全 文 ：天然产物研究与开发 NatProdResDev2009, 21:559-562
文章编号:1001-6880(2009)04-0559-04
　
　
　收稿日期:2008-06-20　　　接受日期:2008-09-11
　基金项目:国家自然科学基金(20572133)
＊通讯作者 Tel:86-10-83161622;E-mail:rych@imm.ac.cn
长穗桑中的 Diels-Alder型加合物
谭永霞 ,王洪庆 ,陈若芸＊
中国医学科学院北京协和医学院药物研究所 中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室 ,北京 100050
摘　要:从长穗桑的茎皮中首次分离到 9个 Diels-Alder型加合物 , 通过 NMR、MS等波谱分析手段分别鉴定为
mulberrofuranK(1), mulberrofuranG(2), guangsangonL(3), kuwanonJ(4), kuwanonX(5), guangsangonG(6),
guangsangonB(7), guangsangonD(8), kuwanonP(9)。化合物 1 ～ 9进行了抗氧化活性筛选。结果表明 , 在 10-5
M浓度下 ,化合物 1, 2, 5 ～ 7, 9对 Fe2+-半胱氨酸诱导的肝微粒体脂质过氧化产生的丙二醛(malondialdehyde,
MDA)有抑制作用(抑制率大于 50%)。
关键词:桑属;长穗桑;抗氧化;Diels-Alder型加合物
中图分类号:Q946.91;R284.2 文献标识码:A
Diels-AlderTypeAdductsfromMoruswitiorum
TANYong-xia, WANGHong-qing, CHENRuo-yun＊
KeyLaboratoryofBioactiveSubstancesandResourcesUtilizationofChineseHerbalMedicine, MinistryofEducation,
InstituteofMateriaMedica, ChineseAcademyofMedicalSciences, PekingUnionMedicalCollege, Beijing100050 , China
Abstract:NineDiels-AldertypeadductshavebeenisolatedfromthestembarkofMoruswitiorumforthefirsttime.Andon
thebasisofspectralanalysissuchasNMR, MSetc., structuresofthecompoundswereidentifiedasmulberrofuranK(1),mul-
berrofuranG(2), guangsangonL(3), kuwanonJ(4), kuwanonX(5), guangsangonG(6), guangsangonB(7), guangsangonD
(8), kuwanonP(9).Theanti-oxidativeactivityofcompounds1-9wereassayed.Asaresult, compounds1, 2, 5-7, 9showedin-
hibitiontomalondialdehyde(MDA)producedduringmicrosomallipidperoxidationinducedbyferrous-cysteine(theinhibitory
ratiosweremorethan50%)ataconcentrationof10-5 M.
Keywords:Morus;Moruswitiorum;antioxidant;Diels-Aldertypeadducts
　　长穗桑 Moruswitiorum为桑科桑属植物 ,主产
于湖北 、湖南 、广西 、广东 、贵州东北部至南部 [ 1] 。
长穗桑的根 、枝 、叶 、果均可作药用 ,其功效与桑白皮
相似[ 2] 。本课题首次对该植物的化学成分进行研
究 。经药理活性筛选发现 ,长穗桑茎皮 95%乙醇提
取物的醋酸乙酯部位表现出较强的抗氧化活性 ,对
其进行研究 ,分离到 9个 Diels-Alder型加合物 ,经波
谱分析分别鉴定为 mulberofuranK(1), mulberofuranG
(2), guangsangonL(3), kuwanonJ(4), kuwanonX
(5), guangsangonG(6), guangsangonB(7), guang-
sangonD(8), kuwanonP(9)。化合物 1 ～ 9进行了
抗氧化活性筛选 。其中 ,化合物 1, 2, 5 ～ 7, 9在 10-5
