全 文 ：檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
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［责任编辑 顾雪竹］
［收稿日期］ 20130201(018)
［基金项目］ 国家自然科学基金(30960507) ;四川省教育厅创新团队项目(11TD004)
［第一作者］ 黄宇，在读硕士研究生，从事藏药药效物质基础与资源利用研究，Tel:15928961236，E-mail:xiaohuangdoudou12@ 163． com
［通讯作者］ * 张艺，博士，研究员，从事中药、民族药药效物质基础研究，Tel:028-61800274，E-mail:9006zmy@ sina． com
HPLC测定藏药樱草杜鹃中金丝桃苷、
槲皮苷和槲皮素的含量
黄宇，兰莎，张艺* ，曾建强，苏锦松
( 成都中医药大学民族医药学院，成都 611137)
［摘要］ 目的:建立藏药樱草杜鹃中金丝桃苷、槲皮苷和槲皮素含量的 HPLC 测定方法，为药材质量控制与评价提供参
考。方法:采用 HPLC，Welch Ultimate XB-C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，柱温 30 ℃，流速 1. 0 mL·min
－1，进样量 10 μL，
检测波长 350 nm，流动相 A乙腈-甲醇(5∶ 1)-B 0. 1%甲酸，二元梯度洗脱。结果:3 种成分在 70 min内达到良好分离，金丝桃
苷、槲皮苷和槲皮素线性范围分别为 4. 41 ～ 88. 20 mg·L －1(r = 0. 999 6) ，2. 94 ～ 58. 80 mg·L －1(r = 0. 9996) ，1. 485 ～ 29. 70 mg·
L －1(r = 0. 999 6) ;加样回收率分别为 103. 37%(ＲSD 1. 67%) ，98. 07%(ＲSD 1. 41%) ，100. 19%(ＲSD 1. 20%)。结论:方法操
作简单、结果准确、重复性较好，可作为藏药樱草杜鹃质量控制的有效方法之一。
［关键词］ 藏药;樱草杜鹃;含量测定;金丝桃苷;槲皮苷;槲皮素
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)14-0117-04
［doi］ 10． 11653 /syfj2013140117
Determination of Hyperosid，Quercetrin and Quercetin
in Ｒhododendron Primulaeflorum by HPLC
HUANG Yu，LAN Sha，ZHANG Yi* ，ZENG Jian-qiang，SU Jin-song
(College of Ethnic Medicine，Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 611137，China)
［Abstract］ Objective:To establish an HPLC method for determining the content of hyperoside，
quercitrin and quercetin in Ｒhododendron Primulaeflorum，and to lay the foundation for the quality control and /or
quality evalution of Ｒ． primulaeflorum． Method:A high-performance liquid chromatography equipped a Welch
Ultimate XB-C18 (4. 6 mm ×250 mm，5 μm)column with UV detection was used． The mobile phase consisted of
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acetonitrile and methanol (5∶ 1) (A)and 0. 1% formic acid in water (B)with gradient elution． The column
temperature was kept at 30 ℃ and the flow rate was 1. 0 mL·min －1 ． The detection wavelength was set at 350 nm．
Ｒesult:The good separation of three compounds was achieved within 70 min． The linear range of hyperoside，
quercitrin and quercetin were 4. 41-88. 20 mg·L －1 (r = 0. 999 6) ，2. 94-58. 80 mg·L －1 (r = 0. 999 6) ，1. 485-
29. 70 mg·L －1 (r = 0. 999 6)respectively． The average recovery were 103. 37% (ＲSD 1. 67%) ，98. 07%
(ＲSD 1. 4%) ，100. 19% (ＲSD 1. 20%)respectively． Conclusion:This method is simple，accurate with good
reproducibility and stability． It can be used as effective methods for quality control of Ｒ． primulaeflorum．
