全 文 ：［文章编号］ 1000 － 4718(2011)05 － 0838 － 05
［收稿日期］2011 － 01 － 05 ［修回日期］2011 － 03 － 08
* ［基金项目］国家自然科学基金资助项目(No． 81000923) ;广东省医学科学技术研究基金资助项目(No． B2009117) ;广东高
校优秀青年创新人才培育资助项目(No． 2009400)
△通讯作者 Tel:020 － 31897359;E － mail:sxmshw77@ 163． com
点地梅提取物 saxifragifolin B体外抗实体瘤活性研究*
李朋军1， 沈伟哉1， 叶文才2， 张冬梅2， 孙 艳3△
(暨南大学1 医学院，2 药学院，广东 广州 510632;3 广东药学院生命科学与生物制药学院，广东 广州 510006)
［摘 要］ 目的:初步探讨点地梅提取物 saxifragifolin B体外抗实体瘤活性及其作用机制。方法:Saxifragifo-
lin B作用于体外培养的人肝癌细胞 BEL － 7402、肺癌细胞 A549 和胃癌细胞 SGC7901。光镜下观察肿瘤细胞形态
学变化;AO/EB双染法观察细胞死亡;MTT法检测细胞增殖水平，计算 IC50;流式细胞术检测细胞凋亡和坏死。结
果:Saxifragifolin B诱导 3 种实体瘤细胞出现凋亡样和坏死样改变。Saxifragifolin B以浓度依赖的方式抑制肿瘤生
长，作用 24 h IC50分别为 13． 13 μmol /L、9． 61 μmol /L和 11． 64 μmol /L。Saxifragifolin B可以诱导肿瘤细胞凋亡和坏
死。结论:点地梅提取物 saxifragifolin B具有抗多种实体瘤的活性，其作用机制可能与诱导细胞凋亡和促进细胞坏
死有关。
［关键词］ 点地梅;Saxifragifolin B;BEL － 7402 细胞;A549 细胞;SGC7901 细胞
［中图分类号］ R931． 71 ［文献标识码］ A doi:10． 3969 / j． issn． 1000 － 4718． 2011． 05． 002
Activity of saxifragifolin B from Androsace umbellata against solid tumors
in vitro
LI Peng － jun1，SHEN Wei － zai1，YE Wen － cai2，ZHANG Dong － mei2，SUN Yan3
(1School of Medicine，2College of Pharmacy，Jinan University，Guangzhou 510632，China;3Life Science and Biopharma-
ceutical College，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China． E － mail:sxmshw77@ 163． com)
［ABSTRACT］ AIM:To investigate the activity of saxifragifolin B from Androsace umbellata against solid tumors．
METHODS:Human hepatoma cell line BEL － 7402，human lung adenocarcinoma epithelial cell line A549 and human
gastric cancer cell line SGC7901 were treated with saxifragifolin B in vitro． Morphological changes of the tumor cells were
observed under microscope． Cell deaths were determined by AO /EB double staining． Cell proliferation was assayed by MTT
method． The IC50 values were graphically determined． Apoptosis and necrosis were measured by flow cytometry． RE-
SULTS:Saxifragifolin B induced apoptosis and necrosis in all 3 tested solid tumor cells． Saxifragifolin B inhibited prolifer-
ation of tumor cells in a concentration － dependent manner with IC50 values of 13． 13 μmol /L，9． 61 μmol /L and 11． 64
μmol /L at 24 h，respectively． Saxifragifolin B induced both apoptosis and necrosis in the tumor cells． CONCLUSION:
Saxifragifolin B from Androsace umbellata has the activity against a variety of solid tumors with the possible mechanisms of
inducing both apoptosis and necrosis．
［KEY WORDS］ Androsace umbellata;Saxifragifolin B;BEL － 7402 cells;A549 cells;SGC7901 cells
