全 文 ：第４０卷第２期
２０１３年３月
浙　江　大　学　学　报（理学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）
ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｊｏｕｒｎａｌｓ．ｚｊｕ．ｅｄｕ．ｃｎ／ｓｃｉ
Ｖｏｌ．４０Ｎｏ．２
Ｍａｒ．２０１３
收稿日期：２０１１－１１－２９．
基金项目：国家科技部国家科技攻关计划引导项目（２００５ＢＡ７４１Ｃ）；吉林省科技厅基金资助项目（２００７０５Ｃ０５）．
作者简介：顾地周（１９７３－），男，讲师，主要从事珍稀濒危植物及其药用植物研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｕｄｉｚｈｏｕ＠１６３．ｃｏｍ．
ＤＯＩ：１０．３７８５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８－９４９７．２０１３．０２．０２０
天目铁木愈伤组织和芽苗诱导技术
顾地周，陆　爽，巴春影，李媛媛
（通化师范学院 生物系，吉林 通化１３４００２）
摘　要：以天目铁木嫩茎尖为外植体，应用均匀设计法筛选其基部愈伤组织诱导和愈伤组织再分化芽苗的最适合
培养基．结果表明，最适合的嫩茎尖基部愈伤组织诱导培养基为１／２ＤＲ＋ＴＤＺ　２．３０ｍｇ·Ｌ－１＋２，４－Ｄ　０．５５
ｍｇ·Ｌ－１，诱导率为９３．５％；愈伤组织芽苗再分化培养基为１／２ＤＲ＋ＴＤＺ　３．３０ｍｇ·Ｌ－１＋ＫＴ　０．７０ｍｇ·Ｌ－１，分
化率达９９．８％以上．成功建立了天目铁木嫩茎尖离体诱导愈伤组织和芽苗再分化体系，且再生芽苗与野生植株染
色体数目相同．
关　键　词：天目铁木；愈伤组织；诱导；再分化；均匀设计
中图分类号：Ｑ　９４５．５；Ｑ　９４９．７３６．２　　　　文献标志码：Ａ　　　　文章编号：１００８－９４９７（２０１３）０２－２１６－０５
ＧＵ　Ｄｉ－ｚｈｏｕ，ＬＵ　Ｓｈｕａｎｇ，ＢＡ　Ｃｈｕｎ－ｙｉｎｇ，ＬＩ　Ｙｕａｎ－ｙｕａｎ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｔｏｎｇｈｕａ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
Ｔｏｎｇｈｕａ１３４００２，Ｊｉｌｉｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ）
Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｏｆ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｂｕｄ　ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｏｆ　Ｏｓｔｒｙａ　ｒｅｈｄｅｒｉａｎａ　Ｃｈｕｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅ－
ｄｉｔｉｏｎ），２０１３，４０（２）：２１６－２２０
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｔｅｎｄｅｒ　ｓｔｅｍ　ｔｉｐｓ　ｏｆ　Ｏｓｔｒｙａ　ｒｅｈｄｅｒｉａｎａ　Ｃｈｕｎ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｅｘｐｌａｎｔ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ
ｗｅｒｅ　ｓｃｒｅｅｎｅｄ　ｆｏｒ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｈｏｏｔｓ　ｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｕｎｉｆｏｒｍ　ｄｅｓｉｇｎ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ
ｓｈｏｗ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｍｏｓｔ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍｓ　ｗｅｒｅ　ａｓ　ｆｏｌｏｗｓ：１／２ＤＲ＋ＴＤＺ　２．３０ｍｇ·Ｌ－１＋２，４－Ｄ　０．５５ｍｇ·Ｌ－１
ｆｏｒ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ａｔ　ｂａｓｅ　ｏｆ　ｔｅｎｄｅｒ　ｓｔｅｍ　ｔｉｐ，ｔｈｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｗａｓ　９３．５％；１／２ＤＲ＋ＴＤＺ　３．３０ｍｇ·Ｌ－１＋ＫＴ
０．７０ｍｇ·Ｌ－１　ｆｏｒ　ｓｈｏｏｔｓ　ｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　９９．８％．Ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ
ｓｈｏｏｔｓ　ｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　Ｏｓｔｒｙａ　ｒｅｈｄｅｒｉａｎａ　Ｃｈｕｎ　ｈａｖｅ　ｂｅｅｎ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｙ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ，ａｎｄ　ｒｅｇｅｎｅｒａ－
ｔｉｏｎ　ｂｕｄｓ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ　ａｎｄ　ｗｉｌｄ　ｐｌａｎｔ　ｈａｖｅ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　ｎｕｍｂｅｒ．
Ｋｅｙ　Ｗｏｒｄｓ：Ｏｓｔｒｙａ　ｒｅｈｄｅｒｉａｎａ　Ｃｈｕｎ；ｃａｌｕｓ；ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ；ｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ；ｕｎｉｆｏｒｍ　ｄｅｓｉｇｎ
　　天目铁木（Ｏｓｔｒｙａ　ｒｅｈｄｅｒｉａｎａ　Ｃｈｕｎ）是桦木科
铁木属植物，１９９９年８月４日被国务院批准为国
家Ⅰ级重点保护野生植物［１，２］，仅分布于浙江西
天目山，为浙江天目山特有的珍稀树种，目前野
生植株仅存５株．天目铁木不仅是中国特有种，
而且是该属分布于中国东部的唯一种，具重要研
究价值．
天目铁木的自身繁殖能力极差，人工利用种子
和扦插等常规繁殖极其困难，导致了该物种的人工
种群非常少，处于极度濒危状况．因此，本研究以天
目铁木嫩茎尖为材料，采用植物组织培养技术，应用
均匀设计法筛选天目铁木嫩茎尖基部愈伤组织诱导
和愈伤组织再分化芽苗各阶段的培养基．目前，关于
天目铁木的研究已有报道［３－５］，但天目铁木离体培
养的报道在国内外迄今未见．
１　材料与方法
１．１　材料来源与处理
２０１１年４月于浙江省西天目山采集天目铁木
枝条，并将枝条于实验室内水培使其茎节伸长为嫩
枝．待茎尖伸长并长至２ｃｍ以上时切取成１ｃｍ嫩
茎尖，用７０％（体积分数）酒精涮洗８ｓ，再用３％（质
量浓度）的次氯酸钠溶液浸泡６ｍｉｎ，无菌水冲洗８
次，并切除杀菌消毒剂损伤部分，无菌滤纸吸干表面
水分后作为外植体备用．
１．２　天目铁木嫩茎尖基部愈伤组织诱导培养基的
筛选
　　培养基为１／２ＤＲ［６］，附加不同质量浓度的噻苯
隆ＴＤＺ和生长素２，４－Ｄ（由预试验确定 ＴＤＺ和
２，４－Ｄ的使用范围分别为１．７０～２．２０ｍｇ·Ｌ－１和
０．２０～０．５０ｍｇ·Ｌ－１），内含蔗糖５０ｇ·Ｌ－１，琼脂
粉６．８ｇ·Ｌ－１，调节ｐＨ值至５．６，茎尖接种到培养
