全 文 ：［8］万定荣，陈科力，王兵娥 . 10 种卷柏属植物茎的解剖学
研究及其分类鉴定意义［J］. 武汉植物学研究，2008，26
(4) :343-349.
［9］刘葭，陈科力，万定荣 . 11 种卷柏属药用植物叶缘细胞
特征及其在分类学中的意义［J］. 中国药师，2009，12
(10) :1335-1338.
收稿日期:2013-03-25
基金项目:江西省教育厅资助项目(12750) ;江西科技师范大学校级科研项目(Ky2012zy17)
作者简介:周斌(1970-) ，男，博士，副教授，主要从事中药质量研究;Tel:15870664871，E-mail:tju_zhoubin@ 163. com。
中药山蜡梅叶质量标准研究
周 斌，李梦杰，王 平，程 丹，李 洁，崔小弟
(江西科技师范大学药学院，江西 南昌 330013)
摘要 目的:建立山蜡梅叶的质量标准。方法:采用二次展开薄层色谱法同时鉴别桉油精、β-石竹烯、芳樟醇、
东莨菪内酯、滨蒿内酯，显色剂为 1%香草醛硫酸溶液，烘烤温度为 110℃;采用 HPLC法同时测定东莨菪内酯、异嗪
皮啶、滨蒿内酯、芦丁的含量，使用依利特 Hypersil ODS2(250 mm × 4. 6 mm，5 μm)色谱柱，流动相为乙腈-水，梯度
洗脱，流速 1. 0 mL / min，检测波长 344 nm，柱温为 40 ℃。结果:TLC 色谱中 5 个化合物的斑点清晰，特征明显。
HPLC法中东莨菪内酯在 5. 665 ～ 56. 65 μg / mL 浓度范围内线性关系良好，r = 0. 9999，平均回收率为 97. 06%，
ＲSD为 1. 27%(n = 6) ;异嗪皮啶在 2. 4312 ～ 24. 312 μg / mL 范围线性关系良好，r = 0. 9999，平均回收率为
102. 86%，ＲSD为 0. 93%(n = 6) ;滨蒿内酯在 2. 444 ～ 24. 44 μg / mL 范围线性良好，r = 0. 9999，平均回收率为
102. 18%，ＲSD为 1. 81% (n = 6) ;芦丁在 9. 012 ～ 90. 12 μg / mL 范围线性良好，r = 0. 9992，平均回收率为
104. 44%，ＲSD为 4. 2%(n = 6)。结论:该方法操作简便，结果准确，重复性好，可用来控制山蜡梅叶的质量。
关键词 山蜡梅;薄层色谱法;高效液相色谱法;东莨菪内酯;滨蒿内酯;芦丁
中图分类号:Ｒ282. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2013)09-1434-03
Study on Quality Standard of Chimonanthus nitens Leaf
ZHOU Bin，LI Meng-jie，WANG Ping，CHENG Dan，LI Jie，CUI Xiao-di
(School of Pharmacy，Jiangxi Science and Technology Normal University，Nanchang 330013，China)
Abstract Objective:To set up the quality standard of Chimonanthus nitens leaf. Methods:Five compounds were identified by
double-development thin layer chromatography，the plate was colorized with 1% vanillin-H2SO4 solution and warmed up in 110 ℃;The
content of four compounds was determined by HPLC，the chromatography separation was performed on the Elite hypersil ODS2(250 mm
×4. 6 mm，5 μm)column with gradient elution. The mixture of acetonitrile and water as the mobile phase at a flow rate of 1. 0 mL /min
was used，the detection wavelength was 344 nm and the column temperature was set at 40 ℃ . Ｒesults:The TLC identification was
highly specific and spots were clear. In HPLC method，the calibration curve was linear in the range of 5. 665 ～ 56. 65 μg / mL for sco-
poletin (r = 0. 9999) ，the average recovery was 97. 06% and ＲSD was 1. 27%;The calibration curve was linear in the range of 2. 4312
～ 24. 312 μg /mL for isofraxidin (r = 0. 9999) ，the average recovery was 102. 86% and ＲSD% was 0. 93%;The calibration curve
presented a linear range from 2. 444 ～ 24. 44 μg / mL for scoparone (r = 0. 9999) ，the average recovery was 102. 18% and ＲSD was
1. 81% . The standard curve presented a linear range from 9. 012 ～ 90. 12 μg /mL for rutin (r = 0. 9992) ，the average recovery was
104. 44% and ＲSD was 4. 2% . Conclusion:These methods are reproducible，sensitive and simple and can be used to control the quali-
ty of Chimonanthus nitens leaf.
