全 文 ：山西农业科学2012，40（11）：1136-1138， 90 Journal of Shanxi Agricultural Sciences
东北点地梅下胚轴再生体系的建立
吴丽巍，杨 阔，陶 双，杨文新，姜长阳
（辽宁师范大学生命科学学院，辽宁大连116081）
摘 要：为保存野生资源和满足需要，以东北点地梅的下胚轴为材料，采用组织培养的方法进行了愈伤组织
诱导与分化、不定芽生根、试管苗的生根、生根继代及移栽和定植的研究。结果表明，MS＋ZT0.2mg/L＋
6-BA0.1mg/L＋2，4-D2.1mg/L是下胚轴愈伤组织诱导培养的理想培养基；MS＋NAA0.1mg/L＋ZT0.6mg/L
是愈伤组织分化培养和不定芽分化继代增殖培养的理想培养基；用10mg/L的IAA溶液对不定芽处理24h，
将不定芽接种到 1/2 MS培养基上生根是不定芽生根培养的理想方法。在温室中试管苗移栽成活率为
94.1%，定植成活率为98.5%，定植成活的试管苗保持了野生东北点地梅的生物性状。
关键词：东北点地梅；组织培养；再生体系；下胚轴
中图分类号：S567.21文献标识码：A 文章编号：1002-2481（ 012）11-1136-04
Establishment of Regeneration Clone from Hypocotyl of Androsace filiformia
WULi-wei，YANGKuo，TAOShuang，YANGWen-xin，JIANGChang-yang
（CollegeofLifeScience， aoningNormalUniversity，D ian116081，China）
Abstract：Topreservethewild resourcesand meettheneedsofpeople, with the method oftissue culture, hypocotylofAn－
drosace filiformia wereused asmaterialtodotheresearch on callus inducementand differentiation, rootingofadventitious buds,
rootingand rootingmultiplication oftube seedlings, transplantation oftube seedlings and stable planting. The results showed that
theidealmediumforcallusinduction fromhypocotylwasMS＋ZT0.2 mg/L＋6-BA0.1 mg/L＋2，4-D2.1 mg/L;MS＋NAA0.1
mg/L＋ZT0.6mg/Lwasthebestmediumforcallusdifferentiation and adventitiousbudsdifferentiationsmultiplication;cultivated
inthemedium1/2MSaftertheadventitiousbudsdisposed24hwithIAA10mg/Lwasthebestmethod forrootingofadventitious
buds.Thetransplantingsurvivalrateoftubeseedlingswas94.1%and stableplantingsurvivalratewas98.5%in thegreenhouse,
thetubeseedlingssurvivaledretainedallbiologicalcharacteristicsofthewildAndrosace filiformia.
Key words：Androsace filiformia;tissueculture;clone;hypocotyl
收稿日期：2012-09-01
基金项目：辽宁省普通高等教育本科教学改革研究项目（201203041-4）；辽宁省大学生创新创业训练项目（201203015011）
作者简介：吴丽巍（1991-），女，辽宁本溪人，在校学生，研究方向：植物组织培养。姜长阳为通讯作者。
doi:10.3969/j.issn.1002-2481.2012.11.04
东北点地梅（Androsace filiformia）又称丝点
地梅，属于报春花科点地梅属一年生草本植物。
生长于河边、路旁、林下、荒地、湿地等环境中，主
要分布在我国的东北、内蒙古等地区，其中，在辽
宁省主要分布在沈阳、鞍山、凤城、新宾、西丰、开
原、长海和桓仁等市县[1-2]。由于点地梅类植物含
有黄酮类药用成分[3]，使东北点地梅作为中草药
使用具有清热解毒、消肿止疼等功效，能治扁桃
体炎、咽喉炎、口腔炎、急性结膜炎和跌打损伤等
疾病[2]。近年来，辽宁地区家禽养殖专业户发现，
把东北点地梅干粉作为饲料添加剂使用，能明显
地降低家禽的发病率，提高经济效益。于是，很多
人于每年的5—6月大量地采收东北点地梅用作
