全 文 ：分光光度法测定角果藜中总黄酮含量
刘珊珊，马先梅，杨红兵* (石河子大学化学化工学院新疆兵团化工绿色过程重点实验室，新疆石河子 832003)
摘要 ［目的］建立角果藜中总黄酮含量的测定方法。［方法］采用加热回流法提取角果藜中的黄酮类化合物，以芦丁为标准品测定总
黄酮含量。［结果］采用紫外分光光度法测定总黄酮含量时，在 0． 019 ～0． 102 mg /ml浓度范围内线性关系良好(r =0． 999 1)。方法的精
密度和准确度均较高，相对标准偏差为 0． 226%，平均回收率为 99． 36%。测得角果藜中总黄酮含量为 10． 12 mg /g。［结论］该方法操作
简单，科学准确，适合用于角果藜中总黄酮含量的测定。
关键词 角果藜;黄酮类化合物;分光光度法
中图分类号 O657． 32 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2011)29 －17865 －02
Determination of Total Flavones Content in Ceratocarpus arenarius L． by Spectrophotometry
LIU Shan-shan et al (Xinjiang Bingtuan Key Laboratory for Green Processing of Chemical Engineering /School of Chemistry and Chemical
Engineering，Shihezi University，Shihezi，Xinjiang 832003)
Abstract ［Objective］The aim was to establish the method for determining total flavoens content in Ceratocarpus arenarius L． ．［Method］
Flavonoids were extracted from C． arenarius by Heating refluxing，and determined with rutin as the standard．［Result］ In the range of 0． 019
－ 0． 102 mg /ml，linear relationship was good (r = 0． 999 1)． This method had higher precision and accuracy with RSD of 0． 226% and recov-
eries of 99． 36% ． The total flavoens content from C． arenarius is 10． 12 mg /g。［Conclusion］ The method was simple and reliable，which
could be used to control the quality of C． arenariu．
Key words Ceratocarpus arenarius L．;Flavonoids;Spectrophotometry
基金项目 新疆兵团国际科技合作计划(2011BC003)。
作者简介 刘珊珊(1987 － ) ，女，山东泰安人，硕士研究生，从事天然产
物活性成分及功能研究研究，E-mail:lshan87@ 163． com。*
通讯作者，教授，硕士，硕士生导师，从事天然产物分析研
究，E-mail:yhb_tea@ shzu． edu． cn。
收稿日期 2011-07-15
新疆是我国藜科植物分布最多的地区［1］，其复杂的地理
环境及独特的气候条件造就了丰富的藜科植物资源。藜科
植物与人类生活有着密切的关系，如甜菜是制糖的原料;土
荆芥和猪毛菜为制药原料;无叶假木贼用作农用杀虫剂的原
料。角果藜(Ceratocarpus arenarius L．)为藜科角果藜属(单
种属)一年生草本植物，在我国仅分布于新疆。角果藜生长
于戈壁和荒地，资源丰富，动物不喜食。目前，对角果藜的研
究主要集中在其生态学研究［2 －4］，而对于其化学成分的研究
尚未见报道。在杨红兵等的前期研究中［5］，发现角果藜具有
较强的生物活性，为了有效地利用这一资源，笔者采用加热
回流 法 提 取 角 果 藜 中 的 黄 酮 类 化 合 物，并 用
NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色法测定了角果藜中总黄酮的含
量，为合理开发和利用新疆植物资源提供了理论依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 供试材料。所用角果藜于 2010年 9月采自新疆玛纳
斯，石河子大学闫平教授鉴定。角果藜经干燥粉碎后备用。
1． 1． 2 试剂。芦丁，生化试剂(中国药品生物制品检定所) ;
无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠均为分析纯。试验用
水为蒸馏水。
1． 1． 3 主要仪器。紫外可见分光光度计(北京莱伯泰科仪
器有限公司) ;722S型可见分光光度计(上海菁华科技仪器
有限公司) ;R-200 /205 型旋转蒸发仪(瑞士步琪 Buchi 公
司) ;SHZ-C型循环水式多用真空泵(巩义市予华仪器厂)。
1． 2 方法
1． 2． 1 对照品标准溶液的制备。精密称取在 120 ℃减压干
燥至恒重的芦丁对照品 20． 2 mg，置 100 ml容量瓶中，加甲醇
超声处理使其溶解，冷却后加甲醇稀释至刻度，摇匀，得到对
照品(浓度为 0． 202 mg /ml)储备液。
1． 2． 2 样品溶液的制备。准确称取角果藜粉末 5． 0 g于 250
ml三口烧瓶中，加入100 ml体积分数为95%乙醇溶液，80 ℃
回流提取 2 h，共 3次，合并滤液，浓缩定容至 100 ml 容量瓶
中，精密吸取 25 ml定容到 50 ml量瓶中，作为样品溶液。
1． 2． 3 样品的定性鉴定。①荧光试验:取少量样品溶液滴