Key words Chimonanthus nitens Oliv.;TLC;HPLC;Scopoletin;Scoparone;Ｒutin
山蜡梅 Chimonanthus nitens Oliv. 为我国特有的
蜡梅科蜡梅属植物，药用部位为其干燥叶，是江西道
地药材。主要分布于江西德兴、婺源和安徽徽州一
带山区，当地民间习惯用来泡茶治疗感冒。药理研
究表明，山蜡梅叶具有清凉排毒、防治感冒、防暑解
暑等作用〔1〕，其化学成分主要有挥发油、生物碱、黄
酮、香豆素等〔2，3〕。目前对山蜡梅及其制剂的质量
控制研究报道很少〔4〕，为了更好地控制山蜡梅药材
及其制剂的质量，本文首次采用二次展开薄层色谱
法定性鉴别 3 个萜类化合物和 2 个香豆素类化合
物，采用 HPLC法同时定量测定 4 种化合物的含量，
包括 3 个香豆素类和 1 个黄酮类化合物，为进一步
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DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2013.09.022
研究其药效物质基础提供参考。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 G60 高效薄层板(德国 Merck 公司) ，
AS30 薄层自动点样仪(德国 Desaga 公司) ，CD60 薄
层扫描仪(德国 Desaga公司) ，薄层显色加热器及电
动喷雾器(武汉药科技术有限公司) ，Allegra X-15Ｒ
冷冻 离 心 机 (美 国 Beckman 公 司) ，BＲAN-
SON8510E-DTH超声仪(美国 BＲANSON 公司) ，纯
水系统(美国 Millipore 公司) ，Agilent 1100 高效液
相色谱仪，在线脱气机(G-1332A) ，高压二元泵(G-
1312A) ，二极管阵列检测器。
1. 2 试药 芳樟醇对照品(批号:ALＲ-018N)购自
Accustandard USA公司，桉油精(批号:A12269)购自
Alfa Aesar公司，β-石竹烯(批号:C0796)购自 TCI公
司，东莨菪内酯(批号:20110801)和异嗪皮啶(批
号:20111024)对照品购自上海源叶生物科技公司，
滨蒿内酯(批号:11511-201102)和芦丁(批号:
100080-200707)对照品购自中国食品药品检定研究
院。山蜡梅叶采自江西婺源地区，经江西中医药大
学药学院邓可众副教授鉴定为山蜡梅 Chimonanthus
nitens Oliv. 的叶。乙腈和甲醇为色谱纯，氯仿、甲
酸、石油醚(30 ～ 60℃)、乙酸乙酯等其他试剂均为
分析纯，水为超纯水。
2 薄层色谱鉴别
2. 1 混合对照品溶液的制备 分别称取芳樟醇、
桉油精、β-石竹烯、东莨菪内酯和滨蒿内酯对照品适
量，置 2 mL小瓶中，用甲醇溶解，即得混合对照品溶
液。
2. 2 供试品溶液的制备 精密称取山蜡梅叶干燥
样品粉末(过 40 目筛)500 mg，置试管中，加入 5 mL
甲醇，密封，混匀约 30 s，于室温(25 ± 2)℃下超声
(881 W，43 kHz)60 min，离心 10 min(3 500 rpm) ，
取上清液置洁净干燥试管中密封备用。
2. 3 薄层色谱条件 薄层点样条带宽 7 mm，间隔
8 mm，离底端 10 mm，第 1 次以氯仿-甲醇(9 ∶ 1)为
展开剂，展距为 50 mm，取出晾干，第 2 次以石油醚-
乙酸乙酯(10∶ 1)为展开剂，展距为 100 mm，取出晾
干，于暗箱中在 365 nm 下拍照，然后用 1%香草醛
硫酸溶液显色，烘烤温度为 110 ℃，供试品色谱中在