基中，置于温度为（２７±２）℃、光照周期１０ｈ·ｄ－１
和光照强度１　０００ｌｘ条件下培养，为了提高天目铁
木愈伤组织的诱导率和诱导速度，采用均匀设计
法［７－１０］，选用Ｕ１２（１２２）均匀表，每个处理接种茎尖
数为１０，重复３次取平均值，考察ＴＤＺ和２，４－Ｄ不
同质量浓度交叉配比对愈伤组织诱导率的影响．嫩
茎尖培养３５ｄ统计诱导率，筛选最适合天目铁木嫩
茎尖基部愈伤组织诱导的培养基．
１．３　天目铁木愈伤组织芽苗再分化培养基的筛选
培养基为１／２ＤＲ，并附加不同浓度的 ＴＤＺ、
ＩＡＡ和ＫＴ（由预试验确定 ＴＤＺ、ＩＡＡ和 ＫＴ的使
用范围分别为２．６０～３．１０、０．１０～０．２０和０．２０～
０．７０ｍｇ·Ｌ－１），加入蔗糖５０ｇ·Ｌ－１，琼脂６．８
ｇ·Ｌ－１，调节ｐＨ 值至５．６，将愈伤组织放在温度
（２６±２）℃、光照周期１４ｈ·ｄ－１和光照强度
１　５００ｌｘ条件下培养．选用 Ｕ１２（１２３）均匀表，每个
处理接种愈伤组织块数为１０，重复３次取平均值，
考察ＴＤＺ、ＩＡＡ和 ＫＴ不同质量浓度交叉配比对
芽苗分化率的影响．愈伤组织培养４５ｄ统计分化
率，同时筛选最适合天目铁木愈伤组织芽苗分化
的培养基．
１．４　染色体数目测定与观察
采用涂片法进行染色体制备，待愈伤组织分化
后，在丛生芽中选取０．３０～０．５０ｍｍ的嫩芽（随机
抽取１０瓶，每瓶随机选择１０个嫩芽），切取茎尖生
长点部分在对二氯苯饱和水溶液中处理６ｈ，再经
过前低渗、去壁、后低渗、固定、涂片、火焰干燥、染色
后于显微镜下观察染色体数目．
１．５　数据处理与分析
实验设计采用均匀设计法，数据分析与处理应
用均匀设计软件．
２　结果与分析
２．１　ＴＤＺ和２，４－Ｄ不同质量浓度配比对天目铁木
嫩茎尖基部愈伤组织诱导的影响
表１　天目铁木嫩茎尖基部愈伤组织诱导因素的
Ｕ１２（１２２）均匀设计实验安排与结果
Ｔａｂｌｅ　１　Ｕ１２（１２２）ｕｎｉｆｏｒｍ　ｄｅｓｉｇｎ　ｔｅｓｔ　ｐｌａｎ　ａｎｄ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ
ｆａｃｔｏｒｓ　ｆｏｒ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ａｔ　ｂａｓｅ　ｏｆ　ｔｅｎｄｅｒ　ｓｔｅｍｓ　ｔｉｐ　ｏｆ
Ｏｓｔｒｙａ　ｒｅｈｄｅｒｉａｎａ
编号Ｎｏ．
因素Ｆａｃｔｏｒｓ／（ｍｇ·Ｌ－１）
ＴＤＺ　Ｘ１ ２，４－Ｄ　Ｘ２
诱导率
Ｒａｔｅ　ｏｆ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ／％
１　 １．７０　 ０．５０　 ７９．１
２　 １．８０　 ０．３０　 ７６．９
３　 １．９０　 ０．３０　 ７７．６
４　 ２．００　 ０．３０　 ７８．３
５　 ２．１０　 ０．５０　 ８１．９
６　 ２．２０　 ０．５０　 ８６．４
７　 ２．２０　 ０．２０　 ７８．２
８　 ２．１０　 ０．２０　 ７７．５
９　 ２．００　 ０．４０　 ７９．７
１０　 １．９０　 ０．４０　 ８８．０
１１　 １．８０　 ０．４０　 ７８．４
１２　 １．７０　 ０．２０　 ６２．６
　　由表１和３可知，ＴＤＺ和２，４－Ｄ对天目铁木愈
伤组织的诱导率均有显著影响．二者最佳质量浓度
分别为２．２０和０．５０ｍｇ·Ｌ－１，经计算，ＴＤＺ和２，
４－Ｄ对诱导率的贡献率分别为４４．７％和５５．３％，可
见２，４－Ｄ对愈伤组织诱导率的影响大于ＴＤＺ，又因
ＴＤＺ和２，４－Ｄ均与诱导率呈正相关，因此，推测当
ＴＤＺ和２，４－Ｄ的质量浓度分别高于２．２０和０．５０
ｍｇ·Ｌ－１时，诱导率更高．为验证此推断，另设ＴＤＺ
质量浓度为２．２０、２．２５、２．３０、２．３５、２．４０、２．４５、
２．５０ｍｇ·Ｌ－１，２，４－Ｄ 质量浓度为０．５０、０．５５、
０．６０、０．６５、０．７０、０．７５、０．８０ｍｇ·Ｌ－１做了１４个处
理的补充试验．即将天目铁木嫩茎尖接种到附加
ＴＤＺ　２．３０ｍｇ·Ｌ－１和２，４－Ｄ　０．５５ｍｇ·Ｌ－１的１／