天然产物广泛存在于自然界，资源丰富而且类
型多样，因此是目前发展抗肿瘤药物最重要的策略
之一［1］。我国传统中药是天然产物的重要来源。中
药中提取的多种天然产物显示了良好的抗肿瘤活
性［2，3］。近来，有研究报道从报春花科(Primulaceae)
点地梅属植物点地梅［Androsace umbellata(Lour．)
Merr．］中首次分离得到 7 种化合物［4］，并发现三萜
皂苷 saxifragifolin B 可以诱导肝癌细胞株 HepG2 凋
亡［5］。本实验通过研究 saxifragifolin B 对人肝癌细
胞 BEL －7402、肺癌细胞 A549 和胃癌细胞 SGC7901
形态及增殖的影响，初步探讨点地梅提取物 saxifragi-
folin B对其它实体瘤细胞株的抑制作用及机制，为
深入阐明 saxifragifolin B 抗肿瘤作用机制及其临床
应用奠定基础。
材 料 和 方 法
1 药物
Saxifragifolin B，白色无结晶粉末，经鉴定为 3 －
·838· 中国病理生理杂志 Chinese Journal of Pathophysiology 2011，27(5) :838 － 842
O{β － D －吡喃木糖 －(1→2)－ β － D －吡喃葡萄糖
－(1→4)－［β － D －吡喃葡萄糖(1→2) ］－ α － L －
阿拉伯糖}－ 16α －羟基 － 13β，28 －环氧 －齐墩果烷
－ 30 －醛，saxifragifolin B 结构见图 1，暨南大学药学
院叶文才教授惠赠。用二甲亚砜(dimethyl sulfoxide，
DMSO)溶解 saxifragifolin B，制备浓度为 20 mmol /L
的储存液，－ 20 ℃保存。
Figure 1． Chemical structure of saxifragifolin B．
图 1 Saxifragifolin B的化学结构
2 细胞株
人肝癌细胞株 BEL － 7402、人肺腺癌细胞株
A549 和人胃癌细胞株 SGC7901 由暨南大学生化教
研室提供。
3 主要试剂
RPMI － 1640 购自 Gibco，胎牛血清购自杭州四
季青公司，丫啶橙(acridine orange，AO)、溴化乙啶
(ethidium bromide，EB)购自 Fluka，MTT 购自 Sigma，
AnnexinⅤ － FITC 凋亡检测试剂盒购自 Biovision。
4 方法
4． 1 AO /EB 双荧光染色 收集对数生长期的肿瘤
细胞。完全培养基(含 10% 胎牛血清的 RPMI －
1640)调整细胞浓度，按 1 × 106cells /well 接种 24 孔
板，saxifragifolin B处理 6h后，PBS洗 2 遍，滴加 2 μL
荧光标记物(AO /EB各含 100mg /L) ，避光染色，PBS
洗 2 遍，滴加 90%甘油，荧光显微镜下观察拍照。设
置阴性对照组(加入 1‰DMSO)。
4． 2 MTT 法检测细胞增殖 收集对数生长期的细
胞。完全培养基调整细胞浓度，按 7 × 103cells /well
接种 96 孔板。设置空白对照组、阴性对照组和 6 个
实验组，每组设置 4 个复孔。细胞接种 24 h 后加入
saxifragifolin B，使其终浓度为 4 μmol /L、6 μmol /L、8
mol /L、10 μmol /L、12 μmol /L、14 μmol /L。空白对照
组加入等体积完全培养基。阴性对照组加入 1‰
DMSO。分别于药物作用 24 h、48 h、72 h 后，加 MTT
(10 g /L)继续培养 4 h。弃上清，每孔加入 150 μL
DMSO 溶解，待完全溶解后振荡均匀，酶标仪测定
490 nm处 A 值。计算半数抑制浓度(50% inhibition
concentration，IC50，μmol /L)。培养人脐静脉内皮细
胞株 HUVECs，按以上 MTT 方法检测 saxifragifolin B
作用 24 h对正常细胞的毒性作用，计算半数致死浓
度 CC50(50% cytotoxicity concentration)。
4． 3 流式细胞术检测细胞凋亡和坏死 按试剂盒
说明书操作。收集对数生长期的肿瘤细胞。完全培
养基调整细胞浓度，按 5 × 105cells /well接种 6 孔板。
细胞接种 24 h 后加入 saxifragifolin B。设置阴性对
照组。药物作用 24 h后收集细胞，PBS 洗 2 次。500
μL binding buffer 重悬细胞，加 5 μL Annexin V －
FITC 和 5 μL PI，室温避光染色 5 min 后流式细胞仪
检测。
5 统计学处理
数据用均数 ± 标准差(珋x ± s)表示，采用 SPSS
11． 0 进行 t检验。
结 果
1 Saxifragifolin B对 3 种实体瘤细胞生长的影响
Saxifragifolin B 作用 24 h，3 种实体瘤细胞出现
明显的形态学变化。对照组 BEL － 7402、A549、
SGC7901 细胞体外培养 24 h分别呈多边形、梭形、锥
形或三角形，见图 2A、C、E。细胞折光性好，生长状
态良好，可见较多分裂细胞。而实验组的 3 种肿瘤
细胞形态表现相似，细胞数明显减少。部分细胞变
圆，体积增大，无折光性，周围可见较多细胞碎片;部
分细胞体积缩小，形成小泡，见图 2B、D、F。用 AO /
EB双染观察 saxifragifolin B 作用后肿瘤细胞死亡情
况，结果显示药物作用 6h 即出现明显的细胞死亡:
部分肿瘤细胞体积增大，染色质呈均匀的橙红色、部
