｆ　ｎｕｍｂｅｒｓ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ；Ｒ　ｉｓ　ｒａｎｇｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｅａｃｈ
ｆａｃｔｏｒ　ｌｅｖｅｌ；Ｒ′ｉｓ　ａｄｊｕｓｔｅｄ　ｒａｎｇｅ；＃ｓｈｏｗｓ　ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ，ｔｈｅ　ｍｏｒｅ　ｉｎｄｉｃａｔｅｓ　ｔｈｅ　ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｔｈｅ　ｂｅｔｔｅｒ．
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｌｉｎｅ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ａｔ　Ｐ＜０．０５．Ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｂｅｌｏｗ．
　　方差分析结果表明，除了基本培养基对苗高有
极显著影响外，其他各因素对千日红增殖系数、苗
高和叶片数的影响都没有达到显著水平（表２）．增
殖系数最高的为处理４，各个处理间的多重比较结
果表明，其与处理２和６之间的差异达到显著水
平，并且从苗高和叶片数来看，最好的也是处理
４，其苗高与２，３，６，７间的差异达到显著水平，叶
片数与处理２间的差异达到极显著水平（表１）．因
此，综合各主要因素水平的最优组合和方差分析及
多重比较结果，筛选出在千日红增殖培养过程中较
佳配方：ＭＳ＋１．０ｍｇ·Ｌ－１　ＢＡ＋０．５ｍｇ·Ｌ－１
ＮＡＡ，该处理中的无菌苗增殖系数最好，幼苗生
长势最旺（图１：Ｂ）．
表２　千日红增殖及生长各影响因素方差分析
Ｔａｂ　２ Ｖａｒｉａｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｏｎ　ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　Ｇｏｍｐｈｒｅｎａ　ｇｌｏｂｏｓａ
变异来源
Ｓｏｕｒｃｅ
增殖系数 Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ 苗高Ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｈｅｉｇｈｔ 叶片数Ｌｅａｆ　ｎｕｍｂｅｒｓ
平方和
Ｓｕｍ　ｏｆ
ｓｑｕａｒｅｓ
自由度
ｄｆ
均方
Ｍｅａｎ
ｓｑｕａｒｅ
Ｆ值
平方和
Ｓｕｍ　ｏｆ
ｓｑｕａｒｅｓ
自由度
ｄｆ
均方
Ｍｅａｎ
ｓｑｕａｒｅ
Ｆ值
平方和
Ｓｕｍ　ｏｆ
ｓｑｕａｒｅｓ
自由度
ｄｆ
均方
Ｍｅａｎ
ｓｑｕａｒｅ
Ｆ值
ＢＡ　 １．４４　 ３　 ０．４８　 １．５１　 ０．９０　 ３　 ０．３０　 １．３６　 ２２．４１　 ３　 ７．４７　 ２．５１
ＮＡＡ　 ０．１３　 １　 ０．１３　 ０．４２　 ０．１１　 １　 ０．１１　 ０．５０　 １．７２　 １　 １．７２　 ０．５８
空白列
Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｃｏｌｕｍｎ
０．２８　 １　 ０．２８　 ０．８９　 ０．１４　 １　 ０．１４　 ０．６２　 １．２９　 １　 １．２９　 ０．４３
基本培养基
Ｂａｓｉｃ　ｍｅｄｉｕｍ
１．０２　 １　 １．０２　 ３．２２　 ２．４５　 １　 ２．４５　 １１．１０＊＊ ８．６３　 １　 ８．６３　 ２．９０
ＰＰ３３３ １．１０　 １　 １．１０　 ３．４６　 ０．３２　 １　 ０．３２　 ５．７４　 １　 ５．７４　 １．９３
