全 文 ： 专　栏
　 中药与天然药
基金项目:江西省教育厅科技计划项目资助课题 ,课题编号:C 2002089
作者简介:李青松(1953 -),男 ,教授 ,主要从事天然药物研究
琴叶榕根中黄酮类化合物的提取条件研究
李青松 ,丁冶春 ,王瑞琦 ,范小娜 ,林建原 ,黄志勤 ,胡志苹 ,程庚金生 (赣南医学院 ,江西　赣州 341000)
摘要:目的　探讨琴叶榕根中以芦丁为标准的总黄酮含量的最佳提取条件。方法　采用碱 、石油醚及不同体积分数的乙醇为
溶剂 , 在不同温度 、时间条件下分别从琴叶榕根中提取总黄酮。结果　在碱提取法 、石油醚提取法 、醇提取法中以醇提取法效
果最佳。最佳提取条件为用 30倍量体积分数为 60%乙醇 , 70℃条件下浸提 2h。结论　本实验结果可靠 , 方法简便 , 最佳条件
适合批量生产中该药材的提取。
关健词:琴叶榕;黄酮类化合物;提取条件
中图分类号:R284. 2　　　文献标识码:A　　　文章编号:1007-7693(2006)01-0028-03
Research on the best condition to ex tract flavonoids from F icus pandura ta root
LIQ ing Song, D ING Ye-chun ,WANG Rui-qi, FAN X iao-na, LIN Jian-yuan, HUANG Zhi-qin, HU Zhi-p ing, CHEN
G eng jinsheng(GannanM edica lCollege, Ganzhou 341000, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To op tim ized the ex trac t condition of flavonoids from F icus pandura ta roo.t METHODS　F lavonoids in
F icus pandura ta roo tw ere ex trac ted in differen t tem pe ra ture, tim e condition and differen t so lvent, inc lud ing petro leum ethe r and d iffe r-
ent density e thano.l RESULTS　E thano l was the best so lven t to extract flavono ids from F icus pandurata roo.t The optim ized condi-
tions we re 60% e thano l, solid-liquid ra tio 1∶2 and 2 hours imm erge ex trac t a t 70℃. CONCLUSION　Them ethod is sim ple, conven-
ien t, and can be apply to ex tract flavonoids in la rge scale.
KEY WORDS:F icus pandura ta H amee;flavono ids;ex trac t condition
　　琴叶榕又称牛奶子 , 系桑科落叶小灌木 , 生长于山地灌
木丛 , 疏林中或村落旁 , 分布江西 、广东 、云南 、福建等地 , 尤
其是江西赣南地区资源丰富。据《江西民间草药验方》记载 ,
其主治祛风除湿 , 清热解毒 , 具有治疗疟疾 , 黄疸 , 痛经 , 乳
痛 , 腰酸背痛 ,消除炎症等功效。琴叶榕根提取液治疗细菌
性前列腺炎具有显著疗效 [ 1] 。本实验就琴叶榕根中黄酮类
化合物的提取条件进行了研究 ,探索提取黄酮类化合物的最
佳条件。
1　原料 、试剂和仪器
1. 1　原料
琴叶榕根 , 采集于江西省于都县银坑乡。由赣南医学院
附属医院药剂科徐小军副主任药师鉴定为桑科琴叶榕(F icus
pandurata Ham ce)。
1. 2　试剂
乙醇(AR),石油醚 , 亚硝酸钠 , 三氧化铝 , 氢氧化钠 , 四
氯化碳 , 氯仿 ,硅藻土。
1. 3　仪器
WZF -D4紫外可见分光光度计 (北京瑞利分析仪器公
司生产),分析天平 (上海分析仪器厂生产), 离心机 , 真空
泵 , 组织捣碎机 ,脂肪抽提器 ,萃取瓶。
2　实验方法
2. 1　总黄酮的提取
2. 1. 1　工艺流程
琴叶榕根→干燥→粉碎→抽取→过滤→浓缩→离心过
滤→粗提取液→萃取→沉淀处理→离心分离→真空干燥→
产品。
2. 1. 2　工艺要点　①原料处理:将采集的琴叶榕根洗净 ,晾
干 , 置于恒温干燥箱中于 75℃下干燥 8h, 取出用组织粉碎机
捣碎 , 过筛(40目), 所得粉末于试剂瓶中 , 干燥保存备用。
②提取:参照 “ 2. 2”所述方法。 ③沉淀处理:含黄酮类物质的