家禽的饲料添加剂，这使本来分布和数量就很少
的东北点地梅遭到了严重的破坏，导致在辽宁过
去有东北点地梅分布的地区，现已几近绝迹。为
保护东北点地梅的野生资源、满足人们的需求，
研究者采用组织培养的方法，对东北点地梅进行
了再生体系建立的研究。虽然有关植物组织培养
方面的研究很多[4-8]，并且对点地梅丛生芽繁殖技
术的研究也有报道[9]，但迄今未见东北点地梅组
织培养和再生体系建立研究的报道。
本研究以东北点地梅有芽下胚轴为材料，采
用组织培养的方法，建立起下胚轴的再生体系。
1 材料和方法
1.1材料来源及灭菌
6月下旬，将生长于大连市长海县林下生长
1136· ·
吴丽巍等：东北点地梅下胚轴再生体系的建立
表 1 不同质量浓度 IAA，IBA 和 2，4-D 对下胚轴愈伤组织诱导培养的影响
愈伤组织块平均大小/cm
0
0.4
0.3
0
0
0
0
0
0
0
0
0.8
1.1
1.6
1.5
0.72
试管苗长势
-
+
+
-
-
-
-
-
-
-
-
+
++
++
+
+
诱导率/%
0
1.6
2.8
0
0
0
0
0
0
0
0
41.3
63.7
92.3
70.7
15.7
IAA/（mg/L）
0
0.7
1.4
2.1
2.8
3.5
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
IBA/（mg/L）
0
0
0
0
0
0
0.7
1.4
2.1
2.8
3.5
0
0
0
0
0
2，4-D/（mg/L）
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0.7
1.4
2.1
2.8
3.5
注：++表示长势旺盛；+表示长势一般；-表示不生长。表2同。
由表1可知，在附加不同质量浓度IBA的培
养基上，不能诱导下胚轴生长出愈伤组织；在附
加不同质量浓度IAA的培养基上，下胚轴的愈
伤组织的诱导率也很低；而在附加不同质量浓度
2，4-D的培养基上，下胚轴愈伤组织的诱导率效
果较好。其中，在附加2.1mg/L的2，4-D培养基
上，愈伤组织的诱导生长效果最好。不仅3次重复
试验的平均诱导率达到了92.3%、半球状愈伤组
织直径为1.6cm，而且愈伤组织外观长势好。对培
养过程的观察还表明，在附加2.1mg/L的2，4-D
培养基上，培养到9d时就有约10%的培养材料
在下胚轴的下部切口处生长出直径约为0.1cm
的淡黄色愈伤组织。之后，伴随着愈伤组织诱导
率的增加，先生长的愈伤组织也不断地长大变
绿，并且半球状愈伤组织的表面也呈现出大小不
等的颗粒状。3次重复试验的结果基本一致。试
非常旺盛植株上的东北点地梅的种子采回实验
室，采用高迎秋等[10]研究东方蓼的灭菌方法进行
种子灭菌，可获得无菌种子。
1.2培养条件
培养条件参见文献[11]。
1.3试验方法
1.3.1下胚轴愈伤组织的诱导培养 将无菌种
子接种到1/2MS培养基上，当实生苗长出一片
真叶、下胚轴长0.5～0.9cm时，在近培养基处将
具有子叶和一片真叶的下胚轴剪下后，接种到以
MS＋ZT0.2 mg/L＋6-BA 0.1 mg/L为基本培养
基、附加不同质量浓度的IAA，IBA和2，4-D培
养基上，进行下胚轴愈伤组织的诱导培养试验。
试验重复3次，每处理接种100个材料。
1.3.2愈伤组织分化培养 把由下胚轴诱导培
养的愈伤组织分散成4～8个颗粒组成、直径约为
0.3cm的块状后，接种到以MS＋NAA0.1mg/L
为基本培养基，附加不同浓度6-BA，ZT，KT的培
养基上，进行愈伤组织的分化培养试验。试验重
复3次，每处理接种100块愈伤组织。
1.3.3生根培养 向生长着继代增殖培养丛生
不定芽的培养瓶倒入7mL质量浓度为10mg/L
的IAA溶液，处理24h后，将不定芽从基部分割
为独立的不定芽，接种到1/2MS培养基上，进行
不定芽的生根培养。试验重复3次，第1次接种
200个不定芽，第2次接种400个不定芽，第3次
接种800个不定芽。
1.3.4试管苗移栽与定植 把3次生根培养的
试管苗长势较旺盛的植株从培养瓶中取出后，移
栽到铺着一层6～8cm厚干净河沙的温室苗床
上。在移栽后前10d（湿度保持90%左右、遮阴）
对成活率及长势进行观察统计。
把移栽成活并正常生长的1120株试管苗，
于5月上旬一次性定植到大连郊区水库上游的
草地上，按照野生条件任其生长。
2 结果及分析
2.1不同质量浓度 IAA，IBA和 2，4-D对下胚轴
愈伤组织诱导培养的影响
接种后56d观察统计，结果列于表1。
1137· ·
（下转第 1190 页）
山西农业科学2012年第40卷第11期
由表2可知，在附加不同质量浓度KT的培
养基上，愈伤组织不分化；在附加不同质量浓度
6-BA的培养基上，愈伤组织的分化效果较差；在
附加不同质量浓度ZT的培养基上，愈伤组织的
分化效果较好。其中，在附加0.6mg/LZT的培养
基上，不仅愈伤组织分化率最高，达到92%，平均
每块愈伤组织能分化生长出5.6个不定芽，而且
分化的不定芽长势较好。对分化培养的过程观察
