全 文 ：第6 卷 第 3期 辽宁师专学报 V O : 6 N o . 3
20 0 4 年 9 月 J o u n ra 一o f L一aon i理 T ea c h e“ CO I一 e公 e
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20 0 4一一竺三竺巴竺竺竺竺些里竺竺竺三【实验技术研究】四季樱草叶片原生质体植株再生的研究件凤芹 ` , 韩阳 2l( . 抚顺师专 , 辽宁 抚顺 n 30 06 ; .2 辽 宁大学 , 辽宁 沈阳 n o 36 }
摘 要 : 以四季樱草叶片为材料进行原生质体培养 , 使其形成再生植株 . 结果发现 , 不 同的植物生长调节
剂对原 生质体培养和植株再生有很大的关系 , 其中 B S 培养墓附加 KOT . 5 ( m以L ) + 2 . 4 斗印 + 甘耳醉 O , 6 5 有
利于细胞 旺盛分裂 , M S 培养墓附加 Z T 3 + 6 B A O . 5 有利于芽的分 化 .
关健词 : 四季樱草 ; 原生质体 ; 再 生
中圈分类号 : 9Q 4 9 . 7 7 3 . 2 文献标识码 : A 文章编号 : 1 00 8 一 56 88 (2 00 4 ) 0 3 一 0 1 03 一 0 2
四季樱草 (尸 ir m ul o o bco o i ca ) 是属于报春科报春花属的一种多年生宿根草本植物 , 它具有易栽培 、
生长快 、 花色丰富 、 花姿优美和花期较长等特点 , 既可以做室内小盆栽 , 也可作雄坛花卉美化环境 , 因而
深受人们喜爱 . 有关该植物的组织培养和快速繁殖的研究以及其形态建成过程中纲胞和组织学的观察等方
面已有报道 , 而用四季樱草为材料进行原生质体培养形成再生植株的研究 , 迄今为止 , 国内外未见报道 .
实验与方法
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1 材料 的表面消毒
选取花房中栽培的生长正常 、 无病虫害的四季樱草幼叶 , 用 自来水冲洗后 , 一置 于超净工作台上 , 用
70 % 酒精 、 0 . 1% 升汞溶液进行常规表面消毒后 , 用无菌水冲洗数遍 , 置于无菌培养皿 中沥干 .
L Z 原 生质体的制备
将消毒后的叶片剪成长约 1一 2 。 m 、 宽约 2一 3 c m 的条状 , 置于盛有 0 . 3 % 国产纤维素酶溶液的培养
瓶中 (酶液含 0 . 6 5 m o l / L 甘露醇 、 0 . 1 % e a e l Z · 6 H Z o 、 0 . 0 1 % K氏 P OZ · 2氏。 和葡聚糖酸钾盐 ) , 调整 p H
值至 6 . 5 . 在 25 一 26 ℃黑暗条件下进行酶解 , 6 h 后 , 可形成大量深绿色原生质体 . 然后用 2 60 目的无菌
尼龙网对其过滤 , 用 30 一 50 r/ m in 的转速离心 , 然后用渗透压稳定剂悬浮 , 反复几次 , 最后制成原生质
体悬浮液
1
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3 培养基的 选择 一
将原生质体悬浮液接到三种培养基中 : ( 1) B S 培养基 ; ( 2) H 培养基 ; ( 3) N 6 培养基 . 三种培养基
附加成分相同 ( K T O . 5 m g / L (以下单位相同 ) 十 2 . 4 一 D Z 十 甘露醇 0 . 6 5 ) , p H 值匕. 5 , 使原生质体最终密
度为 l x 1 O5 个 Zc m 3 左右 , 放置于 25 一 27 ℃ 、 每 日光照 10 h 、 光照强度为 2 0 0 、 30 lx 的条件下静止培
养 .
将诱导形成的愈伤组织接种到分化培养基 : ( 1) M s 培养基附加 z T 3 十 6 B0A . 5 + N A A O . ;1 ( 2) M s
培养基附加 K T 3 + N A A O . 1 + IBOA . 1 ; ( 3 ) M S 培养基附加 K T 3 + N A A O . 1 + IB OA . 1 .
生根培养基 : M S 十 N A A 3 .
