全 文 ：第1 6卷 第 2期
1 9 9 0年 白 求 恩
医 砰 大 学
O J FO N RM A E U E U N B T H N NI V
学
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1 6 No
.
2
1 9 9 0
`
侧金盏花中强心试的高效液相色谱分离和相对含工测定
4
化学教研室 谷学林 马冰如 任晓光 *
提要 作者研究 了侧金盏 、花 中强心 式的反相 高效液相 色谱浏定方法 , 并时吉林产的侧金
盏花中强 心 贰的相时含量进行 了侧定 。 刚定结果表明 , . 吉林产的侧金盏花中主要含式元 A 、
试元 B 、 加拿大麻式 、 铃兰毒式和毒毛旋花子式元等强心成分 。
关. 饲 高效液相 色谱法 侧金 盏花 强心式
强心贰是临床上广泛用于治疗心血管疾
病的重要药物 〔 1 〕 , 它主要来源于植 物 。 过
去曾使用纸层析法 、 薄层层析法 、 气相色谱
法 〔 “ 〕分离 测 定植物中的强心试 。 近年来 ,
迅速发展的高效液相色谱法在测定植物中强
心贰方面表现出了极大的优越性 。 目前 , 使
用高效液相色谱方法测定洋地黄中强心贰已
有不少研究 〔“ 一 7 〕 , 但尚未见使用高效液相
色谱方法分离测 定 侧 金 盏花中强心试的文
献 。 作者探索了高效液相色谱法分离测定侧
金盏花中强心贰的条件 , 并测定了样品中各
种强心贰的相对含量 。
河镇零点桥 。采集后阴干3天 ,洗净 。并用蛇% 乙醇漂
洗杀酶样品晾干后 ,粉碎 ( 20 ~ 40 目 ) 。此样品用弱%
乙醇害温浸泡 ,减压浓缩浸液。 加蒸馏水冷冻后 ,加
氧化铝助滤去胶。 滤液加碳酸钙和硫酸铁 ( 1 : 1 )
至沉淀完全 。 过滤 , 滤液分别用氯仿和氯仿一 乙醇
( 1
: 1 ) 萃取 。 回收溶剂 , 得黄色粉末 , 称 为总
强心武 A ; 。 总强心式 A : 用甲醇溶解 后 , 过中性
氧化铝柱再纯化。 纯化后的样品溶液加无水硫酸钠
脱水后 , 回收溶剂 , 得淡黄色粉末 , 称为总强心式
A Z
。 总强心式 A i和 A Z均放在千燥器中 , 在 4 ℃冰
箱中保存。
.
1 实 验 部 分
1 .1 试荆与仪器
` 试剂 甲醇 (分析纯 ) , 乙猜 (色谱纯 ) , 新
鲜重蒸馏水。 强心式标准品 : 铃兰毒武系黑龙江省
一面坡制药厂惠贼 式元 A和武元 B 为作者分离所
得。其余的标准品均购自美国 SI G M 入 化学公司 。仪
器 L C se 4 A高效液相色谱仪 (日本岛津产 ) , S P D
一 ZA S可变波长紫外分光光度检测器 , O D S反相色
谱柱 ( 15 0 又 6 . o m m , 固定 相粒度 5 件m ) , C R一
3 A微处理机。
1
.
2 方法与过程
1
.
2
.
1 侧金盏花根部总强心武的提取
侧金盏花于 1 980 . 4月底采自吉林省辉南县石道
198 8一 09 一 02收稿 若哈尔滨化工研究所
1
·
2
·
2 色谱过程
各种标准品单一溶液 、 混合溶液和样品溶液均
经过准确称量后用洗脱液溶解在 10 ml 容量瓶中 ,
所得的溶液放在冰箱中保存 , 可使用一个月 。 标准
溶液和待测样品溶液均用10 口微量注射器注入到液
相色谱仪的反相柱中。 紫外检测器检测流出组分在
2 18
n m 波长处的吸收信号 , 由 C R e 3 A 微处理机计
算色谱峰。给出色谱图及保留时间和峰面积 (协v . 5)
数据 。 由保留时间对照定性 , 定量采用外标准曲线
方法 , 使用峰面积参数 。
.1 2
·
3 各种强心武校正曲线的制作
称量各种强心式标准品 1 m g左右 , 用 1 m l 流
动相溶解后 , 依次稀释 。 得到 10 个不同浓度的标准
溶液 , 浓度范围为 20 ~ 200陀 / m l 。 每种浓度溶液
进样 10 一次 , 进样量 6川 ’。 以 10 次色谱峰的峰面积
(卜v . 5) 的平均值为纵坐标 , 以进样 量 (。 g ) 为
横坐标 , 绘制各种强心武的校正曲线。
一
1 3 1
,
DOI : 10. 13481 /j . 1671 -587x. 1990. 02. 012
2结 果 比 , 同时增大流动相流速 , 以使单位时间内流经色
2
. 飞 色谁峰的分离与定性 谱柱的有机洗脱剂 (甲醇或乙睛) 的量不致由此减少
2
.
