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银丝草水提取物对小鼠胃排空和小肠推进的影响



全 文 :银丝草水提取物对小鼠胃排空和小肠推进的影响
杨超燕,廖华卫,陈艳芬* ,陶曙红,唐春萍
(广东药学院中药学院,广东 广州510006)
摘要 目的:研究银丝草水提取物对小鼠肠推进和胃排空的影响。方法:采用小肠炭末推进实验观察银丝草
水提取物对正常小鼠小肠运动及硫酸阿托品所致小鼠小肠抑制模型的影响;通过甲基橙胃残留率的方法观察银丝
草水提取物对正常小鼠胃排空的影响;同时观察银丝草水提取物对燥结便秘小鼠排便的影响。结果:银丝草水提
取物可促进正常小鼠的小肠运动和胃排空,但不能明显拮抗硫酸阿托品所致小鼠小肠抑制作用;银丝草高、中、低
剂量均能显著增加排便粒数及粪便质量,但只有银丝草高剂量能显著缩短排黑便时间,与模型组有显著性差异。
结论:银丝草水提取物对正常小鼠小肠运动及对正常小鼠胃排空有促进作用,并且能明显促进便秘小鼠排便,但对
硫酸阿托品所致小鼠小肠抑制均无明显促进作用,其机制可能与 M胆碱受体无关。
关键词 银丝草水提取物;肠运动;胃排空;作用
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2013)05-0801-03
收稿日期:2012-12-28
作者简介:杨超燕(1980-) ,硕士,实验师,主要从事中药新药开发与研究;Tel:020-39352180,E-mail:y1c2y@ 163. com。
* 通讯作者:陈艳芬,Tel:020-39352180,E-mail:xwnai@ 163. com。
银丝草为旋花科土丁桂属的多年生草本变种植
物,主要分布于江西、湖南、广东和海南等地〔1〕,具
有散瘀止痛、清湿热等功效。可治小儿结肠炎、消化
不良、跌打损伤、腰腿痛、痢疾、泌尿系感染、血尿、蛇
伤、眼膜炎等。在民间广泛应用于治疗小儿疳积和
肝炎等,疗效显著。但目前国内外尚未见其有关化
学成分和药理作用的报道。本研究根据银丝草的临
床主治,分别采用小肠炭末推进实验、甲基橙胃残留
率方法和小鼠燥结便秘排便实验观察其对胃肠道的
作用,为进一步的临床应用和研究开发提供理论
依据。
1 材料与仪器
1. 1 实验动物 SPF 级 NIH 小鼠,体质量(18 ~
22)g,雌雄各半,由广东省医学实验动物中心提供,
合格证号:SCXK( 粤)2008-0002。
1. 2 药物与试剂 银丝草全草采于广东吴川,经
广东药学院中药学院标本馆王红刚实验师鉴定为旋
花科土丁桂属植物银丝草 Evolvulus alsinoides (L.)