于滤纸上，干燥后在紫外灯下观察荧光;②盐酸 －镁粉反应:
取适量样品溶液置于试管中，加入少量镁粉，再滴加 1 ～ 2 滴
浓盐酸，观察反应现象;③铝盐显色反应:取少量样品溶液滴
于滤纸上，干燥后，喷上 1% AlCl3 乙醇溶液，观察反应现象，
并在紫外灯下观察荧光;④碱性试剂显色反应:取少量样品
溶液滴于滤纸上，干燥后，喷上 1% NaOH溶液，观察反应现
象，并在紫外灯下观察荧光;⑤紫外吸收光谱:样品溶液用乙
醇稀释后，在波长 200 ～450 nm范围内扫描测定吸收峰。
1． 2． 4 测定波长的选择。分别吸取芦丁标准品溶液及角果
藜样品溶液 0． 1和 2． 0 ml于 10 ml容量瓶中，加入 60%乙醇
3 ml，分别依次各加入 5%的 NaNO2 溶液 0． 3 ml，摇匀，放置
6 min，10% Al(NO3)3 溶液 0． 3 ml，摇匀，放置 6 min，4%
NaOH溶液 4 ml，加 60%乙醇至刻度，摇匀，放置 15 min。利
用紫外可见分光光度计在 200 ～ 600 nm波长下扫描，确定最
佳测定波长。
1． 2． 5 线性关系的考察。按照《中华人民共和国药典》［6］的
方法制作校准曲线。分别吸取芦丁标准溶液 0、1． 0、2． 0、
3. 0、4． 0和5． 0 ml，于10 ml容量瓶中，按“1． 2． 4”节的试验方
法进行显色。以试剂空白为参比，于波长 406 nm 处测定吸
光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制校准曲线。
1． 2． 6 样品含量测定。精密吸取样品溶液 2. 0 ml 于 10 ml
容量瓶中，按“1． 2． 4”节的试验方法进行显色，在 406 nm 下
测定吸光度，代入回归方程，计算样品中总黄酮的含量。
1． 2． 7 精密度试验。分别准确称取 5 份角果藜样品，每个
样品平均测定 5次，取其平均值。
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2011，39(29):17865 － 17866 责任编辑 朱琼琼 责任校对 况玲玲
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2011.29.005
1． 2． 8 加样回收率试验。分别吸取样品溶液 0． 5、1． 0 和
1. 5 ml于 10 ml容量瓶中，在每份样品溶液中加入 1 ml芦丁
标准溶液，按“1． 2． 4”节的试验方法显色后测其吸光度，并计
算回收率。
2 结果与分析
2． 1 黄酮类化合物的定性鉴定 黄酮类化合物分子中含有
酚羟基和 γ-吡喃酮环，能与许多试剂发生显色反应，对样品
溶液分别进行荧光试验、盐酸 －镁粉反应、铝盐显色反应、碱
性试剂显色反应，观察到的结果分别为黄绿色荧光、橙色溶
液、斑点显黄色且有鲜黄色荧光、斑点显深黄色且有黄色
荧光。
由显色反应结果可知，样品溶液的显色反应都呈正反
应，说明角果藜中含有黄酮类化合物。同时由图 1 可知，样
品溶液在 230 nm、268 nm 和 367 nm处都有黄酮类化合物的
特征吸收峰，进一步确认角果藜中含有黄酮类化合物。
图 1 样品溶液的紫外吸收光谱
Fig． 1 Absorption spectrum of the samples
2． 2 最佳测定波长的选择 由图 2 可知，样品溶液在 406
nm波长处有最大吸收，芦丁标准品在此处也有吸收，空白无
吸收，因此选择 406 nm作为测定波长。
2． 3 线性关系的考察结果 按“1． 2． 5”节的试验方法，绘制
标准曲线如图 3所示，得到线性回归方程 y =11． 867x +0． 019
(r =0． 999 1) ，线性浓度范围为 0． 019 ～0． 102 mg /ml。
图 2 标准溶液和样品溶液显色后的紫外吸收光谱
Fig． 2 Absorption spectrum of rutin control substance and sam-
ple
图 3 芦丁的标准曲线
Fig． 3 The Standard curve of rutin
2． 4 样品含量测定结果 在 406 nm下测定样品吸光度，代
入回归方程，计算的样品中总黄酮的含量为 10． 12 mg /g。
2． 5 精密度试验结果 按“1． 2． 7”节的试验方法得相对标
准偏差为 0． 226%，表明该方法精密度很好。
2． 6 加样回收率试验结果 按“1． 2． 8”节的试验方法测吸
光度，并计算回收率，结果如表 2。以芦丁为对照品测总黄酮
含量时，计算平均回收率为 99． 36%，相对标准偏差为
0. 65%，表明该方法测定结果稳定可靠。
表 1 加样回收率试验结果
Table 1 The average recovery experiment result
样品溶液量
Sample volume∥ml
试样量
Content in sample∥mg
加标量
Added amount∥mg
吸光度
Absorbance
测得量
Measured quantity∥mg
回收率
Recovery rate∥%
平均回收率
Average recovery rate∥%
RSD
%
0． 5 0． 126 5 0． 202 0． 406 0． 327 0 99． 26
1． 0 0． 253 0 0． 202 0． 557 0． 454 3 99． 65 99． 36 0． 65
1． 5 0． 379 5 0． 202 0． 706 0． 579 8 99． 16
3 结论
采用加热回流法从角果藜中提取黄酮类化合物，利用
NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 显色法测定角果藜中总黄酮的含
量，样品中总黄酮的含量为 10． 12 mg /g，该方法的精密度和
准确度均较高，相对标准偏差为 0． 226%，回收率为 99. 36%。
参考文献
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66871 安徽农业科学 2011 年