［Key words］ Tibetan Medicine; Ｒhododendron primulaeflorum Bur． et Franch; determination;
hyperosid;quercetrin;quercetin
樱草杜鹃是常用藏药“达里”基原植物之一，始
载于《月王药诊》，以花和叶入药［1-3］。樱草杜鹃具
有清热消肿、止咳化痰等作用，主要用于气管炎、消
化不良、胃下垂等病［4］。现代藏医药著作《甘露本
草明镜》及现代医学研究发现，其根茎部、叶、花都
具有一定的祛痰、镇咳、平喘等药理活性，临床上常
作为治疗慢性支气管炎和冠心病的药物，极具潜在
的开发价值［4-5］。近年来，国内药学工作者主要集
中对樱草杜鹃的挥发油、黄酮类等化学成分研究上，
其抗氧化活性研究还很少［6-9］。课题组前期研究发
现，槲皮苷、槲皮素和金丝桃苷为樱草杜鹃抗氧化活
性的有效成分［10］。因此，本文建立了同时测定藏药
樱草杜鹃中金丝桃苷、槲皮苷和槲皮素含量的
HPLC 方法，可为樱草杜鹃药材质量标准的制定和
质量评价提供科学依据。
1 材料
樱草杜鹃样品 3 批，其中 2 批分别于 2011 年 6
月采自四川省甘孜康定县雅加埂垭口(海拔 3 850 m，
批次 201201)和贡嘎山乡(海拔 4 100 m，批次
201202) ，1 批于 2011 年 6 月由西藏藏医学院提供
(批次 201203)。经成都中医药大学教授贾敏如鉴
定，均为杜鹃花科植物樱草杜鹃 Ｒhododendron
primulaeflorum Bur． et Franch。
高效 液 相 色 谱 仪 (TECHCOMP LC 2050
Organizer，TECHCOMP LC 2130 Pump，TECHCOMP
LC 2061 Column Heater，TECHCOMP LC 2030 UV
Detector，上海天美科学仪器有限公司) ，Welch
Ultimate XB-C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)
(Welch公司) ，Sartorius BP121s 型电子天平(北京
赛多利斯科学仪器有限公司) ，ULUP-1-10T 型超纯
水器(成都超纯科技有限公司) ，CQ-250 型超声波
清洗器(上海必能信公司)。
乙腈(色谱纯) ，甲醇(色谱纯) ，其他试剂均为
分析纯。
金丝桃苷(批号 111521-201004)、槲皮素(批号
100081-200907)由中国药品生物制品检定所提供，
槲皮苷对照品(实验室自制，纯度 ＞ 95%)。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Welch Ultimate XB-C18色谱柱(4. 6
mm × 250 mm，5 μm) ，柱温 30 ℃，流速 1. 0 mL·
min －1，进样量 10 μL，检测波长 350 nm，流动相 A乙
腈-甲醇(5∶ 1)-B 0. 1%甲酸，梯度洗脱(0 ～ 50 min，
18%A;50 ～ 55 min，18% ～ 35% A;55 ～ 65 min，35%
～ 50% A;65 ～ 70 min，50% ～ 100% A)。按照上述
色谱条件进行测定，结果显示金丝桃苷、槲皮苷、槲
皮素 3 种黄酮成分与其他共存峰分离度均 ＞ 1. 5，分
离度良好(见图 1)。
A．对照品;B．供试品;1. 金丝桃苷;2. 槲皮苷;3. 槲皮素
图 1 樱草杜鹃样品 HPLC
2. 2 对照品溶液的制备 取金丝桃苷、槲皮苷、槲
皮素对照品适量，精密称定，分别置 50 mL 量瓶中，
用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别制成 0. 2 g·
L －1对照品溶液，备用。分别精密吸取上述对照品
溶液各 4. 5，3. 0，1. 5 mL，置 10 mL 量瓶中，加甲醇
至刻度，摇匀，滤过，即得混合对照品溶液。
2. 3 供试品溶液制备 取样品粉末 0. 5 g，精密称
定，置圆底烧瓶中，加甲醇 20 mL，称定质量，水浴回
流 30 min，冷却，再次称定质量，以甲醇补足减失质
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量，滤过，取续滤液，过 0. 45 μm 微孔滤膜，作为供
试品溶液。
2. 4 线性范围考察 分别精密吸取 2. 2 项对照品
储备液 0. 5，1. 0，2. 0，5. 0，8. 0，10. 0 mL置 10 mL量
瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得系列浓度混合
对照品溶液。取各系列浓度混合对照品溶液在上述
色谱条件下进行 HPLC 分析，以各对照品溶液的浓
度(g·L －1)为横坐标，以各成分色谱峰面积(Y)为纵
坐标，绘制标准曲线，得回归方程分别为 Y金丝桃苷 =
20 363X － 27 566 (r = 0. 999 6) ，Y槲皮苷 = 17 431X －
10 232(r = 0. 999 6) ，Y槲皮素 = 28 636X － 19 251(r =
0. 999 6)。线性范围依次为 4. 41 ～ 88. 20，2. 94 ～
58. 80，1. 485 ～ 29. 70 mg·L －1。
2. 5 精密度试验 精密吸取 2. 4 线性范围的考察
项下对照品溶液各 10 μL，连续进样 6 次，测定峰面
积，计算 ＲSD。金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素精密度
ＲSD 分别为 0. 10%，1. 86%，1. 44%，其 ＲSD 均
＜ 2%，表明该仪器精密度良好。
2. 6 稳定性试验 取同一份供试品溶液分别放
置，于 0，2，4，6，8，12，24 h 重复进样，测定金丝桃