L. var. decumbens (R. Br.)Ooststr.,标本存放于广东
药学院中药学院标本馆;硫酸阿托品注射液,天津金
耀氨基酸有限公司,批号:1109161; 阿拉伯胶,天津
市光复精细化工研究所,批号:20100716; 多潘立酮
片,西安杨森有限公司,批号:120730154;甲基橙,广
州化学试剂厂,批号:11402。
1. 3 主要仪器 UV-1800 紫外分光光度计( 北京
瑞利分析仪器公司) ;AY-120 电子分析天平( 岛津
仪器公司)。
2 方法
2. 1 药物的制备 称取银丝草干燥全草 500 g,粉
碎至细粒,置烧杯中加入大约 10 倍体积的水煎煮 3
次,每次 0. 5 h,提取液合并过滤、浓缩银丝草水提取
物( 生药1 g /mL) ,给药前配成所需浓度。
2. 2 对正常小鼠小肠运动的影响 60 只小鼠,随
机分为 5 组:正常对照组及多潘立酮阳性对照组及
银丝草高、中、低剂量组。每组每天灌胃相应的药
物,灌胃体积 20 mL /kg,对照组给予等容量的生理
盐水,各实验组连续给药 3 d,末次给药前禁食不禁
水 24 h,给药或生理盐水 45 min后灌胃给予新鲜配
制的炭末混悬液( 其中活性炭和阿拉伯树胶各含
10%)0. 2 mL /只,20 min 后,立即用颈椎脱臼法处
死小鼠,取出小肠铺平,测量小肠全长与炭粉混悬液
从幽门括约肌推至小肠末端的距离,计算小肠推进
率〔2〕。
2. 3 对阿托品所致小肠推进功能抑制的影响 小
鼠 72 只,随机分为 6 组: 正常对照组、模型组、多潘
立酮阳性对照组及银丝草高、中、低剂量组。每组每
天灌胃相应的药物,灌胃体积 20 mL /kg,对照组给
予等体积的生理盐水,各实验组连续给药 3 d,末次
给药前禁食不禁水 24 h,给药 45 min 后,除正常对
照组外,其余 5 组腹腔注射硫酸阿托品 2 mg /kg,15
min后分别灌胃给予新鲜配制的炭末混悬液( 活性
炭和阿拉伯树胶各含 10%)0. 2 mL /只,20 min 后,
立即脱颈椎处死小鼠,取出小肠铺平,测量小肠全长
(a) 与炭末混悬液从幽门括约肌推至小肠末端的距
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DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2013.05.033
离(b) ,计算小肠推进率〔3〕。
小肠推进率(%)= ba × 100%
2. 4 对正常小鼠胃排空的影响 60 只小鼠,随机
分为 5 组:正常对照组、多潘立酮阳性对照组及银丝
草高、中、低剂量组。各组每天灌胃相应的药物,灌
胃体积 20 mL /kg,对照组给予等容量的生理盐水,
各实验组连续给药 3 d,末次给药前禁食不禁水 24
h,给药 45 min 后,每只小鼠分别灌胃 0. 2 mL 的甲
基橙(0. 1%) 溶液。20 min 后脱臼处死动物,剖腹
摘取胃置于小烧杯里,放入适量蒸馏水,用小剪刀剪
开胃,将胃内容物充分洗于蒸馏水中,倒入刻度离心
管,用水补足 10 mL,以 3 000 r /min离心 10 min。取
上清液,在波长 420 nm处比色,测量溶液的光密度,
测得的光密度为胃中甲基橙光密度。以 0. 1%甲基
橙 0. 2 mL加入 10 mL蒸馏水摇匀后测量其光密度,
作为基数甲基橙光密度,计算甲基橙胃残留率〔4〕。
甲基橙胃残留率(%)= 胃甲基橙光密度
基数甲基橙光密度
× 100%
2. 5 对便秘模型小鼠排便的影响 小鼠 72 只,随
机分为 6 组:正常对照组、模型组、多潘立酮阳性对
照组及银丝草高、中、低剂量组。除正常对照组,其
余各组小鼠连续 3 d 禁水喂食大米,建立燥结便秘
的小鼠模型〔5,6〕。实验前 24 h 各组分别灌药 1 次,
正常对照组与模型组予以等体积蒸馏水,实验前 12
h禁食,各组末次灌不同含药炭末混悬液,模型组和
正常对照组灌胃给予新鲜配制的生理盐水炭末混悬
液( 活性炭和阿拉伯树胶各含10%)0. 5 mL /只,观
察各组小鼠第 1 次排黑便时间,同时连续观察 8 h,
记录粪便粒数,并称量粪便总质量。
2. 6 统计学处理 计量资料以 x- ± s 表示,采用
SPSS 13. 0 软件,组间显著性差异用方差分析,以 P
< 0. 05 为有统计学意义。
3 结果
3. 1 对正常小鼠小肠运动的影响 结果如表 1 所
示,与正常对照组比较,银丝草中剂量能促进正常小
鼠小肠运动(P < 0. 05)。
3. 2 对阿托品所致小肠推进功能抑制的影响 和
正常对照组比较,模型组受到小肠推进明显抑制(P
< 0. 01) ; 但银丝草高、中、低剂量组不能解除阿托
品对小肠运动的抑制。见表 2。
3. 3 对正常小鼠胃排空的影响 和正常对照组比
较,银丝草中剂量能促进正常小鼠胃排空(P < 0.
