全 文 ：第 18 期
第 55 卷第 8期
2016 年 4 月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 55 No.7
Apr.，2016
2
1
1
Jan
18期
9
Vol． 5 No.18
Sep
收稿日期：2015－10－19
基金项目：广西医药卫生自筹经费计划项目（Z2015043）
作者简介：黄建猷（1981－），男，广西桂林人，助理研究员，主要从事天然产物化学研究，（电话）0771－5868989（电子信箱）dearhuangjianyou＠126．com；
通信作者，卢文杰，主任药师，主要从事天然产物化学研究，（电话）0771－5868989（电子信箱）luwenjie0771＠163．com。
中平树 ［Macaranga denticulata （Bl．） Muell．
Arg．］为大戟科血桐属植物，又名血桐、糠皮树、赖
麻、牢麻等，分布于广东、广西、贵州、云南、西藏等
地。其根味苦，性凉。具有清热利湿、退黄的功能，主
治黄疸型肝炎，胃脘疼痛［1］。广西民间主要用其根部
治疗黄疸性肝炎方面的疾病［2］，应用前景广阔。为探
明中平树根的化学物质基础，本试验从中平树药材
中分离鉴定得到了东莨菪内酯，并采用高效液相色
谱法对其含量进行了测定，该方法可用于中平树药
材的质量控制。
1 材料与方法
1．1 材料与试剂
中平树采自广西马上县，由广西中医药研究院
何开家主任中药师鉴定为中平树。 东莨菪内酯对照
品为从中平树中提取分离获得，经结构鉴定并采用
HPLC 归一化法测得含量大于 98％后使用； 甲醇为
色谱纯；水为去离子水；其余试剂为分析纯。
中平树中东莨菪内酯的分离鉴定及含量测定
黄建猷 1，卢文杰 1，2，谭 晓 1，陆国寿 1，黄周锋1，兰保强 1
（1．广西中医药研究院，南宁 530022；2．广西中药质量标准研究重点实验室，南宁 530022）
摘要：采用硅胶柱色谱分离纯化的方法从中平树［Macaranga denticulata （Bl．） Muell． Arg．］中分离得到一
种香豆素类化合物，根据理化性质及光谱数据鉴定其为东莨菪内酯。 并采用 ZORBAX Eclipse XDB－C18
色谱柱（250 mm×4．6 mm，5 μm），以甲醇∶0．1％冰醋酸（39∶61）为流动相，流速 1．0 mL ／ min，检测波长 345 nm
的色谱条件，用 HPLC法测定中平树中东莨菪内酯的含量。 结果表明，东莨菪内酯在 1．45～7．24μg ／mL 范围内
与其峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为 99．18％，RSD 为 1．18％（n＝6）。 该方法简便、准确、快速，可
用于中平树药材的质量控制。
关键词：中平树［Macaranga denticulata （Bl．） Muell． Arg．］；东莨菪内酯；分离纯化；高效液相色谱法
中图分类号：R284．1 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2016）18－4805-03
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.18.044
Isolation，Purification and Determination of Scopoletin in
Macaranga denticulata （Bl．） Muell． Arg．
HUANG Jian－you1，LU Wen－jie1，2，TAN Xiao1，LU Guo－shou1，HUANG Zhou－feng1，LAN Bao－qiang1
（1．Guangxi Institute of Traditional Medical and Pharmaceutical Sciences， Nanning 530022，China；
2．Guangxi Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Quality Stardands， Nanning 530022， China）
Abstract：A coumarin was isolated from Macaranga denticulata （Bl．） Muell．－Arg． by silica gel column chromatography． The
structure of the isolated compound was elucidated on the basis of spectral characteristics and identified as scopoletin． To es-