分细胞核扩张或黄绿色荧光减少消失(坏死细胞) ;
部分细胞核则呈现致密浓染的黄绿色荧光(凋亡细
胞) ，见图 3B、C。对照组细胞核完整、呈均匀绿色淡
染，见图 3A。
2 Saxifragifolin B抑制 3 种实体瘤细胞增殖
不同浓度药物作用不同时间，结果显示 saxifragi-
folin B对 3 种实体瘤细胞的增殖均具有抑制作用。
Saxifragifolin B抑制同种肿瘤细胞的作用强度在 24 h、
48 h和 72 h时相差不大，说明 saxifragifolin B 的抗肿
·938·
瘤作用不随时间延长而增强;但在一定浓度范围内，
抑制作用随着浓度增加而增强，见图 4 － 6。正常细
胞毒性试验结果显示，saxifragifolin B 对正常细胞的
CC50为(21． 79 ± 1． 05)μmol /L。而 saxifragifolin B 抑
制实体瘤的 IC50水平在 10 μmol /L左右，见表 1。
Figure 2． Effect of saxifragifolin B on the growth of BEL － 7402，A549 and SGC7901 cells(× 200)． A:control group of BEL － 7402
cells for 24 h;D:BEL － 7402 cells were treated with 10 μmol /L saxifragifolin B for 24 h;B:control group of A549 cells
for 24 h;E:A549 cells were treated with 10 μmol /L saxifragifolin B for 24 h;C:control group of SGC7901 cells for 24 h;
F:SGC7901 cells were treated with 10 μmol /L saxifragifolin B for 24 h．
图 2 Saxifragifolin B 对 3 种实体瘤细胞生长的影响
Figure 3． Saxifragifolin B induced apoptosis and necrosis in BEL － 7402 cells(× 400)． Cells were stained with both AO and EB． Tri-
angle:necrosis． Arrow:apoptosis． A:control group cells for 6 h;B:BEL － 7402 cells were treated with 10 μmol /L saxifra-
gifolin B for 6 h;C:BEL － 7402 cells were treated with 12 μmol /L saxifragifolin B for 6 h．
图 3 Saxifragifolin B诱导 BEL －7402 细胞凋亡和坏死
Figure 4． Saxifragifolin B inhibited the proliferation of BEL －
7402 cells． 珋x ± s． n = 4．
图 4 Saxifragifolin B抑制肝癌细胞 BEL －7402 增殖
Figure 5． Saxifragifolin B inhibited the proliferation of A549
cells． 珋x ± s． n = 4．
图 5 Saxifragifolin B抑制肺癌细胞 A549 增殖
·048·
Figure 6． Saxifragifolin B inhibited the proliferation of SGC7901
cells． 珋x ± s． n = 4．
图 6 Saxifragifolin B抑制胃癌细胞 SGC7901 增殖
3 Saxifragifolin B诱导肿瘤细胞凋亡和坏死
Annexin V /PI双染检测肿瘤细胞死亡情况，结
果显示8μmol / L作用24 h既诱导部分肿瘤细胞发
表 1 Saxifragifolin B对 3 种实体瘤细胞的增殖抑制作用
Table 1． Proliferative inhibition of saxifragifolin B on BEL －
7402，A549 and SGC7901 cells(珋x ± s． n = 3)
Cell lines IC50(μmol /L)at 24 h
BEL － 7402 13． 13 ± 0． 64
A549 9． 61 ± 0． 64
SGC7901 11． 64 ± 0． 53
IC50 was defined as the concentration (μmol /L)that caused
50% inhibition of cell growth in vitro．
生早期凋亡(Annexin V － FITC +) ，又促进部分肿瘤
细胞坏死(PI +) ，见图 7。Saxifragifolin B处理组肿瘤
细胞凋亡和坏死水平分别与对照组相比存在显著差
异(P ＜ 0． 01) ，见图 8、9。上述结果说明 saxifragifolin
B可以显著诱导 3 种实体瘤细胞凋亡和坏死。
Figure 7． Saxifragifolin B induced apoptosis and necrosis in SGC7901 cells． SGC7901 cells were stained by Annexin V － FITC(FL1)