1
.
1 分离条件的选择 时 , 出现良好的色谱分离峰 , 见表 1 。 这种 “ 低配
温度对强心 式在 O D S 柱 上 的分 离影响较小 比 , 高流速 ” 方法能使先流出峰保留值缩短 , 后流
〔 8 〕。 因此 , 所有分 离测定工作均在室温下进行。 出峰保留值增大 , 色谱峰 向 两 边 散开 , 且峰形变
为了增强定性的可靠程度 , 使用甲醇一水和乙清一 锐 。 表 1 明显地表明了 “ 低配比 , 高流速 ” 方法产
水两组二元洗脱剂作为流动相 。 经过反复实验 , 我 生的这种效果 .
们发现 , 当逐渐降低有机洗脱剂在流动 相 中的配
T
a
b l
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o w e r r a t i o a n d h i g h
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1 2 3 4 6 8
补份3 7 : 6 3
3 5 1 6 5
3 2
: 6 8
31
* 6 9
0
。
9 0 0
。
3 33
0
。
3 5 0
0
。
36 5
0
。
36 6
3 0 5
2 9 9
2 77
2 7 5
3 4 7
.
38 2
38 5
4 2 2
4 2 4
4 4 9
4 58
6
共
4 6 2
53 3
5 4 0
7
6 6 2
6 9 4
9 6 6
9 93
9 9 5
106 1
1 5 36
1 5 4 4
叮自任才0月曰勺nUQUO心目勺自`寸上,二
八曰月任ǔ名n“ù月工1占…1上上1上
口曰国 口` . . . .一一闷, . . . . . . . . ` . . . . , . .口 .困. . 门. . 口目. . . .
. I n d i
e a t i n g u n s e p a r a t e d p e a k s
表中打 ` 峰为未分开峰 , 峰号按保留时间由小
4
、加1 5
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器(单泣应)
( m i
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)
F 19
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.
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e m Z , U y
m o n i t o r : a t 2 18 n m ; S e q u e n c e o f
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以 t i o n * 1 . e o n v a l l a t o x i n , 2
.
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s a m p l e A
Z
一
1 3 2
.
到大排列 。 使用甲醇一水作为流动相 , 情况类似 。
实验中使用 “ 低配比 , 高流速” 方法来选择流动相
配比和流动相流速 , 无论使用乙猜一水作流动相 ,
还是使用甲醇一水作流动相来分离侧金盏花中强心
式 , 均获得比较分散的锐峰 (见 图 1 , b 、 C 和 图
2
,
b
、 c 。 虽然甲醇一水流动系统对侧 金盏花中
强心试的色谱分离并不明显优 于 乙清一水 流动系
统 , 但乙晴毒性大 , 价格昂贵。 因此 , 对侧金盏花
中强心式的测定 , 使用甲醇一水作为流动相为宜 。
2
.
1
.
2 总强心式 A I和 A Z中强心试的定性
采用保留时间对照法进行定性 。 图 l 是 以甲醇
一水为流动相时 , 标准强心贰溶液 、 样品溶液的色
谱图 。 图 2为乙清一水为流动相时 , 标准强心式溶
液 、 样品溶液的色谱图 。 表 2为各种强心试在标准
溶液中与样品溶液中的保留时间对照表 。
)
二 . , ,
3
(…、 · {}
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5 件 m ; M o b i l e p h a s e : C H 3 C N : H Z O ( 3 2 : 68 ) ,
F l o w r a t e : i
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3 6士 0 . 0 3 5 . 3 6士 0 。 04
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.
3 3士 0 . 04 7 . 3 3士 0 . 04
1 8
.
6 3土0 . 0 5 1 8 . 6 3士 0 . 0 5
2 4
. 凌8士 0 . 0 6 24 . 4 8士 0 . 06
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93士 0 . 0 3 3 . 3 8土0 . 0 3 3 . 38士 0 . 03
5
.
36土0 . 0 3 4 . 8 1士 0 . 0 3 4 . 8 1士 0 . 03
7
。
3 3士 0 . 0 4 7 . 4 4士 0 . 0 4 7 .理4士0 . 04
1 8
.
63士 0 . 0 5 1 7 . 56士 0 . 0 5 1 7 . 56士 0 . 0 6
2 4
.
4 8士0 . 0 6 27 . 6 8士 0 . 0 6 2 7 . 68士 0 . 07
S a m p l
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A Z
3
.