误差 Ｅｒｒｏｒ　 ５．０７　 １６　 ０．３２　 ３．５３　 １６　 ０．２２　 ４７．６２　 １６　 ２．９８
　　＊Ｐ＜０．０５差异显著，＊＊Ｐ＜０．００１差异极显著．下同．
＊Ｐ＜０．０５ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ，＊＊Ｐ＜０．０１ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ．Ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｂｅｌｏｗ．
２．２　生根壮苗培养
千日红无菌苗转移到生根培养中之后１０天左
右有部分无菌苗已开始生根，第２１ｄ不同处理间
的生根效果明显不同，其中生根率最高的为处理７
（表３）．表３结果表明，处理７与其他７个处理间
的生根率差异均达到显著水平；根长较长的分别为
处理５，７，３，且与处理２，６，８间的差异达到显著水
平；平均根数较多的为处理３，７，分别与处理２，６
和８间的差异达到显著水平．因此，综合生根率、
根长和平均根数等各指标，处理７为千日红无菌苗
最佳生根培养基：１／２ＭＳ＋０．５ｍｇ·Ｌ－１　ＩＢＡ＋
３０ｇ·Ｌ－１蔗糖＋０．５ｇ·Ｌ－１活性炭．
　　生根率极差分析结果：蔗糖＞封口材料＞基本
培养基＞激素种类＞活性炭（ＲＡ′排序），说明影响
千日红生根率的主要因素为蔗糖、封口材料和基本
培养基，而激素种类和活性炭的作用相对较弱（表
３）．从各因素不同水平来看，３０ｇ·Ｌ－１蔗糖比
１５ｇ·Ｌ－１蔗糖的生根效果好，以透气膜为封口材料
比塑料瓶盖好，以１／２ＭＳ为基本培养基比 ＭＳ生
根效果更好．
对根长和平均根数的极差分析结果：蔗糖＞基
本培养基＞活性炭＞封口材料＞激素（ＲＢ′排序）和
蔗糖＞基本培养基＞激素种类＞活性炭＞封口材料
（ＲＣ′排序）．由此说明，蔗糖和基本培养基是对千
日红无菌苗根长和平均根数影响最为重要的两因
素，其次为活性炭、激素种类和封口材料．从各因
素不同水平来看，３０ｇ·Ｌ－１蔗糖比１５ｇ·Ｌ－１蔗糖
对根生长更好，以１／２ＭＳ为基本培养基千日红无
菌苗根数更多更长，添加 ０．５ｇ·Ｌ－１活性炭、
０．５ｍｇ·Ｌ－１　ＮＡＡ和以透气膜为封口材料对千日
红无菌苗生根效果较好（图１：Ｃ）．
不同因素对千日红试管苗生根各指标影响的方
差分析结果表明（表４）：蔗糖对千日红生根率具有
显著影响，而且对千日红根长和平均根数影响达到
极显著水平，其他因素则对千日红生根没有显著性
影响．
４７
　２０１４年第４期 　　　　　邹　娜等：千日红组织培养及试管开花研究
　２０１４　Ｎｏ．４ Ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｏｆ　Ｇｏｍｐｈｒｅｎａ　ｇｌｏｂｏｓａ
表３　千日红试管苗生根试验组合及结果Ｌ８（２７）
Ｔａｂ　３ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　Ｇｏｍｐｈｒｅｎａ　ｇｌｏｂｏｓａ　ｒｏｏｔｉｎｇ
处理号
Ｃｏｄｅ
植物生长
调节剂
ＰＧＲ／
（０．５ｍｇ·Ｌ－１）
基本培
养基
Ｂａｓｉｃ
ｍｅｄｉｕｍ
蔗糖
Ｓｕｇａｒ／
（ｇ·Ｌ－１）
活性炭
ＡＣ／
（ｇ·Ｌ－１）
封口材料
Ｓｅａｌ
生根率／
％
Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ
ｏｆ　ｒｏｏｔｉｎｇ
根长＞１ｃｍ／
％
Ｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　ｒｏｏｔｓ
根数＞５／
％
Ｒｏｏｔ　ｎｕｍｂｅｒｓ
１ ＮＡＡ　 ＭＳ　 ３０．０　 ０．０ 膜 ５２．５０ｂ ６７．４２ａｂ　 ６２．８８ａｂ
２ ＮＡＡ　 ＭＳ　 １５　 ０．５ 盖 １３．５０ｃ ２２．２２ｂ １６．６６ｂｃ