粗滤液 , 加氯仿萃取两次 , 调节 pH为 4. 0, 加硅藻土 , 搅拌均
匀后 , 放置 1h。 ④离心分离:将絮状沉淀的浸提取液装入离
心管中进行离心处理 , 转速为 400 r /m in, 除去絮状沉淀物
质 , 以提高黄酮的纯度。 ⑤真空干燥 , 保持真空度为 700 ～
750 mmHg, 干燥 8h, 再粉碎过 100目筛 , 即得产品。
2. 2　提取方法的选择
28 Ch in JMAP, 2006 Feb ruary, Vo.l 23 N o. 1　　　　　　　　　　　　　　　中国现代应用药学杂志 2006年 2月第 23卷第 1期
DOI牶牨牥牣牨牫牱牬牳牤j牣cnki牣issn牨牥牥牱牠牱牰牴牫牣牪牥牥牰牣牥牨牣牥牨牥
据报道 , 黄酮类化合物常用的提取方法有碱提取法 , 有
机溶剂提取法等 [ 2-3] , 综合考虑各种因素 , 我们选定碱提取
法 , 石油醚抽提法 ,乙醇提取法进行比较实验 , 以找出最佳的
提取方法。三种提取工艺流程如下:
2. 2. 1　碱提取法流程　称取琴叶榕根粉末 15g→加水(样重
6倍量)→水浴加热 85℃→加石灰乳 (调至 pH 8 ～ 9)→过滤
→滤液→测吸光度。
2. 2. 2　石油醚抽提法流程　称取琴叶榕根粉末 15g→石油
醚回流抽提 (样重 7 ～ 8倍 , 2h, 75℃)→过滤→滤液→ 测吸
光度。
2. 2. 3　乙醇浸取法流程　称取琴叶榕根粉末 15g→酒精浸
取(70℃, 2h)→过滤→滤液→测吸光度。
2. 3　工艺参数的筛选
据文献资料 [ 2, 4]及综合因素 , 选用乙醇浓度 、提取温度 、
提取时间和乙醇溶液用量作参考因素 , 以测定的浸取提取液
中总黄酮含量作参考指标 ,进行正交试验 , 以确定最佳条件 ,
每次用 10g琴叶榕根粉末 ,用分光光度法测定提取液吸光度
值 , 根据标准曲线计算粗提取液的总黄酮含量。
2. 4　总黄酮的测定
2. 4. 1　方法与原理　黄酮类化合物常含有下列结构单元 ,
故常与铝盐 、锆盐 、镁盐等试剂反应 ,生成有色配合物。
其检测方法常用可见分光光度法或液相色谱法。分光
光度法采用黄酮与 A l3+在碱性条件下与三氯化铝形成黄色
的黄酮的铝配合物 , 黄色的深浅与黄酮含量呈正比关系。以
芦丁作标准 , 在 510nm波长处测定其吸光度。
2. 4. 2　标准曲线绘制　准确称取芦丁标准试剂 0. 08456g,
用体积分数为 60%乙醇溶液溶解完全 ,转入 250mL量瓶中 ,
用体积分数为 60%乙醇定容至刻度。分别吸取上述标准溶
液 0, 1, 2, 4, 6, 8mL于 6只 25mL的量瓶中 , 加入 2. 0mL 1%
NaNO
2
溶液 , 摇匀 ,放置 5m in, 加入 2. 0mL 1%AlC l
3
, 摇匀 ,放
置 5m in。再加入 10m L 1mo l L- 1NaOH溶液 , 用 60%乙醇定
容。 10 m in后在波长为 510nm处分别测定其吸光度。结果
见表 1,标准曲线如图 1。
表 1　芦丁浓度—吸光度表
Tab 1　Absorbency of d iffe rent ru tin concen tra tion
标准溶液(mL) 浓度(g L - 1) 吸光度 A
0 0 0
1 0. 0135 0. 081
2 0. 0270 0. 16
4 0. 0540 0. 32
6 0. 0810 0. 48
8 0. 1080 0. 58
　　用最小二乘法进行线性回归 , 由标准曲线得回归方程
为:A=6. 976X -0. 0234相关系数 R=0. 9979提取液中黄酮
浓度(g /L)=0. 1765+0. 001黄酮(产品)吸光度测定:取实
图 1　芦丁-吸光度标准曲线
F ig 1　Standard curve o f ru tin concentra tion and abso rbency
验所得的浓缩液 1mL, 按照标准溶液配制方法处理 , 以标准
液中的空白液为参比液 ,在 510nm处测其吸光度。根据吸光
度和标准曲线计算出各提取液的黄酮含量。
3　结果与分析
3. 1　提取方法
不同的浸提法测定结果见表 2。
表 2　不同提取方法的吸光度值
Tab 2　Absorbency o f sam ple ex trac ted by differen tm e thod
浸提方法 吸光度
碱提取法 0. 199
石油醚抽提法 0. 411
醇浸提法 0. 780
　　由表 2可知 , 碱提取法收率较低 , 且提取液存放时会腐
败变质。考虑到提取率 , 溶剂回收 ,操作难易程度等因素确
定乙醇浸提法为最佳提取方法。
3. 2　抽提条件的确定
根据张迪清等 [ 3] 、胡敏 [ 4]报道 , 银杏叶中黄酮化合物的
提取乙醇浓度 ,提取浓度 ,提取时间 ,乙醇用量有关。据此进
行单因素水平试验 ,结果见图 2。
图 2　黄酮化合物单因素水平试验
