全 文 ：　 2009年 5月第 28卷　第 5期
绵阳师范学院学报
JournalofMianyangNormalUniversity
May., 2009
Vol.28　No.5　
收稿日期:2009-02-26
作者简介:韩素菊(1976-　),女 ,硕士 ,主要研究方向:药用植物学研究。
点地梅丛生芽技术研究
韩素菊 1 ,黎云祥 2 ,聂　勇2 ,王怀玉3
(1.绵阳师范学院设备处 ,四川绵阳　621000;2.西华师范大学 ,四川省环境科学与生物多样性保护重点实验室 ,
四川南充　637002;3绵阳师范学院城乡建设与规划学院 , 四川绵阳　621000)
摘　要:以点地梅幼苗为外植体进行快速繁殖 , 分别诱导 、分化 、生根形成再生植株进行快速繁殖 , 并移栽成
活。结果表明 , 在 MS+6-BA(3mg/L)+NAA(0.5mg/L)培养基上诱导丛生芽效果最佳。在 MS+NAA(0.4mg/L)
培养基中根的诱导率为 100%。
关键词:点地梅;组织培养;快速繁殖
中图分类号:R283.2　　文献标识码:A　　文章编号:1672-612x(2009)05-0067-04
点地梅(Androsaceumbelata(Lour.)Mer.)别名喉咙草 、铜钱草 ,报春花科点地梅属一或二年生草本植
物 。全草入药 ,治扁桃体炎 ,咽喉炎 ,口腔炎 ,急性结膜炎 ,跌扑损伤 ,以及咽喉肿痛等症 ,在临床上主要用
于急 、慢性咽喉肿痛 ,而以治疗慢性咽喉痛的效果较好。具极高的药用价值 [ 1] 。王莲英 [ 2]认为点地梅同时
具有较高的观赏价值 ,其叶丛生 ,平铺地面 ,适宜岩石园林栽植及灌木丛旁作地被材料 ,并有降低地表湿
度 ,减少尘土飞扬 ,防止水土流失的功能 ,因而它又是一种不可多得的草坪草种植物和优良地被植物 ,对推
动园林事业以及绿地建设具有一定的实用价值 。李红等 [ 3]认为点地梅还是干旱区野生观赏植物。目前 ,
对点地梅的研究还只限于它的化学成分与染色体和种子的研究[ 4-6] ,对点地梅的组织培养聂勇只研究了它
的愈伤组织 [ 7] ,对它的快速繁殖还没有见报道。目前 ,植物组织培养与快速繁殖技术可以快速 、高效的进
行植物繁殖 ,不受地理 、环境和气候条件的影响 。本研究通过组织培养和植株再生技术获得大量点地梅试
管苗 ,也是一种有效的快速繁殖 、提纯和复壮的方法 。此外 ,点地梅作为一种传统的中药材 ,构建其组织培
养体系有助于获得一些有重要价值的药用成分或代谢中间产物 ,这对中药活性成分的开发利用及工业化
生产具有重大意义。本文对点地梅愈伤组织的诱导及植株再生进行研究 , 对开发利用其药用成分提供研
究基础 。
1　材料与方法
1.1　外植体的获得
在预试验中 ,由于点地梅全株被节状的细柔毛 ,野外采回的材料经过不同浓度的次氯酸钠消毒接种 ,
所有的外植体都被污染。故采集野外成熟点地梅种子在无菌条件下 , 0.1% HgCl2浸泡 8 min,无菌水冲洗 3
-4遍 , 70%乙醇消毒 1min,无菌水冲洗 2遍 ,再用 2.0%次氯酸钠消毒 2min,无菌水冲洗 5-6遍 ,然后将
种子接种在无激素的 MS基本培养基上 ,置 24±2℃ ,光照 12 h/d,光照强度 1500-2000 lx的人工气候箱
中培养 , 11 d后获得无菌苗 ,采集无菌苗作为实验外植体 [ 7] 。
1.2　实验方法
外植体的接种方法:挑选在基本培养基上长势良好的点地梅幼苗在无菌条件下切成 0.5cm大小的段 ,
接种到不同处理的诱导培养基上 ,进行外植体的诱导试验。
外植体的诱导分化:取点地梅无菌幼苗段 ,以 MS[ 8] +30 g/L蔗糖 +8 g/L琼脂为基本培养基 ,附加不