M浓度下 ,对 Fe2 +-半胱氨酸诱导的肝微粒体脂质
过氧化产生的丙二醛(malondialdehyde, MDA)有抑
制作用(抑制率大于 50%)。
1　仪器与材料
Boetius显微熔点测定仪(温度未校正);Agilent
1100 LC/MSDTrapSL型液相色谱-质谱联用仪;
INOVA-500型核磁共振仪 , TMS为内标;Perkin-El-
mer241型旋光仪 。
SephadexLH-20为 Pharmacia公司产品 , RP-
C18(40 ～ 60μm)为 Merk公司产品。柱色谱和薄层
色谱硅胶均为为青岛海洋化工厂产品。溶剂均为分
析纯 ,为北京化学试剂厂生产 。
长穗桑茎皮于 2006年 5月采自广西省 ,由广西
中医学院刘寿养教授鉴定为 Morusitiorum,标本收
藏于中国医学科学院药物所标本室。
2　提取与分离
长穗桑茎皮 11.5 kg,粉碎 , 95%乙醇回流提取
3次 ,每次 2 h,回收乙醇得浸膏 618 g。将浸膏与硅
DOI :10.16333/j.1001-6880.2009.04.002
胶拌样 ,依次用石油醚 、氯仿 、醋酸乙酯进行洗脱 。
醋酸乙酯部位(198.8 g)以氯仿-甲醇为洗脱剂 ,经
反复硅胶柱色谱分离 ,得到 10个部分 。第 4部分和
第 6部分分别经反复 SephadexLH-20柱色谱分离 ,
以甲醇为洗脱剂得到化合物 1(785 mg), 2(13mg)。
第 5 , 7, 9部分分别经反复硅胶柱色谱 , RP-C18柱色
谱以及制备型 HPLC分离 ,得到化合物 3(48 mg), 4
(37mg), 5(84 mg), 6(19 mg), 7(10 mg), 8(60
mg), 9(50mg)。
3　结构鉴定
MulberrofuranK(1)　白色棱柱状结晶(氯
仿 -丙酮), mp.173 ～ 175℃。ESI-MSm/z:651 [ M+
Na] +,分子式为 C39 H32 O8;[ α] 25D +372°(c0.03,
MeOH);1HNMR(Me2CO-d6)δ:7.40(1H, d, J=9.0
Hz, H-4), 7.13(1H, d, J=8.5 Hz, H-20″), 7.05
(1H, d, J=9.0 Hz, H-14″), 7.04(1H, s, H-3), 6.96
(1H, d, J=2.0 Hz, H-6′), 6.95(1H, d, J=2.0 Hz,
H-2′), 6.93(1H, d, J=2.0Hz, H-7), 6.80(1H, dd, J
=9.0, 2.0 Hz, H-5), 6.67(1H, d, J=10.0 Hz, H-
21″), 6.50(1H, dd, J=8.5, 2.5 Hz, H-19″), 6.44
(1H, brs, H-2″), 6.36(1H, d, J=2.5 Hz, H-17″),
6.26(1H, d, J=9.0 Hz, H-13″), 5.66(1H, d, J=
10.0 Hz, H-22″), 3.39(1H, m, H-4″), 3.36(1H, m,
H-3″), 2.95(1H, m, H-5″), 2.72(1H, m, H-6″), 2.08
(1H, m, H-6″), 1.77(3H, s, H-7″), 1.34(3H, s, H-
24″), 1.33(3H, s, H-25″)。以上数据与文献 [ 3]报道
一致 ,且与对照品共薄层 Rf值一致 ,因此鉴定为
mulberrofuranK。
MulberrofuranG(2)　白色棱柱状结晶(氯
仿 -丙酮), mp.180 ～ 181℃。ESI-MSm/z:685 [ M+
Na] +,分子式为 C34 H26 O8;[ α] 25D +468°(c0.05,
MeOH);1HNMR(Me2CO-d6)δ:7.40(1H, d, J=8.5
Hz, H-4), 7.23(1H, d, J=9.0 Hz, H-14″), 7.13
(1H, d, J=8.5 Hz, H-20″), 7.03(1H, s, H-3), 6.97
(1H, d, J=2.0 Hz, H-6′), 6.96(1H, d, J=2.0 Hz,
H-2′), 6.93(1H, d, J=2.0Hz, H-7), 6.80(1H, dd, J
=8.5, 2.0Hz, H-5), 6.50(1H, dd, J=8.5, 2.5 Hz,
H-19″), 6.48(1H, d, J=2.5 Hz, H-11″), 6.44(1H,
brs, H-2″), 6.36(1H, d, J=2.5 Hz, H-17″), 6.22