３ ＮＡＡ　 １／２ＭＳ　 ３０　 ０．５ 盖 ２９．１５ｂｃ　 ８４．３７ａ ８４．３７ａ
４ ＮＡＡ　 １／２ＭＳ　 １５　 ０．０ 膜 ３３．３５ｂｃ　 ７６．９２ａｂ　 ３６．５４ａｂｃ
５ ＩＢＡ　 ＭＳ　 ３０　 ０．０ 盖 ４１．１０ｂ １００．００ａ ５１．６６ａｂｃ
６ ＩＢＡ　 ＭＳ　 １５　 ０．５ 膜 １４．００ｃ １６．６６ｂ ８．３３ｃ
７ ＩＢＡ　 １／２ＭＳ　 ３０　 ０．５ 膜 ７８．３５ａ ９８．１５ａ ７１．２９ａ
８ ＩＢＡ　 １／２ＭＳ　 １５　 ０．０ 盖 ２７．５０ｂｃ　 ２１．８７ｂ １５．６２ｂｃ
极差ＲＡ
ｒａｎｇｅ　ＲＡ
８．１１　 １１．８１　 ２８．１９　 ４．８６　 １６．７４
调整ＲＡ′
ａｄｊｕｓｔｅｄｒａｎｇｅ　ＲＡ′
１１．５２　 １６．７７　 ４０．０３　 ６．９０　 ２３．７７
极差ＲＢ
ｒａｎｇｅ　ＲＢ
３．５６　 １８．７５　 ５３．０７　 １１．２０　 ７．６７
调整ＲＢ′
ａｄｊｕｓｔｅｄ　ｒａｎｇｅ　ＲＢ′
５．０６　 ２６．６３　 ７５．３５　 １５．９１　 １０．９０
极差ＲＣ
ｒａｎｇｅ　ＲＣ
１３．３９　 １７．０７　 ４８．２６　 ３．４９　 ２．６８
调整ＲＣ′
ａｄｊｕｓｔｅｄｒａｎｇｅ　ＲＣ′
１９．０１　 ２４．２４　 ６８．５３　 ４．９６　 ３．８１
　　Ａ，Ｂ，Ｃ分别为生根率、根长和平均根数．
Ａ，Ｂ　ａｎｄ　Ｃ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ　ｒｏｏｔｉｎｇ，ｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　ｒｏｏｔｓ　ａｎｄ　ｒｏｏｔ　ｎｕｍｂｅｒｓ　ｒｅｓｐｅｃｃｔｉｖｅｌｙ．
表４　千日红生根各影响因素方差分析
Ｔａｂ　４ Ｖａｒｉａｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｏｎ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｏｆ　Ｇｏｍｐｈｒｅｎａ　ｇｌｏｂｏｓａ
变异来源
Ｓｏｕｒｃｅ
生根率Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ　ｒｏｏｔｉｎｇ 根长Ｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　ｒｏｏｔｓ 根数Ｒｏｏｔ　ｎｕｍｂｅｒｓ
平方和
Ｓｕｍ　ｏｆ
ｓｑｕａｒｅｓ
自由度
ｄｆ
均方
Ｍｅａｎ
ｓｑｕａｒｅ
Ｆ值
Ｆ
平方和
Ｓｕｍ　ｏｆ
ｓｑｕａｒｅｓ
自由度
ｄｆ
均方
Ｍｅａｎ
ｓｑｕａｒｅ
Ｆ值
Ｆ
平方和
Ｓｕｍ　ｏｆ
ｓｑｕａｒｅｓ
自由度
ｄｆ
均方
Ｍｅａｎ
ｓｑｕａｒｅ
Ｆ值
Ｆ
植物生长调节剂
ＰＧＲ 　２６３．２５　 １ 　２６３．２５　０．４５ 　　５０．８０　 １ 　　５０．８０　０．１０ 　７１６．６３　 １ 　７１６．６３　 １．９３
基本培养基
Ｂａｓｉｃ　ｍｅｄｉｕｍ
５５８．１４　 １　 ５５８．１４　０．９５　 １　４０６．８１　 １　 １　４０６．８１　２．７７　１　１６５．８８　 １　 １　１６５．８８　 ３．１４
蔗糖
Ｓｕｇａｒ
３　１７８．１４　 １　 ３　１７８．１４　５．４２＊ １１　２６４．１０　 １　 １１　２６４．１０　２２．１９＊＊９　３１７．０８　 １　 ９　３１７．０８　２５．０６＊＊
活性炭
ＡＣ ９４．５８　 １　 ９４．５８　０．１６　 ５０２．０９　 １　 ５０２．０９　０．９８　 ４８．７２　 １　 ４８．７２　 ０．１３
封口材料
Ｓｅａｌ １　１２０．５８　 １　 １　１２０．５８　１．９２　 ２３５．５５　 １　 ２３５．５５　０．４６　 ２８．７３　 １　 ２８．７２　 ０．０８
