全 文 ：·生物技术· 北方园艺２０１５（１５）：１０４～１０６
第一作者简介：黎海利（１９８１－），女，广西宜州人，博士，讲师，研究
方向为观赏园艺。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｈａｉｌｉ２４２５＠１２６．ｃｏｍ．
责任作者：刘锴栋（１９８２－），男，博士研究生，副研究员，研究方向为
园艺学。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｕｋａｉｄｏｎｇ２００１＠１２６．ｃｏｍ．
基金项目：国家星火计划资助项目（２０１３ＧＡ７８００９３）；湛江市热带
特色资源植物技术开发重点实验室资助项目（２０１４Ａ０６００８）；岭南
师范学院博士启动资助项目（ＺＬ０９０１１）。
收稿日期：２０１５－０１－２２
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１５１５０２７
厚藤的组织培养及植株再生
黎 海 利，谭 飞 理，刘 锴 栋，成 夏 岚
（岭南师范学院 生命科学与技术学院，广东 湛江５２４０４８）
　　摘　要：以厚藤不同外植体为试材，ＭＳ为基本培养基进行组织培养，研究６－ＢＡ和ＮＡＡ不
同浓度组合对不同外植体愈伤组织诱导、不定芽分化及增殖的影响，以筛选出适合厚藤组织培养
的最适外植体和培养基。结果表明：厚藤最佳的愈伤组织诱导培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ　０．７５ｍｇ／Ｌ＋
ＮＡＡ　０．２５ｍｇ／Ｌ，最佳外植体为叶片；不定芽诱导培养基为 ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１～
０．５ｍｇ／Ｌ；在ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．３ｍｇ／Ｌ培养基中增殖倍数最高。在１／２ＭＳ培养基
上培养，生根率达８７．５％。
关键词：厚藤；组织培养；植株再生
中图分类号：Ｓ　６８２．３５　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１５）１５－０１０４－０３
　　厚藤 （Ｉｐｏｍｏｅａ　ｐｅｓ－ｃａｐｒａｅ）属旋花科甘薯属多年生
草本，又名马鞍藤、海滩牵牛等，集药用、观赏于一身，广
布于东南沿海的热带及亚热带海滩上。厚藤叶形奇特，
顶端微缺或２裂，裂片圆，形如马鞍；花大，花冠漏斗状，
紫色或紫红色，具有极强的观赏特性，特别适合做地被
植物。目前国内外对厚藤的研究不多［１－７］。由于种苗不
足，国内沿海一带园林中厚藤仅在小面积应用，且主要来
源于野生种。该研究用不同激素组合对厚藤进行研究，建
立厚藤的组织培养体系，对扩大厚藤的种苗生产，推广厚
藤在热带滨海城市的应用，增加城市绿化物种多样性，打
造具有热带亚热带特色的地被景观具有重要意义。
１　材料与方法
１．１　试验材料
厚藤于２０１１年７月引种自广东湛江市郊东海岛
（北纬２０°５４′，东经１１０°０９′），栽植于岭南师范学院生
物园。
１．２　试验方法
１．２．１　试验材料及表面灭菌　外植体采集时间为晴天
中午，取生长期内健康、无病虫害的植株。外植体分为
顶芽、带芽茎段、叶片，长度约２～３ｃｍ，叶片切成１ｃｍ２
的小块。先用洗洁精水漂洗１０ｍｉｎ左右，再用自来水冲
洗３０ｍｉｎ，后浸泡于无菌水中待用。外植体在超净工作
台上用７０％ 乙醇处理１５ｓ，然后用无菌水清洗４～５次，
用升汞浸泡６ｍｉｎ，最后用无菌水冲洗６次。处理后的
外植体剪掉两头茎段，避免氯化汞渗入而影响营养吸收。
１．２．２　愈伤组织诱导培养基　将外植体接到添加了不
同植物激素的 ＭＳ诱导培养基上。诱导培养基的配方
分别为ＭＳ＋０．５０ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．１０ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ（Ｍ１）；
ＭＳ＋０．７５ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．２５ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ（Ｍ２）；ＭＳ＋
１．００ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．５０ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ（Ｍ３），培养２０ｄ后
统计出愈率。
１．２．３　丛生芽诱导培养　将生长状况良好的愈伤组织
切成１ｃｍ的小块，接到丛生芽诱导培养基中。厚藤不
定芽诱导培养基以ＭＳ为基本培养基，添加不同浓度的
６－ＢＡ、ＮＡＡ进行正交实验设计，每个因素设计不同的浓
度梯度，其中６－ＢＡ浓度为０．５、１．０、２．０ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ浓
度为０．１、０．５、１．０、２．０ｍｇ／Ｌ。培养约３０ｄ后统计丛生