05)。见表 3。
表 1 银丝草水提取物对正常小鼠小肠
运动的影响(x- ± s,n =12)
组别 剂量 /(g /kg) 炭末推进率/%
正常对照组 - 73. 88 ± 9. 60
多潘立酮组 24 mg /kg 85. 20 ± 5. 61**
银丝草高剂量组 20 74. 40 ± 4. 19
银丝草中剂量组 10 80. 80 ± 9. 87*
银丝草低剂量组 5 72. 85 ± 8. 52
注:与正常对照组比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01
表 2 银丝草水提取物对阿托品所致小肠
推进功能抑制的影响(x- ± s,n =12)
组别 剂量 /(g /kg) 炭末推进率/%
正常对照组 - 69. 64 ± 11. 17
模型组 - 41. 03 ± 11. 86**
多潘立酮组 24 mg /kg 51. 40 ± 7. 90#
银丝草高剂量组 20 30. 04 ± 9. 01
银丝草中剂量组 10 31. 06 ± 16. 97
银丝草低剂量组 5 29. 60 ± 9. 05
注:与正常对照组比较,**P < 0. 01;与模型组比较,#P < 0. 05
表 3 银丝草水提取物对正常小鼠
胃排空的影响(x- ± s,n =12)
组别 剂量 /(g /kg) 胃残留率/%
正常对照组 - 27. 73 ± 5. 47
多潘立酮组 24 mg /kg 18. 40 ± 6. 75**
银丝草高剂量组 20 34. 69 ± 11. 94
银丝草中剂量组 10 21. 96 ± 3. 26*
银丝草低剂量组 5 31. 26 ± 6. 80
注:与正常对照组比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01
3. 4 对便秘小鼠排便的影响 模型组小鼠第 1 次
排黑便时间显著长于正常对照组长(P < 0. 01) ,银
丝草高、中、低剂量能不同程度缩短排黑便时间,但
只有高剂量组与模型组有显著性差异(P < 0. 01) ;
在 8 h内,便秘模型组小鼠的排便粒数及粪便质量
显著低于正常对照组(P < 0. 05) ,而银丝草高、中、
低剂量能不同程度增加排便粒数及粪便质量(P <
0. 05或 P < 0. 01)。见表 4。
4 讨论
银丝草为旋花科土丁桂属变种的全草植物,在
广东民间常用其全草煎服,治疗小儿疳积。疳积是
小儿时期,尤其是 1 ~ 5 岁儿童的一种常见病证。小
儿疳积的形成,主要由于喂养不当,饮食饥饱、冷暖
失调,表现为食滞中阻或积食伤脾,导致脾胃损伤而
致。陈祖皋〔7〕指出就疳积的病机关键而言,以胃
滞、脾虚、肝旺为主,而且三者常常相互影响,相兼夹
·208· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 5 期 2013 年 5 月
表 4 银丝草水提取物对对便秘小鼠排便的影响(x- ± s,n =12)
组别 剂量(g /kg) 排黑便时间/min 粪便粒数 /粒 粪便质量 /mg
正常对照组 - 171. 7 ± 79. 5 7. 5 ± 2. 0 77. 0 ± 40. 8
模型组 - 275. 0 ± 68. 5** 3. 9 ± 1. 7* 38. 0 ± 12. 5*
多潘立酮组 24 mg /kg 172. 9 ± 60. 5# 13. 3 ± 3. 4# 117. 0 ± 28. 3##
银丝草高剂量组 20 55. 6 ± 15. 0## 6. 4 ± 2. 0# 57. 0 ± 22. 3#
银丝草中剂量组 10 261. 2 ± 86. 5 9. 5 ± 2. 2## 77. 0 ± 27. 9##
银丝草低剂量组 5 215. 5 ± 58. 7 9. 0 ± 2. 5## 59. 0 ± 15. 1##
注:与正常对照组比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01;与模型组比较,#P < 0. 05,##P < 0. 01
杂。因此,消食、运脾、清火三法,是治疗小儿疳积最