误差
Ｅｒｒｏｒ ４　６９１．２６　 ８　 ５８６．４１　 ４　０６１．１１　 ８　 ５０７．６４　 ２　９７４．５２　 ８　 ３７１．８２
２．３　试管开花诱导
接种后的第６０ｄ，发现仅有处理２中的部分无
菌苗在试管内开花，并且不同处理间无菌苗苗高存
在明显差异．表５结果表明，处理２与其他３个处
理间的开花率差异均达到显著性水平；无菌苗生长
较高的是处理１和处理３，并且与处理２和处理４间
的差异达到显著水平．因此，结合开花率及株型，
筛选获得处理２，即改良 ＭＳ＋５ｍｇ·Ｌ－１　ＰＰ３３３＋
４０ｇ·Ｌ－１蔗糖为千日红试管苗较佳开花诱导培养基．
表５开花率极差分析结果表明，基本培养基＝
蔗糖＝ＰＰ３３３（ＲＡ′排序），表明基本培养基、ＰＰ３３３
和蔗糖对千日红无菌苗开花具有同等重要影响，并
且分 别 以 改 良 ＭＳ、添 加 ５ ｍｇ·Ｌ－１　ＰＰ３３３ 和
４０ｇ·Ｌ－１蔗糖对诱导千日红无菌苗试管开花效果更好．
５７
西　北　师　范　大　学　学　报 （自然科学版）　　 第５０卷　
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ）　　 Ｖｏｌ．５０　
从不同因素对苗高的影响来看（表５），ＰＰ３３３＞
蔗糖＞基本培养基（ＲＢ′排序），说明ＰＰ３３３的作用
最强，而基本培养基和蔗糖对苗高的影响不大．培
养基中添加５ｍｇ·Ｌ－１　ＰＰ３３３，千日红无菌苗生长更
矮壮．
不同因素的方差分析结果表明（表６）：基本培
养基、蔗糖和ＰＰ３３３对千日红试管苗开花影响差异
均具有显著性．ＰＰ３３３对千日红试管苗苗高影响差
异达到极显著水平，而其他因素对千日红苗高没有
显著性影响．
表５　千日红试管开花试验组合及结果Ｌ４（２３）
Ｔａｂ　５ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　Ｇｏｍｐｈｒｅｎａ　ｇｌｏｂｏｓａｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ
处理
Ｃｏｄｅ
基本培养基
Ｂａｓｉｃ　ｍｅｄｉｕｍ
ＰＰ３３３
ｍｇ·Ｌ－１
蔗糖
Ｓｕｇａｒ／（ｇ·Ｌ－１）
开花率
Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ
苗高
Ｈｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ
１ 改良 ＭＳ　 ０．００　 ２０．００　 ０．００ｂ ７．１１ａ
２ 改良 ＭＳ　 ５．００　 ４０．００　 １１．１１ａ ２．８９ｂ
３ ＭＳ　 ０．００　 ４０．００　 ０．００ｂ ７．４９ａ
４ ＭＳ　 ５．００　 ２０．００　 ０．００ｂ ２．７９ｂ
极差ＲＡ　ｒａｎｇｅ　ＲＡ　 ５．５６　 ５．５６　 ５．５６
调整ＲＡ′ａｄｊｕｓｔｅｄ　ｒａｎｇｅ　ＲＡ′ ５．５８　 ５．５８　 ５．５８
极差ＲＢ　ｒａｎｇｅ　ＲＢ　 ０．１４　 ４．４６　 ０．２４
调整ＲＢ′ａｄｊｕｓｔｅｄ　ｒａｎｇｅ　ＲＢ′ ０．１４　 ４．４８　 ０．２４
　　Ａ，Ｂ分别为开花率、苗高．
Ａ　ａｎｄ　Ｂ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ，ｈｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
表６　千日红开花各影响因素方差分析
Ｔａｂ　６ Ｖａｒｉａｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｏｎ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｏｆ　Ｇｏｍｐｈｒｅｎａ　ｇｌｏｂｏｓａ