芽分化率及生长情况。
１．２．４　增殖培养基的筛选　厚藤增殖培养以 ＭＳ为基
本培养基，添加不同浓度的６－ＢＡ、ＮＡＡ进行正交实验设
计，每个因素设计３个浓度梯度，其中６－ＢＡ浓度为０．５、
１．０、２．０ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ浓度为０．１、０．３、０．５ｍｇ／Ｌ。该试
验以不添加任何激素的ＭＳ培养基为对照培养基，增殖
培养约３０ｄ后，每个处理随机选取５瓶统计增殖倍数及
生长情况。
１．２．５　生根与移栽　生根培养基为１／２ＭＳ培养基，３０ｄ
后统计生根率。练苗移栽后统计成活率。
１．２．６　培养条件　培养条件均为光照强度２　０００ｌｘ，光
照时间１４～１６ｈ，培养温度为２５℃。
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北方园艺２０１５（１５）：１０４～１０６ ·生物技术·
１．３　数据分析
愈伤诱导率（％）＝产生愈伤的外植体数／接种外
植体数×１００％；分化率（％）＝分化芽的愈伤组织数目／
接种愈伤组织数×１００％；增殖倍数＝诱导出的丛生芽
中长度大于０．５ｃｍ的芽数／分化的总芽数。
试验数据用ＳＰＳＳ　１３．０及Ｅｘｃｅｌ进行统计分析。
２　结果与分析
２．１　不同外植体的愈伤组织诱导
　　厚藤在诱导培养基中，８ｄ左右开始产生愈伤组织，
颜色为黄绿色。由表１可知，不同外植体均可诱导产生
愈伤组织，但叶片的平均诱导率最高，愈伤诱导率达
９０．７％，其次为顶芽，愈伤诱导率为５０．０％，培养基则以
ＭＳ＋０．７５ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．２５ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ（Ｍ２）诱导率最
高，宜作为厚藤的最佳诱导培养基。
２．２　厚藤丛生芽诱导培养
由表２可知，当ＮＡＡ浓度≥１．０时，不能使愈伤组织
诱导产生丛生芽。当６－ＢＡ浓度为１．０ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ浓度
为０．１ｍｇ／Ｌ时，厚藤出芽率最高，达８５．０％，其次为６－ＢＡ
１．０ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ　０．５ｍｇ／Ｌ的组合，丛生芽出芽率为７８．２％，
且生长正常，叶色为绿色。过低浓度的６－ＢＡ出芽率较
低，或不能诱导产生丛生芽，而过高浓度的６－ＢＡ总体上
对诱导丛生芽也是不利的，结果是不能诱导产生丛生芽
或者丛生芽生长不良，因此，厚藤较适合的丛生芽诱导
培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１～０．５ｍｇ／Ｌ。
　　表１ 厚藤不同外植体愈伤组织诱导率统计
　　Ｔａｂｌｅ　１ Ｔｈｅ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｏｆ　Ｉｐｏｍｏｅａ　ｐｅｓ－ｃａｐｒａｅ
培养基
Ｍｅｄｉａ
顶芽Ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｂｕｄ 茎段Ｓｔｅｍ 叶片Ｌｅａｆ
接种数
Ｉｎｕｃｕｌａｔｉｏｎ　ｎｕｍｂｅｒ
愈伤诱导率
Ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％
接种数
Ｉｎｕｃｕｌａｔｉｏｎ　ｎｕｍｂｅｒ
愈伤诱导率
Ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％
接种数
Ｉｎｕｃｕｌａｔｉｏｎ　ｎｕｍｂｅｒ
愈伤诱导率
Ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％
Ｍ１　 ３６　 ５０．０　 ３６　 ３３．０　 ３６　 ８３．３
Ｍ２　 ３６　 ３３．３　 ３６　 １７．０　 ３６　 １００．０
Ｍ３　 ３６　 ６６．７　 ３６　 ５０．０　 ３６　 ８８．８
均值Ａｖｅｒａｇｅ　 ５０．０　 ３３．０　 ９０．７
　　表２　不同植物激素组合对厚藤丛生芽诱导情况统计
　　Ｔａｂｌｅ　２　Ｂｕｄ　ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　Ｉｐｏｍｏｅａ　ｐｅｓ－ｃａｐｒａｅ　ｕｎｄｅｒ
ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　６－ＢＡ，ＮＡＡ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
培养基
编号
Ｍｅｄｉａ
生长调节剂Ｇｒｏｗｔｈ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒ
６－ＢＡ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
