全 文 ：[ 3]新药(西药)临床前研究指导原则汇编(药学 、药理学 、毒
理学).1993.51.
[ 4]黄霞 ,种军 , 王翠华 , 等.输可贴散瘀止痛作用的实验研
究[ J] .中成药 , 1998 , 20(7):34-36.
[ 5] 殷红妹 , 张信岳.肠泻停胶囊抗炎 、镇痛 、抗菌作用的实验
研究[ J] .中国中医药科技 , 2005 , 12(5):285-286.
收稿日期:2006-03-20;修回日期:2006-05-22
(编辑　陶　珠)
文章编号:1001-6910(2006)10-0018-02 ·药学研究·
跌打红药胶囊质量标准的研究
王军喜1 ,马　开2
(1.郑州市第六人民医院 ,河南 郑州 450015;2.河南省中医药研究院中药研究所 ,河南 郑州 450004)
关键词:跌打红药胶囊/薄层鉴别　人参皂苷 Rg1　高效液相
色谱法
中图分类号:R285　　文献标志码:B
　　跌打红药胶囊是由三七 、当归 、白芷 、川芎 、红
花 、土鳖虫六味药组成 ,具有活血止痛 、祛瘀生新的
作用 ,用于治疗跌打损伤 、筋骨瘀血肿痛 、风湿麻木 。
为了有效控制其质量标准 ,本文采用 HPLC 测定三
七中人参皂苷 Rg1 的含量 ,并且对三七 、当归 、白芷
进行薄层鉴别 ,为跌打红药胶囊的质量标准提供了
定性和定量的检测方法 ,建立了该制剂的质量标准 。
1　药物 、试剂与仪器
跌打红药胶囊 ,由新乡佐今明制药股份有限公
司提供;人参皂苷 Rg1 、Rb1对照品 ,由中国药品生物
制品检定所提供 , 批号分别为 0703-200119 、0704-
200012;欧前胡素对照品 ,由中国药品生物制品检定
所提供 , 批号为 0826-9904(供含量测定用);所用试
剂均为分析纯 、色谱纯;水为重蒸馏水 ,自制。高效
液相色谱仪:日本岛津 LC-10AVP;KT-350W型超声
提取器 ,济宁科特超声电子有限责任公司产品;ODS
C18色谱柱(4.6 mm×250 mm),美国热电公司产品 。
2　方法与结果
2.1　定性鉴别
2.1.1　三七的薄层鉴别
取本品内容物2 g ,加甲醇 50mL ,加热回流 2 h ,
滤过 ,滤液挥干 ,残渣加水 20 mL 使溶解 ,用水饱和
正丁醇提取4次 ,每次15mL ,合并正丁醇提取液 ,加
浓氨试液提取 2次 ,每次 15 mL合并正丁醇提取液 ,
水浴挥干 ,残渣加 5 mL甲醇溶解 ,作为供试品溶液 。
另取人参皂苷 Rg1、Rb1对照品 ,加甲醇制成每1 mL
各含 1 mg的溶液作为对照品溶液 。照薄层色谱法
(《中国药典》2000年版一部附录薄层色谱法)试验 ,
吸取上述溶液各2 ～ 4μL ,分别点于同一硅胶 G薄层
板上 ,以氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置分层的
下层溶液为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 。喷以 10%硫
酸乙醇溶液 ,于 105℃烘约 5 min ,供试品色谱中 ,在
与对照品色谱相应位置上 ,显相同颜色的斑点。阴
性对照无干扰。
2.1.2　当归 、川芎的薄层鉴别
取本品内容物 2 g , 加乙醚 25 mL , 水浴回流
0.5 h ,滤过 ,滤液水浴挥干 ,残渣加 2 mL 乙酸乙酯
使溶解 ,作为供试品溶液。另取当归 、川芎对照药材
0.5 g ,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试