与对照品相应的位置显相同颜色的斑点。色谱图见
图 1 所示。
3 含量测定
3. 1 色谱条件 色谱柱为依利特 Hypersil ODS2
(250 mm ×4. 6 mm，5 μm) ，流动相为乙腈(A)-水
图 1 对照品和山腊梅叶药材一次展开
(A)和二次展开(B)的 TLC图
S. 混合对照品 C1 ～ C3. 3 批样品 1. 东莨菪内酯 2. 滨
蒿内酯 3. 芳樟醇 4. β-石竹烯 5. 桉油精
注:左图为 365nm荧光下，右图为显色后
(B) ，梯度洗脱(A:0 ～ 26 min，12%;26 ～ 28 min，12
% ～13. 5%;28 ～ 40 min，13. 5%;40 ～ 45 min，13. 5
% ～ 12%;45 ～ 60 min，12%) ;柱温:40 ℃;检测波
长:344 nm;流速:1. 0 mL / min。对照品和样品的色
谱图见图 2。
图 2 对照品(A)和山腊梅叶药材(B)HPLC图
1. 东莨菪内酯 2. 异嗪皮啶 3. 芦丁 4. 滨蒿内酯
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3. 2 溶液的制备
3. 2. 1 对照品溶液的制备:精密称取东莨菪内酯、
异嗪皮啶、滨蒿内酯和芦丁各 11. 33、10. 13、12. 22、
15. 02 mg分别置 10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释
至刻度，摇匀，作为对照品储备液。依次量取以上储
备液 2. 5、1. 2、1、3 mL置同一 50 mL量瓶中，用甲醇
溶解并稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。
3. 2. 2 供试品溶液的制备:取山蜡梅叶样品粉末
(过 40 目筛)约 1. 0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，
精密加入甲醇 25. 00 mL，称定重量，超声 (100 W，
45 kHz)提取 1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足失
重，摇匀，0. 45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液作为供
试品溶液。
3. 3 线性关系考察 精密量取混合对照品溶液
1. 0、2. 0、4. 0、6. 0、10. 0 mL 分别置 10 mL 量瓶中，
用甲醇溶解，定容至刻度，摇匀，作为标准系列溶液。
取上述溶液各 10 μL 注入高效液相色谱仪，以对照
品浓度 C(μg / mL)为横坐标，色谱峰面积(A)为纵
坐标，求得回归方程，东莨菪内酯、异嗪皮啶、滨蒿内
酯和芦丁分别:A = 21. 111 C － 5. 20(r = 0. 9999) ，A
= 16. 375 C － 0. 4160(r = 0. 9999) ，A = 20. 218 C －
0. 3280(r = 0. 9999) ，A = 3. 2261 C － 14. 052(r =
0. 9992) ，表明东莨菪内酯、异嗪皮啶、滨蒿内酯和
芦丁的进样浓度分别在 5. 665 ～ 56. 65、2. 4312 ～
24. 312、2. 444 ～ 24. 44、9. 012 ～ 90. 12 μg / mL 范
围内线性关系良好。
3. 4 精密度试验 精密量取混合对照品溶液 10
μL，注入高效液相色谱仪，连续进样 6 次，东莨菪内
酯、异嗪皮啶、滨蒿内酯和芦丁的峰面积 ＲSD 分别
为 0. 26%、0. 64%、0. 33%和 1. 48%，结果表明仪器