ＮＡＡ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
接种数
Ｉｎｕｃｕｌａｔｉｏｎ
ｎｕｍｂｅｒ
出芽率
Ｂｕｄ　ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ／％
生长情况
Ｇｒｏｗｔｈ
１　 ０．５　 ０．１　 ３６　 ３．０ 瘦弱
２　 ０．５　 ０．５　 ３６　 ５．５ 生长细弱
３　 ０．５　 １．０　 ３６　 ０．０
４　 ０．５　 ２．０　 ３６　 ０．０
５　 １．０　 ０．１　 ３６　 ８５．０ 生长正常，叶绿色
６　 １．０　 ０．５　 ３６　 ７８．２ 生长健壮，叶绿色
７　 １．０　 １．０　 ３６　 ０．０
８　 １．０　 ２．０　 ３６　 ０．０
９　 ２．０　 ０．１　 ３６　 ３２．５ 生长正常
１０　 ２．０　 ０．５　 ３６　 ６．０ 生长细弱
１１　 ２．０　 １．０　 ３６　 ０．０
１２　 ２．０　 ２．０　 ３６　 ０．０
平均Ａｖｅｒａｇｅ　 １７．５
２．３　厚藤的增殖培养
对厚藤诱导出来的丛生芽进行增殖培养，表３表
明，不同培养基配方对厚藤的增殖倍数产生极显著的影
响，６－ＢＡ浓度为１．０ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ浓度０．３ｍｇ／Ｌ组合时
增殖倍数最高，达２２．２倍，显著高于其它激素组合的增
殖倍数。在选择培养基的浓度时，并不是浓度越高越
好，当６－ＢＡ浓度高于１．０ｍｇ／Ｌ时，随着ＮＡＡ浓度的升
高，厚藤的增殖倍数呈下降的趋势。反之，当６－ＢＡ浓度
低于１．０ｍｇ／Ｌ时，随着ＮＡＡ浓度的下降，增殖倍数呈
下降的趋势。从不定芽生长情况看，６－ＢＡ浓度为
１．０ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ浓度０．３ｍｇ／Ｌ依然为最佳组合，在此
培养基中进行增殖培养后，不定芽生长较快，芽体均匀，
芽体壮实；其次为６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ组
合，不定芽生长较快，芽体均匀，在６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ
０．３ｍｇ／Ｌ的组合中，增值倍数虽与前者无显著差异，但
　　　　　　表３ 不同植物激素组合对厚藤增殖培养的影响
　　Ｔａｂｌｅ　３ Ｓｈｏｏｔ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　Ｉｐｏｍｏｅａ　ｐｅｓ－ｃａｐｒａｅ　ｕｎｄｅｒ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　６－ＢＡ，ＮＡＡ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
培养基编号
Ｍｅｄｉａ
生长调节剂Ｇｒｏｗｔｈ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒ
６－ＢＡ／（ｍｇ·Ｌ－１） ＮＡＡ／（ｍｇ·Ｌ－１）
接种数
Ｉｎｕｃｕｌａｔｉｏｎ　ｎｕｍｂｅｒ
增殖倍数
Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
不定芽生长情况
Ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｂｕｄｓ
１　 ０．５　 ０．１　 ３６　 ８．２ＤＥｄｅ 生长慢，壮实，粗细不均
２　 ０．５　 ０．３　 ３６　 １３．０Ｂｂｃ 生长较慢，较壮实
３　 ０．５　 ０．５　 ３６　 １２．２ＢＣｂｃ 生长较慢，壮实
４　 １．０　 ０．１　 ３６　 １４．０Ｂｂ 生长较快，芽体均匀
５　 １．０　 ０．３　 ３６　 ２２．２Ａａ 生长较快，芽体均匀，较壮实
６　 １．０　 ０．５　 ３６　 １１．８ＢＣＤｃ 生长较快，芽体较壮实
７　 ２．０　 ０．１　 ３６　 ９．６ＣＤＥｄ 生长较快，芽体瘦弱
８　 ２．０　 ０．３　 ３６　 ９．０ＤＥｄｅ 生长较慢，较壮实
９　 ２．０　 ０．５　 ３６　 ７．０Ｅｅ 生长慢，植株粗细不均匀
平均Ａｖｅｒａｇｅ　 １２．５
　　注：表中不同大写、小写字母分别表示经ＬＳＤ多重比较后不同处理在０．０１、０．０５水平上差异显著。
５０１
·生物技术· 北方园艺２０１５（１５）：１０４～１０６
不定芽生长速度较慢，因此，厚藤最佳增殖培养基为
ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．３ｍｇ／Ｌ。
２．４　生根与移栽
不定芽接入生根培养基约１周后开始生根，１０～１２ｄ
不定根大量发生，３０ｄ后统计生根情况。结果表明，厚
藤生根率达８７．５％。生根植株练苗后栽于有机质丰富
的园土中，成活率达１００％。
３　讨论
在组织培养过程中，加入一定浓度的６－ＢＡ和
ＮＡＡ可促进外植体形成愈伤组织、形成不定芽、促进
不定芽增殖［８－１１］，但生长素质量浓度过低或过高不利
于外植体的脱分化和再分化。有研究表明，低浓度时