同浓度水平的 6-BA;2, 4-D;NAA激素组合进行愈伤组织的诱导 。即两种培养基 MS+6-BA(2;3;4)
mg/L+NAA(0.5)mg/L和 MS+2, 4-D(0.5;1;2)mg/L+6-BA(0.4)mg/L,观察外植体的分化情况。
DOI :10.16276/j.cnki.cn51-1670/g.2009.05.010
诱导芽的分化和增值:挑取有明显芽点出现的愈伤组织继代到外植体诱导分化好的培养基组合 MS+
6-BA3mg/L+NAA0.5 mg/L上继代培养 ,观察丛生芽增值情况 。
再生植株的生根:将增值培养所得的 1.3-2.6cm不定芽分化增殖苗 ,切成单芽 ,接种于诱导生根的培
养基中 ,诱导生根的培养基选用 MS+NAA0.5mg/L+30 g/L蔗糖 +8 g/L琼脂培养基 。
培养条件:培养基 pH5.6-5.8;温度 24±2℃;湿度:75%-80%;光照强度 1500-2 000 lx;光照时间
12 h/d。
生根苗的移栽:根据点地梅原来的生长环境 ,生根培养 10-15d后 ,将培养瓶在自然条件下放两天。再
将发育良好的再生苗从培养瓶中取出 ,用清水将培养基洗净 ,移至河沙与腐殖质土按 3∶1配比的混合土中。
移栽前将基质浇透水 ,移栽后叶面喷水 ,保持相对湿度 80%以上 ,置于适当的遮荫处培养。 15 d后发现再
生苗变得更加健壮并且开始正常生长 ,移栽成活率达 100%。
2　结果与分析
2.1　外植体的选择与消毒　在预试验中 ,发现野外采集的叶片由于全株被节状的细柔毛 ,很难达到灭菌
目的。种子灭菌效果好 ,污染率较低 ,为 13.0%。种子萌发后可以立即采用出芽幼苗段作为外植体 ,此时 ,
外植体分化率很高 ,且分化时间提前 。而采用幼苗长出的叶片作为外植体进行丛生芽试验 ,外植体分化率
明显低于刚出芽的幼苗段 ,但也可以得到丛生芽。
2.2　初代培养与诱导出芽　观察不同质量浓度与不同种类的激素组合的培养基组合对点地梅丛生芽的
影响发现:2 , 4-D与 6-BA可以诱导出点地梅的愈伤组织 , MS+2, 4-D1.0 mg/L+6-BA0.4 mg/L可得
到长势良好的愈伤组织[ 7] (图 1)。培养基 MS+6-BA+NAA上的外植体在培养 18天后的愈伤组织分化
快 ,出现芽点(图 2),且出芽率最高 ,达到 91.0%。而且在 MS+6 -BA3.0 mg/L+NAA0.5 mg/L培养基
上 ,芽苗增殖快 ,丛生芽增殖倍数高(表 1)。
图 1　愈伤组织(含 2, 4-D和 BA激素培养基上)　　 图 2　愈伤组织(含 BA和 NAA激素培养基上)
Fig.1　Thecallusonmediumswith2, 4-DandBA Fig.2 Thecallusonmediumswith6-BAandNAA
表 1　不同激素水平下点地梅增殖的影响(25d后观察)
Table1　Effectsofdifferentconcentrationofhormonesoninductionproliferation
BA浓度
concentrationofBA(mg/L)
接种外植体数
Numberofexplants
污染外植体数
Numberofpolution
增殖后的芽苗数
Numberofproliferationbuds
增殖系数
Proliferationtimes
1 30 3 154 5.72
2 30 2 245 8.75
3 30 2 314 11.20
4 30 3 327 12.10
　　注:培养基中皆附加 0.5mg/LNAA