(1H, dd, J=9.0, 2.5 Hz, H-13″), 3.49(1H, m, H-
4″), 3.34(1H, m, H-3″), 2.98(1H, m, H-5″), 2.71
(1H, m, H-6″), 2.04(1H, m, H-6″), 1.77(3H, s, H-
7″)。以上数据与文献 [ 3]报道一致 ,故鉴定为 mul-
berrofuranG。
GuangsangonL(3)　黄 色无定形粉 末 ,
mp.126 ～ 128 ℃;ESI-MSm/z:477 [ M+H] +,分子
式为 C27 H24 O8;[ α] 25D -384.7°(c0.13, MeOH);1H
NMR(Me2CO-d6)δ:9.71(1H, s, H-7), 7.58(1H, d, J
=9.0Hz, H-14″), 7.57(1H, s, H-6), 6.89(1H, d, J
=8.5Hz, H-20″), 6.20(1H, d, J=2.5 Hz, H-17″),
6.12(1H, s, H-3), 6.10(1H, dd, J=8.5, 2.5 Hz, H-
19″), 6.05(1H, dd, J=9.0, 2.5 Hz, H-13″), 5.99
(1H, d, J=2.5 Hz, H-11″), 5.36(1H, s, H-2″), 4.42
(1H, brs, H-4″), 4.19(1H, brs, H-3″), 3.64(1H, br
s, H-5″), 2.61(1H, m, H-6″), 2.23(1H, m, H-6″),
1.77(3H, s, H-7″)。以上数据与文献[ 4]报道一致 ,
且与对照品共薄层 Rf值一致 , 故鉴定为 Guang-
sangonL。
KuwanonJ(4)　棕黄色无定形粉末 , mp.190
～ 191℃;ESI-MSm/z:679 [ M+H] +,分子式为 C40
H38O10;[ α] 25D +86.4°(c0.06, MeOH);1H NMR
(Me2CO-d6)δ:8.38(1H, d, J=9.0 Hz, H-14″), 8.15
(1H, d, J=16.0 Hz, H-β), 7.84(1H, d, J=9.0 Hz,
H-6′), 7.71(1H, d, J=16.0 Hz, H-α), 7.66(1H, d,
J=9.0 Hz, H-6), 6.97(1H, d, J=8.5 Hz, H-20″),
6.53(1H, d, J=2.5 Hz, H-17″), 6.48(1H, d, J=2.0
Hz, H-3), 6.43(1H, dd, J=9.0, 2.0 Hz, H-5), 6.43
(1H, d, J=9.0 Hz, H-13″), 6.34(1H, d, J=9.0 Hz,
H-5′), 6.30(1H, dd, J=8.5, 2.5 Hz, H-19″), 5.67
(1H, s, H-2″), 5.15(1H, t, J=7.5 Hz, H-22″), 4.66
(1H, m, H-4″), 4.12(1H, m, H-3″), 3.76(1H, m, H-
5″), 3.25(2H, d, J=7.5 Hz, H-21″)2.46(1H, m, H-
6″), 2.24(1H, m, H-6″), 1.93(3H, s, H-7″), 1.76
(3H, s, H-24″), 1.61(3H, s, H-25″)。以上数据与文
献[ 5]报道一致 ,故鉴定为 kuwanonJ。
KuwanonX(5)　棕色无定形粉末 , mp.195 ～
197 ℃;ESI-MSm/z:583 [ M+H] + ,分子式为 C34
H30 O9;[ α] 25D -317.9°(c0.07, MeOH);1H NMR
(Me2CO-d6)δ:7.72(1H, d, J=9.0 Hz, H-14″), 7.32
(1H, d, J=8.5 Hz, H-6), 7.17(1H, d, J=16.5 Hz,
H-β), 6.87(1H, d, J=9.0 Hz, H-20″), 6.69(1H, d,
J=16.5 Hz, H-α), 6.48(1H, d, J=2.0 Hz, H-6′),
6.39(1H, dd, J=8.5, 2.0Hz, H-5), 6.33(1H, d, J=
2.0 Hz, H-3), 6.32(1H, d, J=2.0 Hz, H-2′), 6.21
(1H, d, J=2.5 Hz, H-17″), 6.08(1H, dd, J=9.0,
560 天然产物研究与开发　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　Vol.21