F ig 2　Sing le-fac to r experim ent of flavono ids
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　　根据单因素水平试验结果 , 设计出乙醇提取工艺水平
表 , 见表 3。
　　根据表 3进行正交实验 , 按主次指标 ,分别将总黄酮的
提取率及粗黄酮的量进行极差分析和方差分析 ,结果见表 4,
表 5。根据主要指标的极差大小顺序和方差分析结果 , 认定
各因素主次顺序为 DACB ,最佳工艺条件为 D3A 2C2B2 , 即用
30倍原料重的体积分数为 60%乙醇溶液在 70℃条件下浸取
2h, 黄酮的提取率最高。
表 3　乙醇提取工艺水平表 L9(34)
Tab 3　The techno log ical leve l table o f ethano l distilling
水平 因　素
浸提温度(A) 乙醇浓度(B) 浸提时间(C) 溶液用量(D)
1 50℃ 30% 1h 1∶10
2 70℃ 60% 2h 1∶20
3 90℃ 90% 3h 1∶30
表 4　L
9
(34)正交试验设计及结果表
Tab 4　Design and result o f or thogonal expe rim en ts
实验号 A B C D 粗黄酮量(m g /mL)
1 2 平均 提取率(%)
1 1 2 2 1 41. 11 48. 31 44. 71 0. 43
2 1 1 1 2 68. 92 73. 10 71. 01 0. 70
3 1 3 3 3 64. 97 62. 73 63. 85 0. 72
4 2 1 2 3 100. 10 101. 48 100. 79 1. 02
5 2 3 1 1 48. 54 55. 42 51. 98 0. 54
6 2 2 3 2 85. 98 81. 98 83. 98 0. 83
7 3 3 2 2 73. 36 76. 44 74. 90 0. 77
8 3 2 1 3 92. 44 93. 52 92. 98 0. 93
9 3 1 3 1 30. 99 39. 95 35. 47 0. 34
K1 0. 62 0. 69 0. 72 0. 44
K2 0. 80 0. 73 0. 74 0. 77
K3 0. 68 0. 68 0. 63 0. 89
R 0. 18 0. 05 0. 11 0. 45
表 5　以芦丁为标准的黄酮含量的方差分析结果
Tab 5　The va riance ana ly sis re su lts acco rding to flavonoids
方差来源 离均差平方和 自由度 均方 F S ig.
A 1100. 134 2 550. 067 42. 948 . 000
B 319. 603 2 159. 802 12. 477 . 003
C 547. 414 2 273. 707 21. 371 . 000
D 5791. 182 2 2895. 591 226. 082 . 000
误差项 115. 269 9 12. 808
4　讨论
实验证明 , 在用碱 、石油醚 、乙醇三种提取方法中 , 用乙
醇提取琴叶榕根中的黄酮类化合物 , 效果好 , 提取率高。乙
醇浓度体积分数为 60%, 固液比 1∶30,温度 70℃,时间 2h为
提取的最佳条件 , 此提取条件适合批量生产中该药材的提
取。每次试验中其它因素如药材粉碎度 , 润湿程度 , 记时方
法及其它操作均统一 ,以减少操作误差。
参考文献
[ 1] 李青松 ,王瑞琦 ,范小娜 ,等.琴叶榕根治疗细菌性前列腺炎的
实验研究 [ J] .中医药学报 , 2003, 31(6)∶53.
[ 2] 张枫.保健银杏叶桃果汁的研制 [ J] .食品工业科技 , 1994, 12
(3):41.
[ 3] 张迪清 ,何照范.银杏叶资源化学研究 [M ] .中国轻工业出版
社 , 2000:57-67.
[ 4] 胡敏.银杏叶中黄酮糖苷的研究进展 [ J] .中国油脂 , 1999, 24
(1):44.
收稿日期:2004-06-26
香椿叶中氨基酸的分析研究
张毅平 1 ,张英 1 ,张仲平 2 ,刘玉红 2(1.山东省警官总医院,济南 250002;2.山东中医药大学 ,济南 250002)
摘要:目的　分析香椿叶中游离氨基酸和水解氨基酸的含量 , 为进一步开发香椿叶这一植物资源提供科学依据。方法　采用
水提取 、酸水解 、离子交换树脂处理 、氨基酸自动分析仪进行定量分析。结果　发现 5月份采摘的香椿叶经过水解后氨基酸类
成分含量丰富 , 其中人体必需的多种氨基酸含量都比较高。 结论　香椿叶中氨基酸含量较高 , 而氨基酸在食品 、饲料 、化妆
品 、医药等方面均有广泛的应用 , 所以香椿叶的开发前景十分光明。
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