验 ,吸取上述溶液 2 ～ 6 μL ,分别点于同一硅胶 G薄
层板上 ,以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂 ,展开 ,
取出 ,晾干。置紫外光灯(365 nm)下检视 ,供试品色
谱中在与对照药材色谱相应位置上 ,显相同颜色的
荧光斑点。阴性对照试验未见干扰。
2.1.3　白芷的薄层鉴别
取本品内容物 2 g ,加氯仿25 mL ,水浴回流1 h ,
滤过 ,滤液水浴挥干 ,残渣加 2 mL乙酸乙酯使溶解 ,
作为供试品溶液 ,另取欧前胡素 、异欧前胡素对照
品 ,加乙酸乙酯制成每 1 mL 各含 1 mg 的溶液 ,作为
对照品溶液 。照薄层色谱法试验 ,吸取上述溶液2 ～
6μL , 分别点于同一硅胶 G 薄层板上 , 以石油醚
(30 ～ 60℃)-甲苯-乙酸乙酯(6∶3∶1)为展开剂 ,展开 ,
取出 ,晾干。置紫外光灯(365 nm)下检视 ,供试品色
谱在与对照品色谱相应位置上 ,显相同颜色的荧光
斑点。阴性对照试验未见干扰。
2.2　人参皂苷 Rg1的含量测定
2.2.1　对照品溶液的制备
精密称取人参皂苷 Rg1 对照品2.45 mg ,加甲醇
溶解并定容于5 mL量瓶中 ,制成每1 mL含 0.49 mg
的溶液 ,作为对照品溶液。
·18· 　　中医研究　2006年 10月　第 19卷　第 10期　TCM Res.October 2006 Vol.19 No.10　　
2.2.2　供试品溶液的制备
取本品内容物 2 g ,精密称定 ,置具塞椎形瓶中 ,
加甲醇50mL ,精密称重 ,放置 24 h;置水浴中回流提
取2 h ,放冷 ,再称定重量;用甲醇补足减失的重量 ,
摇匀 ,滤过;精密量取续滤液 25 mL ,水浴挥干;残渣
加水 20 mL使溶解 ,用水饱和正丁醇提取 4次 ,每次
15 mL;合并正丁醇提取液 ,加浓氨试液提取 2次 ,每
次15 mL;分取正丁醇层 ,氨试液层用水饱和正丁醇
提取 2次 ,每次 15 mL;正丁醇液与上述正丁醇液合
并 ,水浴挥干 ,残渣加甲醇溶解并定容于 25 mL 量瓶
中 ,摇匀 ,即得。
2.2.3　色谱柱及流动相的选择
选用胺基柱 ,以乙腈-水(80∶20)为流动相 。
2.2.4　测定波长的选择
经二极管阵列检测器对人参皂苷 Rg1色谱峰于
190 ～ 370 nm 进行光谱测定 ,结果人参皂苷 Rg1 在
203 nm有吸收峰。《中国药典》2000年一部人参皂
苷Rg1测定项下 Rg1 含量测定波长为 203 nm ,故选
用测定波长203 nm 。
2.2.5　线性关系的考察
取上述对照品溶液 , 分别进样 5 、10 、15 、20 、
25 μL ,注入高效液相色谱仪 ,测定人参皂苷 Rg1 吸
收峰面积积分值 。以人参皂苷 Rg1 的进样量为横坐
标(X),以人参皂苷 Rg1 吸收峰面积积分值为纵坐标
(Y), 进行曲线回归 , 得回归方程 Y =198450X +
63380.2 , r =0.999428。结果:人参皂苷 Rg1 在
2.45 ～ 12.25 μg 范围内 ,线性关系良好。
2.2.6　精密度试验
精密吸取供试品溶液 10μL ,注入液相色谱仪 ,
连续 6 次 , 测定人参皂苷 Rg1 的峰面积 , 结果
RSD(%)为0.33%。
2.2.7　重复性试验
取批号为 20050319的样品 5份 ,分别按照含量
测定项下方法提取 、测定并计算含量 ,测得平均值为
19.038μg , RSD(%)为 1.31%。
2.2.8　稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液 ,在 10 h 内每隔一定
