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四方麻水提物的体外抗菌实验



全 文 :药学研究
收稿日期:2009-03-27
四方麻水提物的体外抗菌实验
黄克南 , 戴 航 , 侯小涛 , 宁小清 , 吴 光
(广西中医学院 ,广西南宁 530001)
  摘 要:[目的] 探讨广西产四方麻水提物在体外的抗菌作用。[ 方法] 采用连续稀释法和琼脂稀释法对四方麻水提物进
行 MIC 实验研究。[结果] 四方麻水提物在体外对金黄色葡萄球菌 、大肠埃希菌均有作用 , 其中对金黄色葡萄球菌的作用比较
明显 ,但对白假丝酵母菌作用不明显。[ 结论]本研究为四方麻水提物的抗菌效用提供了实验依据 ,同时也为从四方麻水提物
中寻找药效的抗菌成分提供了理论依据。
  关键词:四方麻;水提物;体外抗菌实验
  中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1008-7486(2009)02-0048-02
Antibacterial Experiment on Aqueous Extract
of Veronicastrum Cauloptera (Hance)Yamazaki in Vitro
HUANG Ke-nan , DAI Hang , HOU Xiao-tao , NING Xiao-qing , WU Guang
(Guangxi Tradit ional Chinese Medical University , Nanning , Guangxi , 530001)
  Abstract:[ Objetive] To explore the antibacterial effect of aqueous extract of Veronicastrum caulopterum (Hance)Yamazaki in
vitro.[ Methods] Serial dilution method was used to M IC experiment.[ Results] The aqueous ex tract of Veronicastrum caulopterum
(Hance)Yamazaki had antibacterial effects on staphylococcus aureus and escherichia coli especially staphylococcus aureus but hardly
have effect on candida albicans.[ Conclusions] This research offers a experimental bases to the antibacterial effects o f aqueous ex trat
f rom Veronicastrum Caulopterum (Hance)Yamazaki and provides a theo retical basis to seek pharmacodynamic antibacterial composi-
tio n in it.
  Key words:Veronicastrum Caulopterum (Hance)Yamazaki;Aqueous ex tract;Antibacterial experiment in vitro
  四方麻 , 别名青鱼胆 、四方消 、四方青等 , 系玄参科水草
属植物四方麻 Veronicastrum caulopterum (Hance)Yamazaki
[ Calorhabdos cauloptera Hance] ,以全草入药 ,全年可采 , 晒干
或鲜用。性味:苦 、寒 、无毒;功能主治:清热解毒 , 消肿止痛;
用于流行性腮腺炎 、咽喉炎 、肠炎 、痢疾 、淋巴结结核 ,外用治
皮肤湿疹 、烧烫伤 、痈疖疔疮 、跌打损伤[ 1-2] 。此药在民间多
有使用 ,但对其在药用方面的报道却很少。本文采用连续稀
释法对四方麻水提物进行了体外抗菌实验的初步研究。
1 试验材料
1.1 药材 四方麻(产自广西桂北)经广西中医学院刘寿养
副教授鉴别为 Veronicastrum caulopterum (Hance)Yamazaki。
1.2 四方麻水提物的制备 取四方麻药材适量 , 晾干 ,加水
煎煮 , 滤过 ,残渣用蒸馏水清洗 3 次并过滤 , 弃去滤渣 , 合并
滤液。滤液再用布氏漏斗垫双层滤纸抽滤 ,得到滤液为四方
麻水提液。浓缩 , 过滤 , 定容得浓度为 1.0 g/ ml的四方麻水