２ＤＲ培养基上进行愈伤组织诱导培养，培养１０ｄ，
基部切口处开始出现膨胀；继续培养至２５ｄ，在切口
处产生浅黄绿色表面粗糙的愈伤组织（见图１（ａ））；
培养至３５ｄ，愈伤组织逐渐增大，浅黄绿色转变为黄
绿色（见图１（ｂ））．试验结果发现，ＴＤＺ质量浓度为
２．３０ｍｇ·Ｌ－１和２，４－Ｄ质量浓度为０．５５ｍｇ·Ｌ－１
时愈伤组织诱导率最高，诱导率达９３．５％，比表１中
１２个处理的诱导率均高．因此，天目铁木嫩茎尖基部
愈伤组织诱导的最佳培养基为１／２ＤＲ＋ＴＤＺ　２．３０ｍｇ
·Ｌ－１＋２，４－Ｄ　０．５５ｍｇ·Ｌ－１．
７１２　第２期 顾地周，等：天目铁木愈伤组织和芽苗诱导技术
图１　天目铁木愈伤组织和芽苗诱导各阶段的培养物形态
Ｆｉｇ．１　Ｍｏｒｐｈｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｃｕｌｔｕｒｅｓ　ｏｆ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｂｕｄ　ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｏｆ　Ｏｓｔｒｙａ　ｒｅｈｄｅｒｉａｎａ　Ｃｈｕｎ　ａｔ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｓｔａｇｅｓ
２．２　ＴＤＺ、２，４－Ｄ和ＫＴ不同浓度配比对天目铁木
愈伤组织芽苗再分化的影响
表２　天目铁木芽苗再分化因素的Ｕ１２（１２３）
均匀设计实验安排与结果
Ｔａｂｌｅ　２　Ｕ１２（１２３）Ｕｎｉｆｏｒｍ　ｄｅｓｉｇｎ　ｔｅｓｔ　ｐｌａｎ　ａｎｄ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ
ｆａｃｔｏｒｓ　ｆｏｒ　ｓｈｏｏｔｓ　ｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｏｓｔｒｙａ　ｒｅｈｄｅｒｉａｎａ
编号
Ｎｏ．
因素Ｆａｃｔｏｒｓ／（ｍｇ·Ｌ－１）
ＴＤＺ　Ｘ１ ＩＡＡ　Ｘ２ ＫＴ　Ｘ３
分化率
Ｒａｔｅ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ／％
１　 ２．６０　 ０．１０　 ０．４０　 ５８．２
２　 ２．７０　 ０．１０　 ０．７０　 ７３．７
３　 ２．８０　 ０．１５　 ０．５０　 ７６．６
４　 ２．９０　 ０．１５　 ０．２０　 ７７．８
５　 ３．００　 ０．２０　 ０．３０　 ８４．５
６　 ３．１０　 ０．２０　 ０．６０　 ９６．４
７　 ２．６０　 ０．２０　 ０．６０　 ６７．３
８　 ２．７０　 ０．２０　 ０．３０　 ６５．０
９　 ２．８０　 ０．１５　 ０．２０　 ７２．０
１０　 ２．９０　 ０．１５　 ０．５０　 ８１．８
１１　 ３．００　 ０．１０　 ０．７０　 ９０．６
１２　 ３．１０　 ０．１０　 ０．４０　 ９１．２
　　由表２和３可知，ＴＤＺ和ＫＴ对天目铁木愈伤
组织的芽苗再分化率均有显著影响．二者最佳质量
浓度分别为３．１０和０．７０ｍｇ·Ｌ－１，经计算，ＴＤＺ
和ＫＴ对芽苗分化率的贡献率分别为９２．３％和
７．６７％，可见ＴＤＺ对愈伤组织芽苗再分化率的贡献
远大于 ＫＴ，又因 ＴＤＺ和 ＫＴ均与分化率呈正相
关，推测 ＴＤＺ和 ＫＴ质量浓度分别高于３．１０和
０．７０ｍｇ·Ｌ－１时，芽苗分化率更高．为验证此推断，
另设ＴＤＺ质量浓度分别为３．１０、３．１５、３．２０、３．２５、
３．３０、３．３５、３．４０、３．４５、３．５０ｍｇ·Ｌ－１，ＫＴ质量浓
度分别为０．７０、０．７５、０．８０、０．８５、０．９０、０．９５、１．００
ｍｇ·Ｌ－１做了９个处理的试验．即待嫩茎尖基部直
接愈伤组织长至１．５０ｃｍ（直径）以上时，将愈伤组
织切下，并切割成０．５０ｃｍ（直径）的小块，将其接种
到附加ＴＤＺ　３．３０ｍｇ·Ｌ－１和ＫＴ　０．７０ｍｇ·Ｌ－１的