苷、槲皮苷、槲皮素的峰面积，其 ＲSD 分别是
1. 42%，1. 62%，1. 78%，表明供试品溶液在 24 h
内稳定。
2. 7 重复性试验 取同一批次樱草杜鹃药材粉末，
按 2. 3 方法制备供试品溶液 6 份，平行测定，结果金
丝桃苷、槲皮苷、槲皮素含量的 ＲSD分别为 1. 50%，
1. 60%，1. 61%，表明方法的重复性较好。
2. 8 加样回收率 取同一批已知含量的樱草杜鹃
样品粉末 0. 25 g，共 6 份，置具塞锥形瓶中，分别加
入金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素对照品适量，照 2. 3 方
法制备，依法测定，并按公式计算各对照品的平均加
样回收率和 ＲSD，结果见表 1。
表 1 樱草杜鹃加样回收率试验(n = 6)
成分 No． 样品量 / g 样品含量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% ＲSD /%
金丝桃苷 1 0. 250 7 0. 702 0 0. 705 6 1. 435 8 104. 00 103. 37 1. 67
2 0. 250 3 0. 700 1 0. 705 6 1. 437 9 104. 46
3 0. 250 4 0. 701 1 0. 705 6 1. 426 1 102. 74
4 0. 250 3 0. 700 8 0. 705 6 1. 435 8 104. 16
5 0. 250 8 0. 702 2 0. 705 6 1. 408 8 100. 14
6 0. 250 2 0. 700 6 0. 705 6 1. 439 5 104. 73
槲皮苷 1 0. 250 7 0. 351 0 0. 352 8 0. 698 7 98. 56 98. 07 1. 41
2 0. 250 3 0. 350 4 0. 352 8 0. 688 8 95. 91
3 0. 250 4 0. 350 6 0. 352 8 0. 702 1 99. 64
4 0. 250 3 0. 350 4 0. 352 8 0. 699 6 98. 97
5 0. 250 8 0. 351 1 0. 352 8 0. 693 2 96. 96
6 0. 250 2 0. 350 3 0. 352 8 0. 697 4 98. 39
槲皮素 1 0. 250 7 0. 235 7 0. 257 4 0. 495 1 100. 81 100. 19 1. 20
2 0. 250 3 0. 235 3 0. 257 4 0. 490 1 99. 01
3 0. 250 4 0. 235 4 0. 257 4 0. 494 3 100. 61
4 0. 250 3 0. 235 3 0. 257 4 0. 494 4 100. 65
5 0. 250 8 0. 235 8 0. 257 4 0. 497 3 101. 61
6 0. 250 2 0. 235 2 0. 257 4 0. 488 6 98. 44
2. 9 样品含量测定 取 3 批次樱草杜鹃干燥药材
粉末按 2. 3 方法制备，在上述色谱条件下进行分析，
用外标法计算金丝桃苷、槲皮苷与槲皮素的含量。
结果见表 2。
3 讨论
3. 1 流动相选择 在流动相的选择上，参考相关文
表 2 样品中金丝桃苷、槲皮苷与槲皮素含量的测定 %
药材批次 金丝桃苷 槲皮苷 槲皮素
201201 0. 285 0. 138 0. 095
201202 0. 256 0. 048 0. 062
201203 0. 265 0. 613 0. 040
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黄宇，等:HPLC测定藏药樱草杜鹃中金丝桃苷、槲皮苷和槲皮素的含量
献［11-16］，以乙腈-甲醇(5 ∶ 1)作为有机相，分别考察
了 0. 2%甲酸、0. 2%磷酸、0. 1%甲酸作为水相对金
丝桃苷、槲皮苷、槲皮素 3 种成分色谱峰分离度的影
响。结果以乙腈-甲醇(5∶ 1)作为有机相，0. 1%甲酸
作为水相时，3 种成分的色谱峰对称因子和分离度
好，理论塔板数高，符合 HPLC 测定药材含量的要
求，所以最终选定乙腈-甲醇(5 ∶ 1)-0. 1%甲酸作为
样品测定的流动相。
3. 2 提取方法选择 本文比较了不同的提取方法
(回流、超声) ，不同提取时间(15，30，45 min) ，不同
提取溶媒(60%，80%，100%甲醇)和溶媒用量(20，
40，60 mL) ，发现采用回流提取 30 min，提取溶剂为
100%甲醇 20 mL时，3 种黄酮类成分提取率较高。
HPLC同时测定樱草杜鹃金丝桃苷、槲皮苷、槲
皮素 3 种黄酮类成分含量测定的方法，简便快速，稳
定可靠，重复性好，回收率高。由表 2 可知，樱草杜
鹃 3 个批次中金丝桃苷、槲皮苷的含量相对较高，槲
皮素的含量相对较低。另外，西藏藏医学院提供的
药材中的槲皮苷含量远高于其他 2 个样品，其药材
主要是花，叶很少，而雅加埂、贡嘎山所采樱草杜鹃
花、枝、叶都有，以叶居多，因此本文推测槲皮苷成分
可能主要以花中含量最高，但因本实验所搜集的样
品批次较少，需要进一步研究证实。
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［责任编辑 顾雪竹
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2013 年 7 月
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Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 14
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