2.5Hz, H-13″), 6.04(1H, dd, J=9.0, 2.5 Hz, H-
19″), 5.96(1H, d, J=2.5 Hz, H-11″), 5.36(1H, s,
H-2″), 4.91(1H, brs, H-4″), 4.49(1H, brs, H-3″),
3.66(1H, brs, H-5″), 2.59(1H, m, H-6″), 2.18
(1H, m, H-6″), 1.74(3H, s, H-7″)。以上数据与文
献 [ 5]报道相符合 ,且与对照品共薄层 Rf值一致 ,故
鉴定为 kuwanonX。
GuangsangonG(6)　黄色无定形粉末 ,
mp.192 ～ 194 ℃;ESI-MSm/z:631 [ M+Na] +,分子
式为 C35 H28 O10;[ α] 25D-472°(c0.11, MeOH);1H
NMR(Me2CO-d6)δ:8.21(1H, d, J=2.0 Hz, H-2′),
8.01(1H, d, J=9.0, Hz, H-5), 7.82(1H, dd, J=
9.0, 2.0 Hz, H-6′), 7.72(1H, d, J=9.0 Hz, H-14″),
7.04(1H, d, J=2.0 Hz, H-8), 6.94(1H, dd, J=9.0,
2.0Hz, H-6), 6.92(1H, d, J=8.5 Hz, H-20″), 6.78
(1H, d, J=9.0 Hz, H-5′), 6.20(1H, d, J=2.0 Hz,
H-17″), 6.10(1H, dd, J=8.5, 2.0 Hz, H-19″), 6.02
(1H, dd, J=9.0, 2.0 Hz, H-13″), 5.95(1H, d, J=
2.0Hz, H-11″), 5.42(1H, s, H-2″), 4.64(1H, brs,
H-4″), 4.39(1H, brs, H-3″), 3.59(1H, brs, H-5″),
2.81(1H, m, H-6″), 2.08(1H, m, H-6″), 1.79(3H,
s, H-7″)。以上数据与文献 [ 6] 报道一致 ,故鉴定为
GuangsangonG。
GuangsangonB(7)　棕色无 定形粉末 ,
mp.195 ～ 196 ℃;ESI-MSm/z:589 [ M+Na] +,分子
式为 C34 H30 O8;[ α] 25D-389.1°(c0.10, MeOH);1H
NMR(Me2CO-d6)δ:7.69(1H, d, J=8.5Hz, H-14″),
7.44(1H, d, J=2.0 Hz, H-2), 7.07(1H, dd, J=8.5,
2.0Hz, H-6), 6.94(1H, d, J=16.5 Hz, H-β), 6.91
(1H, d, J=8.5 Hz, H-20″), 6.79(1H, d, J=16.5
Hz, H-α), 6.61(1H, d, J=8.5 Hz, H-5), 6.53(2H,
d, J=2.0 Hz, H-2′, 6′), 6.25(1H, t, J=2.0 Hz, H-
4′), 6.21(1H, d, J=2.5 Hz, H-17″), 6.10(1H, dd, J
=8.5 , 2.5 Hz, H-19″), 6.01(1H, dd, J=9.0, 2.0
Hz, H-13″), 5.96(1H, d, J=2.0 Hz, H-11″), 5.39
(1H, s, H-2″), 4.52(1H, brs, H-4″), 4.29(1H, brs,
H-3″), 3.59(1H, brs, H-5″), 2.65(1H, m, H-6″),
2.21(1H, m, H-6″), 1.77(3H, s, H-7″)。以上数据
与文献 [ 7]报道一致且与对照品共薄层 Rf值一致故
鉴定为 GuangsangonB。
GuangsangonD(8)　黄色无定形 粉末 ,
mp.186 ～ 188 ℃;ESI-MSm/z:633 [ M+Na] +,分子
式为 C35 H30 O10;[ α] 25D -107°(c0.12, MeOH);1H
NMR(Me2CO-d6)δ:7.73(1H, d, J=8.5 Hz, H-5),
7.54(1H, d, J=2.5 Hz, H-6′), 7.48(1H, d, J=8.5
Hz, H-14″), 7.06(1H, dd, J=8.5, 2.5 Hz, H-4′),
6.88(1H, d, J=8.0 Hz, H-20″), 6.61(1H, dd, J=
8.5, 2.0Hz, H-6), 6.61(1H, d, J=8.5 Hz, H-3′),
6.49(1H, d, J=2.0 Hz, H-8), 6.21(1H, d, J=2.5