６－ＢＡ和ＮＡＡ有利于促进芽和促进愈伤组织的形成，
而高浓度时利于愈伤组织形成，对茎尖生长有抑制作
用，成苗率先增加后降低［１２－１３］。该研究表明，当ＮＡＡ
浓度≥１．０时，愈伤组织不能诱导产生丛生芽，当６－ＢＡ
浓度为１．０ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ浓度为０．１ｍｇ／Ｌ时，厚藤诱导
出芽率最高。在不定芽增殖过程也出现了同样的结果，
增殖培养基以 ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．３ｍｇ／Ｌ
为宜。
不定芽增殖过程中单一使用细胞分裂素，不定芽增
殖倍数普遍较低［１４］，在与一定浓度的生长素配合使用，
一定程度上可以增加不定芽的增殖倍数，厚藤的不定芽
增殖培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．３ｍｇ／Ｌ。
说明厚藤不定芽增殖中６－ＢＡ与ＮＡＡ存在交互作用，这
与同属植物甘薯的研究一致［１５］。
该研究成功地建立了厚藤的组织培养及植株再生
技术体系，可为扩大厚藤的繁殖规模，将厚藤这一优良
的地被植物应用于滨海地区，营造具有热带风情的园林
景观提供技术支持，另外，该研究也对厚藤种质资源的
保护和离体保存具有重要意义。
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ＬＩ　Ｈａｉｌｉ，ＴＡＮ　Ｆｅｉｌｉ，ＬＩＵ　Ｋａｉｄｏｎｇ，ＣＨＥＮＧ　Ｘｉａｌａｎ
（Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌｉｎｇｎａｎ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈａｎｊｉａｎｇ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　５２４０４８）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｏｆ　Ｉｐｏｍｏｅａ　ｐｅｓ－ｃａｐｒａｅ　ａｓ　ｍａｔｅｒｉａｌ，ｕｓｉｎｇ　ＭＳ　ｍｅｄｉａ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ
６－ＢＡ，ＮＡＡ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　６－ＢＡ，ＮＡＡ　ｏｎ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ，ｂｕｄ　ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ，ｓｈｏｏｔ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｔｏ
ｏｐｔｉｍｉｚｅ　ｔｈｅ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　Ｉｐｏｍｏｅａ　ｐｅｓ－ｃａｐｒａｅ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｉｎｉｔｉａｌ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
ｗａｓ　ＭＳ＋６－ＢＡ　０．７５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．２５ｍｇ／Ｌ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｌｅａｖｅｓ．Ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ
ｂｕｄ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１－０．５ｍｇ／Ｌ．Ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉａ　ｆｏｒ　ｓｈｏｏｔ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
ｗａｓ　ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．３ｍｇ／Ｌ．Ｔｈｅ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　８７．５％ｉｎ　１／２ＭＳ　ｍｅｄｉｕｍ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｉｐｏｍｏｅａ　ｐｅｓ－ｃａｐｒａｅ；ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ；ｐｌａｎｔｌｅｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
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