表明，附加0.6mg/LZT的培养基上，培养10d左
右可见在愈伤组织块的上面分化出不定芽点，随
后伴随着不定芽的不断生长，又会相继在先分化
的不定芽基部分化出多个不定芽，且分化的不定
芽呈丛生状。培养到60d时，丛生状不定芽就会
长成高1cm左右、外观生长旺盛的丛生不定芽。
把这种丛生不定芽从基部切割为独立的不
定芽后，接种到相同的培养基上进行不定芽分化
继代增殖培养。3次重复试验的结果证明，经过
50d的分化继代增殖培养，平均1个不定芽就会
分化继代增殖培养出4.6个不定芽，并且其外观
长势比由愈伤组织分化培养的不定芽更旺盛。试
验结果表明，MS＋NAA0.1mg/L＋ZT0.6mg/L是
东北点地梅愈伤组织分化培养和不定芽的分化
继代增殖培养的理想培养基。
2.3不定芽的生根培养
接种后 30 d统计，3次重复试验共接种的
1400个不定芽，生根株数为1285个，平均生根
率为91.8%。对生根培养过程的观察表明，接种
培养到8d时，绝大多数不定芽可发出新根，生
长为试管苗。之后，伴随着试管苗的生长和生根
率的增加，每株试管苗的根数也不断增加。培养
到30d时，平均每株试管苗会生长出6.7条白色
根，且叶片伸展、嫩绿，长势旺盛。试验结果表明，
用10mg/L的IAA溶液对不定芽处理24h，将不
定芽接种到1/2MS培养基上是东北点地梅不定
芽生根培养的理想方法。
2.4试管苗移栽与定植
3次共移栽1197株，成活了1126株，平均
成活率为94.1%。定植后30d统计，成活1103株，
成活率为98.5%。定植成活的试管苗外观生长旺
盛，7月上旬开花，并保持野生东北点地梅的植
物学性状。
3 讨论
本研究所定植的试管苗保持了东北点地梅
的植物学性状，表明本研究所建立的再生技术，
表 2 不同质量浓度 6-BA，ZT，KT 对愈伤组织分化培养的影响
平均分化不定芽个数/块
0
0
0
0
0
0
0
1.0
1.4
1.5
0
0
0
1.9
3.4
5.6
5.5
3.3
1.0
不定芽长势
-
-
-
-
-
-
-
+
+
+
-
-
-
+
++
++
+
+
+
分化率/%
0
0
0
0
0
0
0
11
16
22
0
0
0
27
81
92
68
25
9
KT/（mg/L）
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
6-BA/（mg/L）
0
0
0
0
0
0
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
0
0
0
0
0
0
ZT/（mg/L）
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
验结果表明，MS＋ZT0.2mg/L＋6-BA0.1mg/L＋
2，4-D2.1 mg/L是东北点地梅下胚轴愈伤组织
诱导培养的理想培养基。
2.2不同质量浓度 6-BA，ZT，KT对愈伤组织分
化培养的影响及不定芽的继代增殖培养
接种培养60d观察统计，结果列于表2。
1138· ·
（上接第 1138 页）
能够为东北点地梅野生资源的保护提供技术支
撑。同时表明，采用现代无性繁殖技术，能对植物
的种质资源进行保存。
在不定芽生根培养中，本研究采用10mg/L的
IAA溶液对不定芽处理24h，直接接种到1/2MS
培养基上生根的方法收到了较理想的效果，这与
IAA特性和试管苗自身的合成力有关。IAA是一
种植物自身合成的天然生长素，一定的质量浓度
具有促进生根的作用。但是，在不定芽生根培养
中，培养初期形成根原基时，需要较高质量浓度
的生长素，而根伸长生长所需要的生长素质量浓
度较低。而IAA这种天然生长素化学性质不稳
定，在光照条件下容易分解。所以，用10mg/L的
IAA溶液对不定芽处理，使其促进形成根原基。
之后，IAA的分解又有利于根原基的生长，促进
试管苗的生根。实际上试管苗根的生长需要较低
质量浓度的IAA，而在光照下培养的试管苗本身
合成的IAA也能满足根生长的需要。
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膜下滴灌处理的水分生产力、氮肥偏生产力
高于膜下沟灌处理，DIF＋OM处理的水分生产
力最高，达到 FIF＋OM处理的 1.6倍，DIF＋
HOM＋1/2S处理的氮肥偏生产力最高，是FIF＋
OM处理的2.6倍。说明水肥是互补的，适当减少
灌溉量和施肥量，有利于提高水分生产力。当水
分条件相同时，适当增加施肥量能提高水分生
产力，而施氮量减少可以大幅度提高氮肥偏生产
力[15]。适当地控水和控肥可以提高土壤水分和肥
料的利用效率。
从经济效益来看，DIF＋OM处理产值最高，
为32.25万元/hm2，相对净产值28.42万元/hm2，
比FIF＋OM处理高将近6万元/hm2。说明膜下
滴灌低投入、高产出，同时提高了水肥资源的利
用率，减少了过度施肥给环境带来的压力。
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