Hz, H-17″), 6.11(1H, dd, J=8.0, 2.5 Hz, H-19″),
6.07(1H, dd, J=8.5, 2.5 Hz, H-13″), 5.97(1H, d, J
=2.5Hz, H-11″), 5.39(1H, s, H-2″), 5.01(1H, d, J
=12.0Hz, H-2), 4.55(1H, d, J=12.0 Hz, H-3),
4.39(1H, brs, H-4″), 4.36(1H, brs, H-3″), 3.68
(1H, brs, H-5″), 2.64(1H, m, H-6″), 2.21(1H, m,
H-6″), 1.76(3H, s, H-7″)。以上数据与文献 [ 7]报道
一致 ,且与对照品共薄层 Rf值一致 ,故鉴定为 Guan-
gsangonD。
图 1　长穗桑中分离得到的 Diels-Alder型加合物 1 ～ 9
Fig.1　Diels-Aldertypeadducts1-9 isolatedfromMoruswitiorum
561Vol.21 　　　　　　谭永霞等:长穗桑中的Diels-Alder型加合物 　
　　KuwanonP(9)　棕色无定形粉末 , mp.196 ～
198℃;ESI-MSm/z:583 [ M+H] +, 分子式为 C34
H30 O9;[ α] 25D-489.7°(c0.10, MeOH);1H NMR
(Me2CO-d6)δ:7.76(1H, d, J=9.0 Hz, H-14″), 7.42
(1H, s, H-6), 7.24(1H, d, J=16.5 Hz, H-β), 6.93
(1H, d, J=9.0 Hz, H-20″), 6.84(1H, d, J=16.5
Hz, H-α), 6.51(2H, d, J=2.0 Hz, H-2′, 6′), 6.22
(1H, t, J=2.0 Hz, H-4′), 6.21(1H, d, J=2.5 Hz,
H-17″), 6.20(1H, s, H-3), 6.13(1H, dd, J=9.0, 2.5
Hz, H-19″), 6.09(1H, dd, J=9.0, 2.5 Hz, H-13″),
5.97(1H, d, J=2.5 Hz, H-11″), 5.38(1H, s, H-2″),
4.52(1H, brs, H-4″), 4.21(1H, brs, H-3″), 3.59
(1H, brs, H-5″), 2.51(1H, m, H-6″), 2.18(1H, m,
H-6″), 1.76(3H, s, H-7″)。以上数据与文献 [ 5]报道
相符合 ,故鉴定为 kuwanonP。
4　抗氧化活性筛选
　　以 0.1 mol/L磷酸盐缓冲液(phosphatebufer
solution, PBS, pH7.4)为缓冲液 ,每 1 mL反应体系
中含肝微粒体蛋白 1.5 mg和相应浓度的测试化合
物及半胱氨酸 200 μmol/L, 37 ℃水浴 15 min后 ,加
入 FeSO4 50 μmol/L开始反应 ,再于 37 ℃水浴 15
min后 ,加入 20%三氯醋酸 1mL振荡混匀 ,终止反
表 1　化合物 1 ～ 9在 10-5 M浓度下对 MDA的抑制率
Table1　Inhibitoryrateofcompounds1-9 onMDAataconcen-
trationof10-5 M
化合物
Compound
抑制率(%)
Inhibitoryrate
化合物
Compound
抑制率(%)
Inhibitoryrate
1 53 6 100
2 62 7 100
3 0 8 8
4 43 9 100
5 68
　　注:阳性对照 VitaminE同等浓度下对 MDA的抑制率为 62%。
应。为测定脂质过氧化产物丙二醛 (malondialde-
hyde, MDA)的含量 ,将反应混合物以 200 ×g离心
10 min,取上清液 1 mL,加入 0.67%硫代巴比妥酸
(TBA)1 mL,沸水浴 10 min后显色 ,冷却后于酶标
仪上测定 532 nm处的吸光度 [ 12] 。 VitaminE(Sig-
ma, 98%)为阳性对照 。筛选结果见表 1。
　　致谢:感谢本所分析室代测 NMR, IR, MS。本
实验中所用对照品均由戴胜军博士提供 。感谢药理
室魏怀玲老师所做的抗氧化活性筛选。本研究项目
由国家自然科学基金(20572133)和北京协和医学
院中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室资
助。
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