·68· 绵阳师范学院学报(自然科学版) 第 28卷
从表 2可以看出 ,茎尖的增殖系数和芽苗数随 BA质量浓度的提高而升高 ,增殖系数由 5.72提高到
12.10,芽苗数由 154提高到 327。表明 BA对嫩苗的增殖分化有促进作用 ,但 BA浓度由 3.0 mg/L升到
4.0mg/L,增殖系数变化不明显 ,综合考虑增殖系数与芽苗两方面的因素 ,点地梅在增殖培养时 , BA质量
浓度以 3.0mg/L最好。 (图 3)
2.3　继代培养与增殖　由于点地梅在初期的丛生芽增殖倍数高 ,固培养基中的营养消耗也较快 , 25d后培
养基出现干燥 ,裂痕 ,说明培养基中的营养基本消耗完 ,此时需要继代丛生芽 ,把所有的丛生芽都继代到生
长良好的 MS+6-BA3.0 mg/L+NAA0.5mg/L培养基上继代培养观察 ,丛生芽生长健壮 。
2.4　生根培养　点地梅在继代培养基中有虚根长出 。选择常用的生根激素 NAA,用不同浓度激素(0.1,
0.2, 0.4 , 0.8)mg/L的单激素培养基中生根培养。结果发现:每种培养基对点地梅生根有较好的作用 , 8 d
后长出根 , 15d后 ,长出大量的根 ,生根率为 100%。其中含 0.4mg/LNAA的培养基的培养效果理想 ,平均
生根数 15条左右 ,所产生的根健壮 ,非常有利于试管苗出瓶移栽管理(图 4)。
图 3　丛生芽 图 4　生根小苗
Fig.3　budsofclone Fig.4　Rootingseedlings
2.5　移栽　点地梅试管小苗叶片薄 ,易失水萎蔫 ,因此 ,打开瓶盖后应置于半封闭的潮湿环境中炼苗 2 ～
3d,完全敞开后在炼苗 2-3d,炼苗过程中及时注意保湿。这样在不同时节点地梅的移栽成活率都可达 90.
0%,小苗生长速度也比较快 。
3　讨论
3.1　丛生芽的诱导　通常 ,细胞分裂素与生长素的比例决定外植体的分化再生的方向 ,较高的细胞分裂
素与生长素的比例将诱导外植体分化芽 [ 9] 。在丛生芽诱导试验中 ,出现了两种愈伤组织 。在 MS+2, 4 -
D1.0mg/L+6-BA0.4mg/L培养基中 ,得到的是淡绿色愈伤组织 ,但这种愈伤组织在后来的分化过程中
产生的芽点少 ,几乎不产生丛生芽;而在 MS+6-BA3.0 mg/L+NAA0.5 mg/L培养基中产生的愈伤组织 ,
是由外植体膨大而形成的绿色愈伤组织 ,可随着丛生芽的生长而变大 ,与丛生芽长在一起 ,同时还可分化
出大量的丛生芽 。在 MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.5 mg/L培养基上产生的愈伤组织最大 ,丛生芽数量最
多 ,增殖倍数最大 ,但后来的丛生芽长势弱小 ,植株生长缓慢 ,弱小 。其中在 MS+6-BA3.0 mg/L+NAA0.
5 mg/L培养基上产生的愈伤组织最大 ,丛生芽数量多 ,增殖倍数大 ,丛生芽长势健壮 。
3.2　生根培养　在诱导丛生芽的培养基中 ,点地梅就有少量根长出 ,含 0.4 mg/LNAA的培养基的培养效
果理想 ,所产生的根健壮 ,苗出瓶移栽后生根率为 100%,植株健壮。在诱导愈伤组织中有少量根长出 ,这
可能是 6-BA与 NAA的效应因内 、外源激素的含量不同而不同 ,因为内 、外源激素对植物离体培养形态
发生起着相互的连续性作用[ 10] , 这还需要进一步的研究 。
·69·第 5期 韩素菊等:点地梅丛生芽技术研究
参考文献:
[ 1] 　肖培根 , 杨世林.实用中草药原色图谱(四):草药类 [ M] .北京:中国农业出版社 , 2002:258-259.