变异来源
Ｓｏｕｒｃｅ
开花率Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ 苗高 Ｈｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ
平方和
Ｓｕｍ　ｏｆ　ｓｑｕａｒｅｓ
自由度
ｄｆ
均方
Ｍｅａｎ　ｓｑｕａｒｅ
Ｆ值
Ｆ
平方和
Ｓｕｍ　ｏｆ　ｓｑｕａｒｅｓ
自由度
ｄｆ
均方
Ｍｅａｎ　ｓｑｕａｒｅ
Ｆ值
Ｆ
基本培养基
Ｂａｓｉｃ　ｍｅｄｉｕｍ
９２．５７　 １　 ９２．５７　 １５．９７＊ ０．０６　 １　 ０．０６ 　０．１４
ＰＰ３３３ ９２．５７　 １　 ９２．５７　 １５．９７＊ ５９．６３　 １　 ５９．６３　 １３８．７８＊＊
蔗糖Ｓｕｇａｒ　 ９２．５７　 １　 ９２．５７　 １５．９７＊ ０．１８　 １　 ０．１８　 ０．４１
误差 Ｅｒｒｏｒ　 ４６．３７　 ８　 ５．８０　 ３．４４　 ８　 ０．４３
３　讨论
本研究采用正交试验设计方法，进行千日红组
织培养过程中多种因素水平的设置和试验指标的研
究，并通过对试验数据的最优水平组合和方差分析
获得了增殖、生根和开花诱导等各培养阶段较佳培
养基配方，并对培养过程中的各影响因素如基本培
养基、ＰＰ３３３和蔗糖等进行了显著性分析（表２、表
４和表６）．
就基本培养基而言，在千日红增殖培养阶段全
量的 ＭＳ培养基的生长效果较好，增殖系数、苗高
和叶片数分别比大量元素减半的１／２ ＭＳ提高
１９．８％、３０．２％和１５．６％（表１）；而在生根过程中
１／２ＭＳ比 ＭＳ更优，相应的可提高生根率３６．４％
（表３）；在开花诱导阶段，仅改良 ＭＳ（改变了 ＭＳ
培养基中ＮＨ＋４／ＮＯ－３ 配比）可诱导千日红在试管内
开花（表５）．ＭＳ基本培养基的无机盐（硝酸盐、钾
盐、铵盐）含量高，属于高盐低水势的培养基，可
保证组织生长所需的矿质营养［７］，从而使千日红
在增殖过程中有充足的营养供应而使各种指标生长
更优．１／２ＭＳ培养基更有利于千日红生根，这与
大多数植物采用１／２ＭＳ培养基进行生根培养的结
果一致［８，９］，其主要原因可能是因为１／２ＭＳ基本
培养基中Ｎ的含量特别是ＮＨ＋４ 含量降低了．一般
认为，适量的ＮＨ＋４ 能显著促进植物生长，而高浓
度时对植物产生毒害作用，外源 ＮＨ＋４ 超过０．１～
０．５ｍｍｏｌ·Ｌ－１，有些植物就可能 ＮＨ＋４ 中毒，表
现为抑制主根生长和侧根形成、叶子黄化，严重时
发生死亡，但不同物种间 ＮＨ＋４ 敏感程度差异较
大［１０，１１］，而硝态氮作氮源诱导根系的生长效果更
理想［１２］．就培养基中氮源对试管开花的诱导影响
而言，许多报道认为减少 ＭＳ培养基中氮含量有利
于促进花芽形成，高水平的氮会抑制开花；在氮总
量不变的情况下，试管苗成花率随着硝态氮／铵态
６７
　２０１４年第４期 　　　　　邹　娜等：千日红组织培养及试管开花研究
　２０１４　Ｎｏ．４ Ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｏｆ　Ｇｏｍｐｈｒｅｎａ　ｇｌｏｂｏｓａ
氮比值的增大而升高［１３，１４］．所以，大多数培养基
配方和绝大多数植物组织培养所要求的 ＮＨ＋４／
ＮＯ－３ 比率较低，甚至不含ＮＨ＋４ ［１５］．
试验结果还表明，与基本培养基及ＢＡ浓度相
比，ＮＡＡ浓度的变化对千日红无菌苗增殖及生长
的影响作用较小（表１和表２）．而且，生长素种类
（ＮＡＡ／ＩＢＡ）的变化对千日红生根效果的影响程度
也不及蔗糖含量和基本培养基（表３）．究其原因，
一方面可能是由于千日红无菌苗在增殖、生长及生
根过程中对培养基中的营养成分的变化较激素的改
变更敏感；另一方面也有可能是在试验过程中设置
的生长素的浓度梯度（０．１，０．５ｍｍｏｌ·Ｌ－１）过小，培