提液。
1.3 菌种及培养 金黄色葡萄球菌(ATCC25923)、大肠埃
希菌(GIM2.169)、白假丝酵母菌(GIM2.169)购自广东省微
生物研究所菌种保藏中心。Mueller-Hinton 肉汤和沙氏琼脂
培养基均购自北京陆桥技术有限责任公司。
  实验菌种金黄色葡萄球菌(ATCC25923)和大肠埃希菌
(GIM2.169)经传代纯培养后 , 接种于 MH 肉汤培养基中 ,
37 ℃恒温箱培养 6 h , 经比浊法测定细胞数为 1.0 ×109
CFU/ ml ,稀释至 1.0×107 CFU/ ml 为工作浓度。白假丝酵
母菌(GIM2.169)经传代纯培养后用生理盐水调配成浓度为
1.0×107 CFU/ ml的工作菌液。
·48· Journal of Guangx i T raditional Chinese Medical University        2009 , Vol.12 No.2
2 方法与结果[ 3-4]
2.1 液体稀释法 ①将被检药液用 MH 肉汤培养基作一系
列倍比稀释为 9 管, 使 MH 肉汤培养基含药浓度分别为 500
mg/ml , 250 mg/ ml , 125 mg/ ml , 62.5 mg/ ml , 31.25 mg/ ml ,
15.63 mg/ ml , 7.82 mg/ ml , 3.91 mg/ ml , 1.95 mg/ ml。第 10 管
不加药液为 MH 肉汤培养基接种相同菌种作对照管。 ②各管
加入 100μl菌液(浓度为 107 CFU/ml), 置 35 ℃培养 24 h , 以
不出现肉眼可见生长的最低药物浓度为该药的最小抑菌浓度
(MIC)。结果见表 1。
表 1 四方麻水提物的抑菌实验结果(液体稀释法)
编号 浓度(mg/ml) 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌
1 500.00 - -
2 250.00 - +
3 125.00 - +
4 62.50 - +
5 31.25 + +
6 15.63 + +
7 7.82 + +
8 3.91 + +
9 1.95 + +
10 无药对照管 + +
  注:“ +”细菌生长;“ -”无菌生长
2.2 琼脂稀释法 ①取 10个无菌平皿 , 编号。分别将四方
麻水提物用沙氏琼脂(冷却至 50 ℃)稀释至浓度为 100
mg/ml , 80 mg/ml , 60 mg/ ml , 40 mg/ ml , 20 mg/ml , 10 mg/
ml , 5 mg/ml , 2 mg/ ml , 1 mg/ ml , 0 mg/ml混匀。 ②待琼脂凝
固后 ,分别向各平板点种白假丝酵母菌(浓度为 107 CFU/ ml)
2 μl ,直径约 5~ 8 mm。 ③将平板置 30 ℃培养 36 h , 以完全
抑制白假丝酵母菌生长的最低浓度为该药的 MIC。结果见
表 2。
  由表 1 、表 2 可见 , 四方麻水提物对大肠埃希菌 、金黄色
葡萄球菌 、白假丝酵母菌 的 MIC 分别为 500 mg/ ml ,
62.50 mg/ml , >100 mg/ ml。
表 2 四方麻水提物的抑菌实验结果(液体稀释法)
编号 浓度(mg/ ml) 白假丝酵母菌
1 100 +
2 80 +
3 60 +
4 40 +
5 20 +
6 10 +
7 5 +
8 2 +
9 1 +
10 无药对照管 +
  注:“ +”细菌生长;“ -”无菌生长
3 讨 论
  本实验采用连续稀释法进行四方麻 MIC 的测定 , 对了
解四方麻有无抗菌作用 、抗菌效果如何及确定四方麻的用药
剂量和研究抗菌机理等方面具有重要意义。研究结果表明 ,
四方麻的水提物对金黄色葡萄球菌 、大肠埃希菌均有作用 ,
其中对金黄色葡萄球菌的作用比较明显 , 对白假丝酵母菌基
本没有作用。但是体外抗菌实验的环境与体内不同 , 因此该
提取物还需进一步通过动物体内实验来证明其抗菌作用 , 为
四方麻抗菌药用价值的开发奠定基础。
参考文献
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[ 2] 《全国中草药汇编》编写组.全国中草药汇编[ M] .北京:
人民卫生出版社 , 1975:271.
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[ J] .广西中医学院学报 , 2008 , 11(3):77.
(编辑 陈明伟)
·49·2009年 第 12 卷 第 2 期             广西中医学院学报