and PI(FL3)． Levels of apoptosis and necrosis were analysis by flow cytometry． A:control group cells for 24 h;B:
SGC7901 cells were treated with 4 μmol /L saxifragifolin B for 24 h;C:SGC7901 cells were treated with 8 μmol /L saxifra-
gifolin B for 24 h．
图 7 Saxifragifolin B诱导 SGC7901 凋亡和坏死
Figure 8． Apoptosis induced by saxifragifolin B in three kinds of
solid tumors． 珋x ± s． n = 3． Three kinds of solid tumors
were treated with 8μmol /L saxifragifolin B for 24 h．
Apoptotic rate was analyzed by flow cytometry． ＊＊ P ＜
0． 01 vs control．
图 8 Saxifragifolin B 诱导 3 种实体瘤细胞凋亡
Figure 9． Necrosis induced by saxifragifolin B on three kinds of
solid tumors． 珋x ± s． n = 3． Three kinds of solid tumors
were treated with 8 μmol /L saxifragifolin B for 24 h．
Necrotic rate was analyzed by flow cytometry． ＊＊ P ＜
0. 01 vs control．
图 9 Saxifragifolin B 诱导 3 种实体瘤细胞坏死
·148·
讨 论
点地梅是报春花科点地梅属多年生植物，其全
草均可入药，《中药大辞典》载:“性味苦寒，功效利
水，主治热性水肿”，民间用全草治疗扁桃腺炎、咽喉
炎、口腔炎，故有喉咙草之称［6］。李承花［4］利用硅胶
柱层析、Sephadex LH20 柱层析以及反相柱层析等方
法分离纯化点地梅全草得到 7 种化合物，通过理化
性质和波谱技术鉴定分别为山柰酚(kaempferol)、芦
丁(rutin)、槲皮素(quercetin)、primulanin、saxifragifo-
lin B和 saxifragifolin D和胡萝苷(daucosterol)。Park
等［7］也通过甲醇提取，正丁醇萃取，柱层析等方法获
得 4 种三萜皂苷:saxifragifolin C、saxifragifolin A、saxi-
fragifolin B 和 saxifragifolin D。点地梅正丁醇粗提物
具有抗肿瘤活性［8］。其中，saxifragifolin B 可以诱导
肝癌细胞株 HepG2 凋亡［4］，而 4 种三萜皂苷 saxifra-
gifolin C、saxifragifolin A、saxifragifolin B 和 saxifragifo-
lin D对多药耐药肿瘤细胞株和非多药耐药肿瘤细胞
株均有较敏感的抑制作用［7］。
本研究探讨了点地梅提取物 saxifagifolin B 对其
它实体瘤的作用，结果发现 saxifragifolin B 对人肝癌
细胞 BEL － 7402、肺癌细胞 A549 和胃癌细胞
SGC7901 均有抑制作用，且与 Saxifagifolin B 致正常
内皮细胞的毒性作用相比较强(见结果 2)。但与文
献报道［5］不同的是，我们发现 saxifragifolin B 抑制实
体瘤的作用具有浓度依赖性，但没有时间依赖性，6 h
即可见明显的细胞死亡。形态学观察显示:saxifragi-
folin B 作用后 3 种实体瘤的形态学表现相似。部分
肿瘤细胞呈坏死样改变;而部分细胞呈凋亡样改变。
进一步采用流式检测发现，saxifragifolin B 既能诱导
3 种实体瘤发生早期凋亡，又能直接导致细胞坏死。
提示 saxifragifolin B 抑制肿瘤的作用没有明显的选
择性，其作用机制可能同时存在诱导细胞凋亡和促
进坏死。
以往研究仅报道了 saxifragifolin B 诱导凋亡的
作用［5，7］，并发现 caspase － 8 /caspase － 3、线粒体细胞
色素 C /caspase － 9 途径参与了凋亡发生。然而越来
越多的报道显示，促进肿瘤发生被动性细胞死亡也
是抗肿瘤药物重要的作用机制之一。其中，以细胞
肿胀、胞浆空泡形成、无染色质浓缩的核扩张为特点
的细胞胀亡(oncosis)备受关注［9］。Du 等［10］发现青
蒿琥酯(artesunate)有选择性抗胰腺癌细胞 Panc － 1、
BxPC －3 和 CFPAC － 1 活性，电镜观察药物作用后
肿瘤细胞呈胀亡的典型表现。这种细胞死亡与
caspase分子无关，但可被活性氧(ROS)清除剂 N －
乙酰半胱氨酸(N － acetyl － cysteine，NAC)抑制。本
研究初步的形态学观察和流式检测显示，saxifragifo-
lin B可诱导肿瘤发生具有胀亡特点的形态学表现
(如细胞变大、核扩张)及细胞被动性坏死，但 saxifra-
gifolin B是否通过胀亡途径诱导肿瘤死亡还需进一
步的实验确定。
本研究证实 saxifragifolin B 具有潜在广谱抗实
体瘤活性，而其抗肿瘤作用机制的深入阐明将有助
于发展 saxifragifolin B的临床应用。
［参 考 文 献］
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