养的时间过短，生长素对千日红的生长效应尚未充
分表现出来，或者千日红对生长素的适应范围较广．
近年来人们开始将 ＰＰ３３３应用于植物组织培
养中进行试管苗的生长和生根效应及开花诱
导等研究．本研究结果表明，在增殖培养过程中，
２．０ｍｇ·Ｌ－１ＰＰ３３３对试管苗节间长度有明显的抑制
作用，植株明显变矮，叶片数减少，叶柄基部变
粗，从而降低了千日红有效试管苗数量，增殖系数
较没有添加ＰＰ３３３的降低１７．２７％，苗高和叶片数
也分别减少８．９８％和１１．１６％（表１）．这与地被菊
（Ｄｅｎｄｒａｔｈｅｍａ×Ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒａ　ｃｖ　Ｓｉｌｖｅｒ　Ｃｕｐ）和大
花高代（Ｇｏｄｅｔｉａ　ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒａ　Ｌｉｎｄｌ）试管苗对ＰＰ３３３
的生长响应相似［１６，１７］．虽然对植株增殖生长表现
为抑制效应，培养基中添加５．０ｍｇ·Ｌ－１　ＰＰ３３３对千
日红试管苗开花诱导却具有明显的促进效应（表５，
表６），而且使植株矮化、增壮，提高了观赏价值
（图１Ｄ）．ＰＰ３３３目前已广泛应用于万寿菊（Ｔａｇｅｔｅｓ
ｅｒｅｃｔａ）和兰科的多种植物的试管开花诱导，如
Ｔｅ－ｃｈａｔｏ　Ｓ等研究发现，ＰＰ３３３与石斛兰（Ｆｒｉｅｄｅｒｉｃｋｓ
Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ　ｏｒｃｈｉｄ）花芽的诱导有关，而且ＰＰ３３３
与ＴＤＺ以适宜的浓度配比使用，可大大提高春石
斛（Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ　ｎｏｂｉｌｅ）实生苗的花芽诱导率，促
进其开花［１８，１９］，推测可能是其这些壮苗和调整株
型的作用为植物成花提供了相应的营养储备［２０］．
ＰＰ３３３作为植物生长延缓剂，在植物体内抑制内源
激素ＧＡ的生物合成，提高可溶性糖、淀粉、全氮
含量，增加Ｃ／Ｎ比值，从而提高成花率［２１］．
在实验过程中，蔗糖含量增加１倍，千日红无
菌苗生根率、根长和根数分别 增 加 １２７．６％、
１５４．２％和２５０．２％，开花率显著提高（表３、表５、
表６）．有研究表明蔗糖不仅影响着培养物的生长
速度和生长量，还影响其代谢水平、次生代谢物的
合成以及细胞的形态和发生［２２，２３］；并且糖对植物
开花诱导具有普遍性，一般在一定浓度范围内，开
花率随着糖浓度的提高而提高［２４，２５］．在分子水平
上，模式植物拟南芥（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｔｈａｌｉａｎａ）上的
研究表明高浓度的蔗糖通过延迟激活基因ＬＥＡＦＹ
（ＬＦＹ）的表达，进而延长植株的营养生长，增加叶
片数量，并且蔗糖还抑制ＦＴ 和ＳＯＣ１／ＡＧＬ２０基
因的表达水平［２６］．
大量研究表明，在植物花芽分化过程中，多胺
及其前体物精氨酸水平会发生显著的变化，单独或
混合外施精胺（Ｓｐｍ）、腐胺（Ｐｕｔ）与亚精胺（Ｓｐｄ）能
够促进花芽形成，增加花芽的数目［２７］．外源添加
亚精胺对石竹、铁皮石斛和秋菊 “神马”等成花诱
导有明显的影响［２８］．本研究结果表明亚精胺对千
日红成花诱导也具有显著促进作用（表５、表６）．
但多胺对花芽分化的作用机理，目前还没有统一的
说法［２９］．虽然在试验过程中成功诱导出千日红试
管花，但其开花率仍很低，关于千日红开花影响因
素及调控机制尚在进一步深入研究中．
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（责任编辑　俞诗源）
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