１／２ＤＲ培养基上进行验证试验，培养１５ｄ发现愈伤
组织表面产生大量颗粒状小凸起（见图１（ｃ）），继续
培养至３０ｄ，小凸起由颗粒状逐渐变为锥状，培养至
４５ｄ，锥状体伸长并生长为大量不定芽，此时不定芽
长度可达２．５０ｃｍ 以上（见图１（ｄ））．结果发现，
ＴＤＺ质量浓度为３．３０ｍｇ·Ｌ－１，ＫＴ质量浓度为
０．７０ｍｇ·Ｌ－１时愈伤组织分化率最高，达９９．８％，
且比表２所列１２个处理的分化率均高．可见，天目
铁木嫩茎尖愈伤组织芽苗再分化的最佳培养基为
１／２ＤＲ＋ＴＤＺ　３．３０ｍｇ·Ｌ－１＋ＫＴ　０．７０ｍｇ·Ｌ－１．
表３　天目铁木愈伤组织诱导和芽苗分化各阶段的回归分析结果
Ｔａｂｌｅ　３　Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｃａｌｕｓ　ａｎｄ　ｓｈｏｏｔｓ　ｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｉｎ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｓｔａｇｅｓ　ｏｆ　Ｏｓｔｒｙａ　ｒｅｈｄｅｒｉａｎａ
培养阶段 回归方程 复相关系数Ｒ 剩余标准差Ｓ 检验值Ｆｔ
愈伤组织诱导 Ｙ＝３１．８＋１８．２　Ｘ１＋３０．９　Ｘ２ ０．８　８１２　 ２．８　８００　 １５．６３
芽苗再分化 Ｙ＝－１０５＋６１．５　Ｘ１＋１７．７　Ｘ３ ０．９　９１３　 １．６　７００　 ２５６．５０
　　注　样本容量Ｎ＝１２，显著性水平α＝０．０５，临界值Ｆ（０．０５，２，９）＝４．２５６
２．３　染色体测定结果
按照１．４节中的方法对天目铁木野生植株和
２．２节中再分化的芽苗进行染色体数目测定的结果
表明，随机抽取的愈伤组织再分化芽苗的细胞染色
体有丝分裂中期的数目均为２ｎ＝２ｘ＝１６．
３　结论与讨论
本研究成功建立了天目铁木茎尖愈伤组织诱导
和再分化芽苗体系．培养基１／２ＤＲ＋ＴＤＺ　２．３０
ｍｇ·Ｌ－１＋２，４－Ｄ　０．５５ｍｇ·Ｌ－１对天目铁木嫩茎尖
基部愈伤组织的诱导效果最好．当２，４－Ｄ质量浓度
低于０．２０ｍｇ·Ｌ－１时愈伤组织诱导率均在５０．０％
以下，当２，４－Ｄ质量浓度高于０．５５ｍｇ·Ｌ－１时尽管
愈伤组织诱导速度快，但愈伤组织很快褐化死亡，可
能是高浓度的２，４－Ｄ诱导愈伤组织产生大量的乙烯
等有害物质所致，说明天目铁木嫩茎尖基部愈伤组
织诱导需要适宜浓度的２，４－Ｄ；但在愈伤组织诱导过
８１２ 浙 江 大 学 学 报（理学版）　 第４０卷　
程中需要附加一定浓度的ＴＤＺ，否则愈伤组织褐化率
增高，这可能是适当浓度的ＴＤＺ有助于抑制２，４－Ｄ
诱导愈伤组织产生乙烯，从而抑制了愈伤组织的衰
老［１１，１２］．培养基１／２ＤＲ＋ＴＤＺ　３．３０ｍｇ·Ｌ－１＋ＫＴ
０．７０ｍｇ·Ｌ－１对天目铁木嫩茎尖愈伤组织芽苗分
化的诱导率较高，当ＴＤＺ的质量浓度低于２．６０ｍｇ
·Ｌ－１和高于３．３０ｍｇ·Ｌ－１时分化率均低于７０％，
说明天目铁木愈伤组织再分化需要一定浓度的
ＴＤＺ，而过高浓度的ＴＤＺ对愈伤组织芽苗分化起抑
制作用．在培养基中附加适当的 ＫＴ有利于提高愈
伤组织分化芽苗的速度和分化率，且芽苗健壮、形态
好、长势强．培养基中存在生长素时，尽管愈伤组织
也分化芽苗，但每团愈伤组织上分化的芽苗显著减
少，有的只增殖愈伤组织而不分化芽苗，分化率和芽
苗增殖降低，可能是不同植物对不同植物生长调节
物质具有选择性，这是由植物自身的基因型控制的，
而基因型又决定于器官重建．通过对愈伤组织再分
化的芽苗形态和染色体数目测定，结果证明了再分
化的芽苗与野生植株染色体数目相同（２ｎ＝１６）．本
实验观察到的愈伤组织再分化的天目铁木芽苗染色
体数目与文献［３］报道的野生植株染色体数目是一
致的，说明经过本方法诱导产生的芽苗种质没有
改变．
天目铁木是我国珍稀野生植物资源，至今人工
繁育技术尚未取得突破，因而未能得到大量繁殖和
形成人工林．本研究结果为天目铁木的工厂化育苗、
扩大人工种群和种质资源保存奠定了基础．