tablish a method for determination of scopoletin in Macaranga denticulata（Bl．） Muell． Arg． by HPLC． ZORBAX Eclipse XDB-
C18（250 mm×4．6 mm，5 μm） reversed -phase column with mobile phase as methyl alcohol -0．1％ acetic acid solution（39∶61）
was used． The flow rate was 1．0 mL ／ min with detection wavelength of 345 nm． The results showed the linear range for scopo-
letin was 1．45～7．24 μg ／ mL． The average recovery was 99．18％ with RSD of 1．18％ （n＝6）． The method is simple，accurate，
rapid，and can be used to determine scopoletin in Macaranga denticulata （Bl．） Muell． Arg．．
Key words：Macaranga denticulata （Bl．） Muell． Arg．； scopoletin； isolation and purification； HPLC
湖 北 农 业 科 学 2016 年
1．2 仪器
IR－470型红外光谱仪、LC－10AT型高效液相色
谱仪、 威玛龙色谱工作站、AUW220D 型分析天平、
AEL－200 型分析天平 （日本岛津公司 ），DRX－
500MHz 型超导核磁共振仪 （瑞士布鲁克公司 ），
ZDM－83－1型电热熔点仪 （江苏科教玻璃仪器厂），
KQ－500DB 型数控超声波清洗器 （昆明市超声仪器
有限公司），HH－S2 型数显恒温水浴锅（金坛市医疗
仪器厂），SHB－III 型循环水式多用真空泵 （郑州长
城科工贸有限公司）。
1．3 方法
1．3．1 提取分离 中平树粉碎成粗粉，称取 12 kg，加
8 倍体积 95％乙醇浸泡过夜后加热回流提取 4 次，
每次 2 h，合并提取液，减压回收乙醇，得浸膏。 浸膏
加入海沙使其分散均匀，依次用石油醚（60～90 ℃）、
乙酸乙酯回流提取，回收溶剂后分别得到石油醚部
位及乙酸乙酯部位。 取乙酸乙酯部位进行硅胶柱色
谱分离，用石油醚（60～90 ℃）—乙酸乙酯混合溶剂
（100∶0→70∶30）梯度洗脱，共收集 265个流分。 采用
薄层鉴别将各流份分别合并， 将第 150 流份到第
183 流份合并， 反复柱层析及重结晶得到黄色针状
结晶。
1．3．2 对照品溶液的制备 精密称取东莨菪内酯
对照品 3．62 mg 置于 250 mL 量瓶，用甲醇溶解并定
容至刻度，摇匀，得浓度为 14．48 μg ／ mL 的对照品储
备液，备用。精密量取 14．48 μg ／ mL的对照品储备液
3．0 mL 置于 10 mL 量瓶中， 用甲醇稀释至刻度，摇
匀，即得浓度为 4．34 μg ／ mL的对照品溶液。
1．3．3 供试品溶液的制备 精密称定中平树药材粉
末（过 40 目筛）2．0 g，置烧瓶中，精密加入 70％乙醇
50 mL，称定重量，加热回流 1 h，放冷，再称定重量，
用 70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。 精密量取
续滤液 25 mL，置烧瓶中，浓缩至约 1 mL，加 3 mol ／ L
盐酸溶液 10 mL，水浴中加热水解 1 h，立即冷却，移
入分液漏斗中，用水 10 mL 洗涤容器，并入分液漏
斗中，用氯仿强力振摇 5 次，每次 15 mL，合并氯仿
液，立即加甲醇使溶解，转移至 10 mL 量瓶中，并稀
释至刻度，摇匀，即得。
1．3．4 色谱条件 采用 ZORBAX Eclipse XDB－C18
色谱柱（250 mm×4．6 mm，5 μm），流动相为甲醇∶0．1％
冰醋酸水溶液（39∶61），流速 1．0 mL ／ min，柱温为室
温，检测波长 345 nm。 分别精密吸取东莨菪内酯对
照品、供试品和空白溶液各 10 μL，进样分析 ，记
录色谱图（图 1、图 2）。 理论塔板数按东莨菪内酯
计算应不低于 3 000，东莨菪内酯峰与相邻峰的分
离度大于 1．5，供试品中其他成分不干扰测定。
2 结果与分析
2．1 东莨菪内酯的结构鉴定
黄色针状结晶（氯仿），m．p．：202～204 ℃，EI－MS
m ／ z：192 ［M＋］。 1H NMR （500 MHz，MeOD）δ 7．85
（1H，d，J＝9．4 Hz，H－4），7．11 （1H，s，H－8），6．77（1H，