38士 0 。 03
4
。
8 1士 0 . 03
7
.
44士 0 . 04
17
.
5 6士 0 . 06
2 7
。
68士 0 , 07
13 3
-
由图 1、 图 2和表 2, 我们不难看出 , 总强心
式 A l 和总强心式A : 中含有铃兰毒式 ( c o n v al l a -
t o x i n )
、 毒毛旋花子武元 ( s t r o p h a n t h i d i n ) 、 加
拿大麻式 ( e y m a r i 。 ) 、 武元 A ( a g l y 。 o o e A ) 和式
元 B ( a g l y e o n o B ) 等五种成分 。
2
·
2 校正曲线和检洲下限
为了检测紫外吸收强度与强心武量之间的紧性
关系 , 制作了铃兰毒式、 毒毛旋花子武元 、 加拿大
麻式、 贰元 A和求元 B 的校正曲线 。 表 3 为上述 6
种强心贰的回归方程参数。 表 8 明显地表明了强心
的紫外吸收强度与进样量之间的线性关系。
T a b l e 3 P a r a m e t e r , f o r t h e r e g r e s s i o 刀
e q u a t i o n o f 5 e a r d i
a e g l y
e o s i d
e s
2
.
4 两种前处理方法的比较
总强心式 A : 是直接溶剂萃取得到的 。 总物合
贰 A Z是总强心式 A ,经 A 更2 0 3柱纯化后得到的 。 实
验结果表明 , 总强心式 A ;和 人 : 中所含强心式种类
相同 , 但含量差别较大。 除个别强心式外 , 总强心
式A : 中强今试含量明显高于总强心式 A Z 。 另外 ,
总强心试A 、 的收率也较 A Z 高 。 因此 , , 经1A 2 0 3柱
纯化步骤 , 强心式组分有一定损失 , 但程度不同,
有些组分损失严重 。 由于紫外特定波长检测 , 反相
柱上的较小进样量 , 尽管总强心式 A , 的杂质含量
高于总强心武 A : , 但并未给分析工作带来任何影
响 。 因此 , 我们认为 , 对侧金盏花中强心武的高效
液相色谱测定 , 前处理以简单溶剂萃取为宜。
I = a + U l
. . . . . 口 . . . 肠. . . . . .
令 族
C
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几 e g l y e o s i d e a b r
C o n v a l l a o x i n 一 0 . 0 11 4 5 . 58 0 . 99 9 5
S t r o p h甘 n t h i d i n 一 0 . 2 4 6 6 9 . 8 8 0 · 99 9 0
C y m a r i 区 一 0 . 8 68 56 . 6 9 0 . 9 99 9
A g l v
e o n e A 0
.
5 79 8 4
.
8 5 0
.
99 93
A g l y
e o n e B 0
.
9 37 86
。
5 9 0
.
9 99 9
用2 1 8 n m 作为强心式紫外检测波长 , 当信噪比
为 10 : i时 , 检测下限为 20 o n g 。
2
·
3 总强心式A : 和 A : 中强心戒含 , 洲定
采用外标准曲线方法对总强心为 A I和 A : 中 6
种强心式含量进行了测定 , 结果见表 4 。
T a b l
e 4 C o 且 t e n t s o f e a r d i a e g l y e o s i d e s
i n s a m p l
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4
。
4 1 孟 6 。 弓R Z 。 0 8
2
。连3 2 。 3 2 2 。 43
4
。
84
2
.
0 9
2
。
54 2
。
12
3 讨 论 …、
据国外文献报道 , 侧金盏花 中 含索 马
林 、 毒毛旋花子贰元 、 加拿大麻贰 、 铃兰毒
贰 、 黄麻属贰 A 、 K二毒毛旋花子次贰日 , 毒
毛旋花子醇和加拿大麻醇等八种强心贰 。 作
者研究结果表明 , 吉林产侧金盏花中含有铃
兰毒试 、 加拿大麻贰和毒毛旋花子贰元 , 这与
国外文献报道一致 。 但作者并未发现吉林产
的侧金盏花中含有毒毛旋花子次贰 p 和毒毛
旋花子醇 。 另外 , 还发现该植物中含有另两
种化学成分 。 根据 F A B 质谱 、 红外光谱和氢谱
数据 , 这两种成分 均 为 贰 元 , 分子量分别
为 40 4和 3 9 6 , 暂称为贰元 A 和贰元 B 。 虽然
尚为确定贰元 A 和试元 B 的分子结构 , 但根
据分子量和色谱保留行为可以认为贰元 A 和
贰元 B为侧金盏花中未曾报道的成分 。
(感谢哈尔滨市化工所王晓春主任、 副新
大副所长在仪器使用方面为本实验提供了方
便 , 黑龙江省一面坡制药厂贾富副厂长为实
验提供了铃兰毒贰标准品 , 在此一并致谢 )
今 考 文 献
9
。
7 9 4
。
29 2
。
34 。 t a l
.