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ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｐｏｌｅｎ，ｓｅｅｄ　ａｎｄ　ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｏｆ　Ｏｓｔｒｙａ
ｒｅｈｄｅｒｉａｎａ　Ｃｈｕｎ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｓｃｉ－
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［１２］　ＲＯＢＥＲＴ　Ｗ　Ｇ，ＭＡＲＥＫ　Ｓ　Ｏ，ＬＡＩ　Ｇ．Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ
Ｎ－ｎｉｔｒｏｓｏｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ　ｗｉｔｈ　ｇｒａｎｕｌａｒ　ｉｒｏｎ　ａｎｄ　Ｎｉｃｋ－
ｅｌ－ｅｎｈａｎｃｅｄ　ｉｒｏｎ．１．Ｐａｔｈｗａｙｓ　ａｎｄ　Ｋｉｎｅｔｉｃｓ［Ｊ］．Ｅｎｖｉ－
ｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０００，３４（１６）：３４８９－
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［１３］　ＲＯＢＥＲＴＳ　Ａ　Ｌ，ＬＩＳＡ　Ａ　Ｔ，ＷＩＬＬＩＡＭ　Ａ　Ａ，ｅｔ　ａｌ．
Ｒｅｄｕｃｔｉｖｅ　ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｈｌｏｒｉｎａｔｅｄ　ｅｔｈｙｌｅｎｅｓ　ｂｙ　ｚｅｒｏ－
ｖａｌｅｎｔ　ｍｅｔａｌｓ［Ｊ］．Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌ－
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［１４］　ＤＯＮＡＬＤ　Ｒ　Ｂ，ＤＥＡＮ　Ｗ　Ｍ，ＪＡＭＥＳ　Ｅ　Ａ，ｅｔ　ａｌ．
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｉｒｏｎ　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ
ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ａｄｄｅｄ　Ｃｕ，Ｐｄ，ａｎｄ　Ｎｉ［Ｊ］．Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎ－
ｔａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，４４：５０７９－５０８５．
［１５］　ＧＲＡＨＡＭ　Ｌ　Ｊ，ＪＡＶＯＮＯＶＩＣ　Ｇ．Ｄｅｃｈｌｏｒｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ
ｐ－ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｏｌ　ｏｎ　ａ　Ｐｄ／Ｆｅ　ｃａｔａｌｙｓｔ　ｉｎ　ａ　ｍａｇｎｅｔｉｃａｌｙ
ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ　ｆｌｕｉｄｉｚｅｄ　ｂｅｄ：Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｓｌｕｄｇｅ　ａｎｄ
ｌｉｑｕｉｄ　ｒｅｍｅｄｉａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，
１９９９，５４（１５）：３０８５－３０９３．
０２２ 浙 江 大 学 学 报（理学版）　 第４０卷