s，H－5），6．20（1H，d，J＝9．4 Hz，H－3），4．91（1H，s，－OH），
3．91（3H，s，－OCH3）；13C NMR（125MHz，MeOD）δ 164．0
（C－2），112．6（C－3），146．1（C－4），109．8（C－5），147．0
（C－6），152．9（C－7），103．9（C－8），151．4（C－9），112．5
（C－10），56．8（OCH3）。 该数据与文献［3］一致，鉴定
为东莨菪内酯（Scopoletin），东莨菪内酯的化学结构
见图 3。
2．2 东莨菪内酯的含量测定
2．2．1 线性关系考察 分别精密吸取东莨菪内酯
对照品储备液 1．0、2．0、3．0、4．0、5．0 mL 置于 10 mL
量瓶中，用甲醇定容至刻度。 精密吸取上述系列浓
度对照品溶液各 10 μL， 进样测定。 以对照品浓度
（μg ／ mL）为横坐标 X，色谱峰面积为纵坐标 Y，得回
归方程为：Y＝42 817X－9 136（r＝0．999 9），东莨菪内
酯 1．45～7．24 μg ／ mL与峰面积呈良好的线性关系。
* 东莨菪内酯
图 1 东莨菪内酯对照品色谱图
0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0
时间//min
50.0
36.3
22.5
8.8
-5.0
峰
值
* 东莨菪内酯
图 2 样品色谱图
0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0
时间//min
50.0
36.3
22.5
8.8
-5.0
峰
值
图 3 东莨菪内酯的化学结构
HO
O
O O
4806
第 18 期
2．2．2 精密度试验 取对照品溶液，按“1．3．4”色谱条
件连续进样 6 次，记录峰面积，计算得东莨菪内酯
峰面积的 RSD为 0．51％，表明该仪器精密度良好。
2．2．3 重复性试验 取同一批样品 6 份，按“1．3．3”
制备供试品溶液并进样测定，计算得东莨菪内酯的
平均含量为 36．486 6 μg ／ g，RSD为 1．13％，表明该方
法重复性良好。
2．2．4 稳定性试验 取同一批供试液，分别于制备后
0、2、4、6、12、24 h进样测定，计算东莨菪内酯峰面积
的 RSD为 1．08％，表明供试品溶液的稳定性良好。
2．2．5 加样回收率试验 精密称取已知东莨菪内
酯含量的中平树药材粉末 1．0 g，共 6 份，分别加入
一定量的对照品溶液，按“1．3．3”制备供试品溶液并
进行测定，东莨菪内酯的回收率见表 1。
2．2．6 样品的测定 取 3 批中平树药材，按”1．3．3”
制备供试品溶液，取 10 μL进样测定，计算得 3批样
品中东莨菪内酯的平均含量分别为 41．253 6、
50．356 8、39．423 5 μg ／ g；RSD 分别为 1．23％、1．89％、
1．33％（n＝3）。
3 小结与讨论
文献［4－10］分别考察了以甲醇、乙醇、70％乙醇
为提取溶剂，冷浸、超声、回流 3 种提取方法以及提
取时间对东莨菪内酯提取效率的影响。 结果表明，
70％乙醇回流提取 1 h的效果最佳。
本研究采用硅胶柱色谱分离纯化的方法从中
平树［Macaranga denticulata （Bl．） Muell． Arg．］药材中
分离得到一种香豆素类化合物，根据理化性质及光谱
数据鉴定其为东莨菪内酯，并采用 ZORBAX Eclipse
XDB－C18 色谱柱（250 mm×4．6 mm，5 μm），以甲醇 ∶
0．1％冰醋酸（39∶61）为流动相，流速 1．0 mL ／ min，检
测波长 345 nm的色谱条件，用 HPLC 法测定中平树
中东莨菪内酯的含量。 结果表明， 东莨菪内酯在
1．45～7．24 μg ／ mL 范围内与其峰面积呈良好的线性
关系， 平均回收率为 99．18％，RSD 为 1．18％（n＝6）。
该方法简便、准确、快速，可用于中平树药材的质量
控制。
参考文献：
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表 1 中平树样品中东莨菪内酯的加样回收率（n＝6）
编
号
1
2
3
4
5
6
样品含量
μg/g
36.771 2
37.807 4
39.380 0
38.062 8
39.781 3
39.288 8
加入量
μg/g
36.2
36.2
36.2
36.2
36.2
36.2
测得量
μg/g
72.801 3
73.453 2
76.037 3
73.887 9
75.193 1
75.132 5
回收率
%
99.53
98.47
101.26
98.96
97.82
99.02
平均回收率
%
99.18
RSD
%
1.18
黄建猷等：中平树中东莨菪内酯的分离鉴定及含量测定 4807