时间测定 1 次 , 测定峰面积 , 结果 RSD(%)为
0.37%,表明 ,供试品溶液 10 h内基本稳定 。
2.2.9　阴性对照试验
按处方比例和工艺 ,制成缺三七的阴性对照样
品 ,按供试液的制备方法制备 ,测定 。结果表明:在
与人参皂苷 Rg1 对照品色谱的相应位置上无干扰峰
出现 ,说明方中其他成分对测定人参皂苷 Rg1 的含
量无影响。
2.2.10　加样回收试验
精密称取批号为 20050319 的样品内容物 1 g
(含人参皂苷 Rg1为 19.038 mg/g),精密加入人参皂
苷 Rg1对照品 ,按 2.2.2项下供试液制备方法操作 ,
制成加样供试液。吸取加样供试液10μL ,注入液相
色谱仪 , 按上述方法测定加样供试液中人参皂苷
Rg1 的含量 , 计算回收率。结果平均回收率为
98.33%,RSD为1.41%,见表 1。表明本法具有较好
的加样回收率。
表 1　加样回收率试验结果
样品号 取样量(g) 样品含量(mg) 对照品加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%)
1 1.0047 19.128 18.64 37.485 98.48
2 1.0089 19.207 19.33 37.885 96.63
3 1.0352 19.708 19.34 38.355 96.31
4 1.0374 19.750 18.78 38.495 99.81
5 1.0338 19.110 19.36 38.410 99.69
6 1.0545 20.076 18.63 38.535 99.08
2.2.11　样品含量测定
取 3批样品按 2.2.2项下方法提取 ,测定并计
算含量 ,结果分别为 19.016 mg/粒(批号 2005319)、
18.816 mg/粒(批号 200503220)、18.851 mg/粒(批号
2005325)。
3　讨　论
三七中人参皂苷 Rg1的含量测定方法有薄层扫
描法和 HPLC 法。薄层扫描法误差较大。HPLC 法
一般用反相 C18柱 ,梯度洗脱 ,方法复杂 ,分析时间
1 ～ 2 h ,时间较长[ 3] 。本文采用胺基柱[ 2-3] ,以乙腈-
水(80∶20)为流动相 ,分析时间可缩短至 20 min ,且
人参皂苷 Rg1 峰形尖锐 ,分离度较好。
白芷的薄层鉴别实验中 ,曾用乙醚 、乙酸乙酯提
取 ,但结果不明显 ,本文采用加氯仿 ,水浴回流 ,再加
乙酸乙酯提取作供试品溶液 ,石油醚(30 ～ 60℃)-甲
苯-乙酸乙酯(6∶3∶1)为展开剂展开 ,结果斑点圆整 、
清晰。
参考文献:
[ 1] 何夏秋 ,杨蕾 ,贺建华 , 等.用 HPLC 法测定三七及益尿通
胶囊中人参皂苷 Rg1 的含量[ J] .中国中药杂志 , 2001 , 26
(1):37.
[ 2] 梁宁 ,赵怀清 , 周迎春 , 等.HPLC 法同时测定三七总皂苷
中人参皂苷 Rg1 与 Rb1 的含量[ J] .中草药 , 2002 , 33(8):
704.
[ 3] 周迎春 , 赵怀清 ,梁宁 , 等.高效液相色谱法同时测定三七
总皂苷中人参皂苷 Rg1 、Re、Rb1 与三七皂苷 R1 的含
量[ J] .沈阳药科大学学报 , 2003 , 20(1):27.
收稿日期:2006-06-07;修回日期:2006-09-06
(编辑　陶　珠)
·19·　　中医研究　2006年 10月　第 19卷　第 10期　TCM Res.October 2006 Vol.19 No.10