[ 2] 　王莲英.养花实用手册 [ M] .合肥:安徽科学技术出版社 , 2003:215-216.
[ 3] 　李红 , 燕玲 ,鲍芫 , 等.5种干旱区野生观赏植物染色体数目及其核型分析 [ J] .干旱区资源与环境 , 2005, 19(2):183 -
187.
[ 4] 　李承花 , 殷志琦 ,黄晓君 ,等.点地梅的化学成分 [ J] .中国天然药物 , 2008, 6(2):123-125.
[ 5] 　杨德奎.点地梅的染色体研究 [ J] .山东科学 , 2002.15(3):9-11.
[ 6] 　燕玲 , 李红 ,段淳清 , 等.13种野生观赏植物种子特性的研究 [ J] .干旱区资源与环境 , 2004, 18(5):151- 158.
[ 7] 　NieYong.Efectof2, 4-DandBAonCallusInductionofAndrosaceumbelate(Lour.)Merr.[ J] .JournalofAbaTeachers
Colege, 2006, 23(4):126-128.
[ 8] 　MurashigeT, SkoogF.Arevisedmediumforrapidgrowthandbioassayswithtobaccotissuecultures[ J] .PhysiolPlant,
1962, 5:473 - 497.
[ 9] 　SkoogF, MilerCO.Chemicalregulationofgrowthandorganformationinplanttissuecultureinvitro[ J] .SympSocExpBiol,
1957, 11:118-131.
[ 10] 崔凯荣 , 邢更生 ,周功克 , 等.植物激素对体细胞胚胎发生的诱导与调节 [ J] .遗传 , 2000, 22(5):349-354.
TissueCultureandRapidPropagationTechnique
ofAndrosaceumbelata(Lour.)Merr.
HANSu-ju1 , LIYun-xiang2 , NIEYong2 , WANGHuai-yu1
(1.DepartmentmentofFacilityManagement, MianyangNormalUniversity, Mianyang, Sichuan, 621000;
2.SichuanProvincialKeyLaboratoryofEnvironmentalScienceandBiologicalDiversityConservation,
ChinaWestNormalUniversity, Nanchong, 637002;
3.SchoolofUrbanandRuralPlanningandConstruction, MianyangNormalUniversity, Mianyang, 621000)
Abstract:AsuccessfulmicropropagationtechniqueofAndrosaceumbelata(Lour.)Merr.hasbeenestab-
lishedfromtheexplantsofseedlings.Theresultshowsthat:(1)MSmediums, with0.5mg/LNAAand3.0mg/
LBA, couldpromotethegrowthofvegetativeauxiliarybudsandregenerationofplentifullateralbuds;(2)Shoots
derivedfromauxiliaryandlateralbudscouldformrootsonMSmediumwith0.4 mg/LNAA, andtherateofthe
inducementinthemediumisupto100%.
Keywords:Androsaceumbelata(Lour.)Merr;tissueculture;rapidpropagation
(上接第 66页)
PolymorphismoftheIntron9andPromoter2 ofcyp19GeneinTibetanSheep
WANGJin-ling1 , WANGYong2 , ZHENGYu-cai2 , XUYa-ou2 , HUYu3 , LIULu-shu2 , TAOYong-ping3
(1.MianyangNormalUniversity, Mianyang, Sichuan　621000;
2.ColegeofLifeScienceandTechnology, SouthwestUniversityfor
Nationalities, Chengdu, Sichuan　610041;
3.RuoergaiBureauofAgricultureandAnimalHusbandry, Ruoergai, Sichuan　624500)
Abstract:PCR-RFLPwasemployedtoanalyzethepolymorphismofcyp19 geneintron9 andpromoter2
forTibetanSheep.Theresultshowedthatintron9gene-547-773 segmentdigestedwithHaeIIdemonstrated
polymorphism, anditwasatHardy-Weinbergequilibrium.Promoter2gene-683-1199segmentdigestedwith
DraIdidntdemonstratedpolymorphism.
Keywords:TibetanSheep;cyp19;polymorphism
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