精密度良好。
3. 5 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于 0、
2、4、6、8、10 和 24 h 时进样 10 μL，东莨菪内酯、异
嗪皮啶、滨蒿内酯和芦丁的峰面积 ＲSD 分别为
2. 60%、1. 88%、1. 65%和 2. 66%，结果表明，样品
溶液在 24 h内稳定性良好。
3. 6 重复性试验 称取同一山蜡梅叶样品粉末 6
份，按“3. 2. 2”项下制备供试品溶液，测定 4 种待测
成分的含量，东莨菪内酯、异嗪皮啶、滨蒿内酯和芦
丁的 ＲSD分别为 0. 86%、0. 88%、2. 21%和 1. 53%，
表明本方法重复性良好。
3. 7 加样回收率试验 称取已知含量的山蜡梅叶
样品粉末 6 份，每份约 0. 5 g，精密称定，分别加入东
莨菪内酯、异嗪皮啶、滨蒿内酯和芦丁对照品适量，
按“3. 2. 2”项下方法制备供试品溶液，进样 10 μL
进行分析。东莨菪内酯、异嗪皮啶、滨蒿内酯和芦丁
的 平 均 回 收 率 分 别 为 97. 06%、102. 86%、
102. 18%、104. 44%，ＲSD 分别为 1. 27%、0. 93%、
1. 81%、4. 2%。
3. 8 样品测定 精密称取不同批次山蜡梅叶样品
粉末适量，按“3. 2. 2”项下方法制备供试品溶液，进
样 10 μL进行分析，东莨菪内酯、异嗪皮啶、滨蒿内
酯和芦丁含量见表 1。
表 1 3 批山蜡梅叶药材中东莨菪内酯、异嗪皮啶、
滨蒿内酯和芦丁的含量(μg /g，n =3)
样品编号 东莨菪内酯 异嗪皮啶 滨蒿内酯 芦丁
C1 264. 83 162. 95 88. 49 849. 88
C2 265. 12 158. 23 85. 32 862. 83
C3 261. 08 156. 97 91. 45 840. 72
4 讨论
在进行薄层色谱分离优化时，分别考察了乙酸
乙酯-甲酸-水(8 ∶ 1 ∶ 1、7 ∶ 1. 5 ∶ 1. 5)、乙酸乙酯-甲醇
(7∶ 3、8∶ 2)为首次展开剂，展开分析山蜡梅叶中大
极性的化合物，再用石油醚-乙酸乙酯(9∶ 1、10∶ 1、15
∶ 1)为二次展开剂，来展开分离萜类化合物。经比
较各次不同展开剂及斑点分离情况，最终确定氯仿-
甲醇(9∶ 1)为首次展开剂，石油醚-乙酸乙酯(10∶ 1)
为二次展开剂，药材中不同极性的物质在同一薄层
板上能获得很好的分离。
在进行色谱方法优化时，曾分别比较了乙腈-
水、甲醇-水、乙腈-0. 1 %冰醋酸、甲醇-0. 1 %冰醋酸
等，结果以乙腈-水系统梯度洗脱为最佳，样品中 4
种待测成分的分离效果较好，且与其他物质可达到
基线分离。
萜类是挥发油的主要有效成分，黄酮和香豆素
都是天然植物中具有明确药理作用的化合物，对其
进行定性和定量分析具有重要意义。本实验建立的
方法可同时对萜类物质、香豆素、黄酮进行定性定量
分析，操作简单，可用于控制山蜡梅叶药材质量。
参 考 文 献
［1］张尊敬，刘忠达 . 山腊梅的成分及药理作用研究近况
［J］. 浙江中医杂志，2009，44(11) :849-850.
［2］徐年军，白海波，严小军，等 . 山腊梅中挥发油成分分析
［J］. 分析测试学报，2006，25(1) :90-93.
［3］舒任庚，李莎莎，胡浩武，等 . 山蜡梅化学成分研究
［J］.中国药学杂志，2010，45(15) :1134-1135.
［4］李诒光，卢建中，陈杰，等 . 江西道地药材山蜡梅叶质量
标准的研究［J］. 中草药，2010，41(5) :836-838.
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