结果与分析
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1 实验结果
培养 12 一 2 4 h , 发现原生质体较原来变大 , 少数呈椭圆形 . 2 天后均有少数细胞的出芽现象或第一次细胞分裂 , 培养 7 天后细胞 出现第二 、 三次细胞分裂 , 10 天后形成小细胞 团 . 1弓天左右小细胞团进一步
增殖 , 形成 了大细胞团 . 以 1 : 1 的比例加人不含甘露醇的新鲜培养液 , 使渗透压减半 . 再过 10 天形成 肉
眼可见的棕黄色的小愈伤组织 . 当愈伤组织长到直径 1一 2 m m 时 , 转到分化固体培养基上 , 在诱导分化
收稿 日期 : 2 00 4一 03一 20作者简介 : 侈风芹 (1 960 一 ) , 女 (满族 ) , 辽宁抚顺县人 , 实验师 , 主要从事生物教学研究 , 发表论文 10 篇
辽宁师专学报 2 0 0 4年第 3 期
的培养基上 2 0天后分化 出芽 , 再过 30 天左右形成苗 , 当无根苗形成后 , 截取无根苗到生根培养基上进行
生根培养 , 经过 20 多天就可形成大量根系 , 最终形成了再生植株 , 经过常规的炼苗后 , 移栽到 w 沙 : w 土
二 1 : 1 的花盆中能正常生长 .
2
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2 结果分析
原生质体悬浮液的培养在附加成分相同条件下 , 三种培养基 中 B S 基本培养基对 四季樱草叶肉细胞分
裂最有利 , 能促进细胞旺盛分裂 , 可以认为原生质体持续分裂及细胞团的形成与所选的基本培养基有较大
的关系 .
以 B S + 2 4 一 2D 为基本培养基 , 我们也做了三种细胞分裂素 ( 6 B A 、 K T 、 Z T ) 的比较实验 , 结果表
明 , K T 有利于促进四季樱草细胞的分裂 .
愈伤组织 的分化 以 M S 附加 N A AD . 1 、 BI OA . 1 为基本 培养基 , 从 单一细胞 分裂 素 ( Z3T 、 6 BAZ 、
K 3T ) 和复合细胞分裂素 ( Z T 3 十 6 B A O . 5) 的比较实验可以看出两点 : 第一 , 按一定比例配合的复合细胞
分裂素比单一细胞分裂素对四季樱草芽的分化更有利 ; 第二 , Z T 与 6 B A 配合 , 不仅诱导频率高 , 而且形
成大量丛芽 , 起到一定的增效作用 .
参考文献 :
〔1 李世承 . 植物组织培养实验技术 [M 〕. 大连 : 大连理工大学出版社 , 19 90 .
【2] 伶凤芹 . 四季樱草叶片再生株形成过程中细胞组织学观察 〔M 〕 . 辽 宁师专学报 , 2 00 , 2 ( 2 ) : 95 一% .
(贵任编辑 刘 守华 , 于 海 )
(上接 9 4 页 )
截流法的原理是截断或阻滞火灾产生的热量向构件的传输 , 从而使构件在规定的时间内温升不超过其
临界温度 . 其作法是在构件表面设置一层保护材料 . 热量由保护材料传给构件 . 由于所选材料导热系数要
求较小 , 而热容又较大 , 所 以能很好地阻滞热流向构件的传输从而起到保护作用 . 截流法又分为喷涂法 、
包封法 、 屏蔽法和水喷淋法 .
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1 喷涂法
喷涂法是用喷涂机具将防火涂料直接喷涂在构件表面 , 形成保护层 , 在火灾 中依靠防火涂料的吸热
性 、 不燃性及低导热性 , 延缓钢材 的温升 , 保护钢构件 .
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2 包封法
包封法是采用无机防火板 (如石膏板 、 水泥蛀石板 、 岩棉板和硅酸钙板 ) 按预定形状和截面特性粘贴
在钢基材表面上 , 由于无机防火板 自身导热率低 、 隔热性好 、 耐久性强 、 高温时脱去一部分结晶水 , 减缓
了钢材的温升 , 提高了钢结构的耐火极限 .
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3 屏蔽法
屏蔽法是把钢构件包藏在耐火材料组成的墙体或吊顶内 . 主要适用于屋盖系统的保护 .
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4 水喷淋法
水喷淋法是在钢结构顶部设喷淋供水管网 , 火灾时自动启动 (或手动启动 ) 开始喷水 , 在构件表面上
形成一层连续流动的水膜 , 从而起到保护作用 .
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2 疏导法
与截流法不同 , 疏导法允许热流量传到构件上 , 然后设法把热量导走或消耗掉 , 同样可使构件温度不
至升高到临界温度 , 从而起到保护作用 . 该方法是在空心封闭截面中 (主要是柱 ) 充满水 , 火灾时 , 构件
把火场中吸收的热量传给水 , 依靠水的蒸发消耗热量或通过循环将热量导走 , 构件温度便可保持在 10 ℃
左右 .
随着建筑业的不断发展 , 钢结构因其自身独特的优点将得到越来越广泛的应用 , 但是由于钢结构不耐
火 , 极易导热 , 对钢结构的防火保护又是迫在眉捷 , 在钢结构设计与施工中我们应加强对钢结构的防火保
护 , 避免在高温或火灾中发生倒塌 .
(资任编辑 胡 冲 , 王 壳 )