常用、最有效的方法。因此课题组选择消食为切入
点,分别采用小肠炭末推进实验、甲基橙胃残留率方
法、阿托品小鼠模型和小鼠燥结便秘排便模型观察
银丝草水对胃肠运动的影响,结果表明银丝草水提
取物能促进胃肠道动力,证实了民间用于治疗小儿
疳积是有一定根据的,但不能改善由阿托品引起的
胃肠运动抑制,推测银丝草促进胃肠的作用可能与
胃肠平滑肌 M胆碱受体无关,其作用机制及有效成
分有待进一步研究。
参 考 文 献
[1]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[M].
第六册.上海:上海科学技术出版社,1999:5869.
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生出版社,2006:345.
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和肠推进的影响[J]. 中药药理与临床,2007,23(3) :
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[4]沈磊,方春生,王娟,等.高河菜提取物对小鼠肠推进和
胃排空的影响[J].大理学院学报,2009,8(2) :8-10.
[5]李仪奎.中药药理实验方法[M].第 2 版.上海: 上海科
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[7] 童舜华. 陈祖皋治疗小儿疳积经验[J]. 中医杂志,
2009,50(4) :304-305.
·制剂与质量·
湖北麦冬有效部位总皂苷的提取纯化工艺研究
林韵涵1,李崇明2,李晓东3,向 阳2,张雅琴1,张晓存1,刘 霞1*
(1.武汉理工大学化学工程学院,湖北 武汉 430070;2. 武汉健民药业集团股份有限公司,湖北 武汉
430052;3.湖北省中医院,湖北 武汉 430061)
收稿日期:2012-10-29
基金项目:中央高校基本科研业务费专项基金资助(2012-IV-107)
作者简介:林韵涵(1990-) ,女,在读硕士研究生,专业方向:药物新剂型与新技术。
* 通讯作者:刘霞,Tel:027-87859019,E-mail:lrx1125@ 126. com。
摘要 目的:研究湖北麦冬有效部位总皂苷分离纯化的工艺。方法:采用正交试验优选麦冬总皂苷提取物的
最佳提取工艺,采用大孔树脂分离纯化总皂苷,并进行验证试验; 采用紫外分光光度法进行含量测定。结果: 最佳
提取工艺为:10 倍量 70%乙醇加热回流提取 3 次,每次 2 h;选用D101 树脂进行纯化,50% ~ 70%乙醇对总皂苷的
洗脱效果最好,可以选择 70%的乙醇作为洗脱剂;工艺验证与试验结果具有很高的一致性。结论:该工艺简单,稳
定可行,提取率高,可以为湖北麦冬中药新药有效部位研究和生产提供参考。
关键词 湖北麦冬;有效部位;纯化工艺
中图分类号:R284. 2 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2013)05-0803-04
Study on Extraction and Purification Technology of Hubei Ophiopogon Saponins
LIN Yun-han1,LI Chong-ming2,LI Xiao-dong3,XIANG Yang2,ZHANG Ya-qin1,ZHANG Xiao-cun1,LIU Xia1
(1. School of Chemical Engineering,Wuhan University of Techology,Wuhan 430070,China;2. Wuhan Jianmin Pharmaceutical Group
Co.,Ltd.,Wuhan 430052,China ;3. TCM Hospital of Hubei province,Wuhan 430061,China)
·308·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 5 期 2013 年 5 月