J C h r o m a t o g r
, 1 0 50 , 2 02 .
通一OQnUnb
:
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4
。
4 8 1
。
8 2 2
。
1 1 2
。
4 1
F u j i i Y
,
13 9
C
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,
K a l口 a n 5 M . J C h r o -
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1 3 4
,
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, 1 9 7 3 , 8 6 : 2 5 4
5 T i h
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, e t a l
.
P z a n t a M e d
, 1 0 52 : 4 5 ( 8 ) : 2 0 7
4 F u j i i Y
.
J C五r o m a t o g r , 1 98 3 , 2 5 8 : 1 4 7
6 B e 川双 欲 o B B B , 班几 p . X宜 班 一中 a p 从 袱 , 2 0 5 4 ,
1 8 ( 2 ): 2 36
6 F e r e o e e o
, e t a l
.
A n a l B i o e h e m
,
1 0 5 6 :
7
1 5 6 ( 1 0 )
: 1 7 1
F o i i i Y
, e t a l
.
C b r o m a t o g r C o m m u n
,
1 9 8 7 , 1 0 ( 8 )
: 1 3 7
D a v y d
o v V Y a
, e t a l
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r o m a t o g r
, 1 0 51
2 0 4 : 2 9 3
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G u X u e li n
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Re n X i a o g u a n g
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( D 召 , a , `饥 e . ` o f C h e m ` s ￡, 犷 , 奉 H a , b :` C h e 机 i c a l T e e h : ￡c l : s t i t o t e )
W e s t u d i e d t h e 庄 e t h o d o f d e t e r m i n a t i o n
_
o f c a r d i a c g l v c o s i d e s f r o m A d o n i s
a m u r e n s i s b y t h e r e v e r s e d一 P h a s e 五i g h一 P e r f o r m a n c e l i q u i d e h r o m a t o g了 a p h y a n d
d 亡 t e r m i n e d t h e r e l a t i v e e o n t e n t o f e a r d i a e g l y e o s i d e s f r o m A d o n i s a m u r e n s i 。
o f J i l i n p r o v i n e e
.
B y u s i n g t h e “ l o w e r r a t i o a n d h i g h e r f l o w r a t e , m e t五o d ,
g o o d s e p a r a t e d P e a k s c o u l d b e r a p i d l y o b t a i n e d
.
A l t 五o u g h b o t h t h e m e t h a n o l -
w a t e r s o l v e n t s y s t e m a n d t h e a e e t o n i t r i l e一 w a t e r s o l v e n t s y s t e m e o u l d b e u s e d i n
s e P a r a t i o n o f e a r d i a e g l y e o s i d e s f r o m A d o n i s a m u r e n s i
s , t h e f o r m e r s y o t e m w a s
m o r e a d v a n t a g e o u s
.
T h e s i m P l
e s o l v e n t e x t r a e t i o n m e t h o d d i o P l a v e d t h a t A d o n i s
a m u r e n s i s m a i n l y e o n t a i n e d e y m a r i n s
’
e o n v a l l a t o x i n
, s t r o p h a n t h i d i n , a g l y o o n e A
a n d B
.
K e y w o r d s H i g h二 P e r f o r m a n e e l i q u i d e h r o m a t o g r a P h y ( H P L C )
C a r d i a e g l y e o s i d e s Ad o n i s a m u r e n s i s
(上接 12 7页 )
滑 , 肠管受挤压推向右侧 , B超诊断为腹腔内巨大囊性肿物。
手术所见 : 切开腹壁 , 见腹腔内被一巨大 肿物所占据 , 肠管被压向右下腹 , 肿物上界凸入左侧胸腔 ,
下界进盆腔 , 与肝 、 胰无关系。 肿物位于腹膜后方 , 不活动 , 基底与后腹壁 相连 , 打开后腹膜可见肿物有
一较厚的囊壁 , 因肿物太大 . 将其排液 , 放出无色透明液体 , 同时见到肿物内稠厚的皮脂样物质。 肿物重
量为 8 . s k g 。 手术病理诊断为良性囊性畸胎瘤。
讨论 : 良性囊性畸胎瘤又叫做皮样囊肿 , 为胚胎发育中少量外胚叶 组织遗留所形成。 本例病人囊内为
角化球 , 因而超声显示为约 2 . oc m x l . oc m大小的圆形光团 , 也有小如豌豆 , 近 成百只 。 而构成超声特有
的声像图 。 因而与一般所常见的四种类型的声象图不同。 ( 1 08 9一 09 一 06 收稿 )
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