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不同浓度ＮａＣｌ胁迫下，北海道黄杨愈伤组织中游离脯氨
酸的含量见图３。北海道黄杨愈伤组织中游离脯氨酸的含量
随盐浓度升高呈现先比较平缓后急剧上升趋势，在无盐及低
浓度盐胁迫的情况下，愈伤组织内的游离脯氨酸含量均较低，
随着培养基中ＮａＣｌ浓度升高，脯氨酸含量变化呈急剧上升趋
势，在盐浓度相对较高（１．０％）时游离辅基酸含量最高，达
１８４．２μｇ／ｇ。
３ 讨论
在诱导叶片愈伤组织阶段，２，４－Ｄ１．５ｍｇ／Ｌ、６－ＢＡ
０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ这２个激素配比对愈伤组织的诱
导效果最好，诱导率最高。在试验中发现在叶片培养前期诱
导出愈伤组织量很低的叶片，在转移到 ６－ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋
ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ的培养基中进行２次培养后，会促进叶片四周
切口处愈伤组织的形成，诱导出愈伤组织厚度为 １．０～
１．５ｃｍ。在愈伤组织增殖培养中，愈伤组织增殖生长启动时
间比较晚，１５ｄ左右开始启动，而在 ３０ｄ时出现褐化现象；
０．５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ对愈伤组织增殖效果最好。
在加入不同浓度 ＮａＣｌ的培养基中进行愈伤组织培养，
ＮａＣｌ浓度为０．２％时愈伤组织长势没有受到太大影响，当
ＮａＣｌ含量上升到０．４％以上时，愈伤组织生长量出现明显的
下降趋势，褐化现象逐渐严重，游离脯氨酸含量增加。因此，
在后续研究中可选用大于０．４％的浓度作为耐盐细胞的诱变
与筛选的ＮａＣｌ浓度。
参考文献：
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ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１６．１２．０２７
中华石蝴蝶组织培养及试管开花诱导
王一诺，李 翠，肖 冬，李林轩，韦 莹，王晓峰，韦坤华
（广西壮族自治区药用植物园／广西药用资源保护与遗传改良重点实验室，广西南宁５３００２３）
摘要：以中华石蝴蝶（ＰｅｔｒｏｃｏｓｍｅａｓｉｎｅｎｓｉｓＯｌｉｖ．）的幼嫩叶片为外植体，以ＭＳ为基本培养基，研究植物生长调节剂
多因素组合对中华石蝴蝶继代增殖和生根培养的影响，并诱导获得的无菌苗在试管中开花。结果显示，不同的生长调
节剂配比对中华石蝴蝶继代培养和生根培养的影响不同，ＭＳ＋１．０ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０．２ｍｇ／ＬＮＡＡ＋０．１ｍｇ／ＬＩＡＡ利
于芽继代增殖，ＭＳ＋０．５ｍｇ／ＬＩＢＡ＋０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ＋１．０ｇ／Ｌ活性炭适于诱导生根获得再生植株，ＭＳ＋０．２ｍｇ／Ｌ
６－ＢＡ＋０．２ｍｇ／ＬＮＡＡ利于试管苗开花，持续继代可抑制中华石蝴蝶的试管开花。
关键词：中华石蝴蝶；组织培养；继代增殖；生根培养；试管开花
中图分类号：Ｓ６８２．１＋９０．４＋３ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２－１３０２（２０１６）１２－００９８－０３
收稿日期：２０１５－１０－１５
基金项目：广西科学研究与技术开发计划（编号：桂科重１３５５００１－
３－４、桂科重１４１２５００８－２－２１）；广西壮族自治区卫生厅中医药科
技专项（编号：ＧＺＰＴ１２３４）；南宁市科学研究与技术开发计划（编
号：２０１３３０３２－４）。
作者简介：王一诺（１９８４—），女，广西梧州人，硕士，研究实习员，从事
药用植物组织培养方面的研究。Ｔｅｌ：（０７７１）５６０２８５０；Ｅ－ｍａｉｌ：
ｙｙｚｗｙｙｉｎｕｏ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ。
通信作者：韦坤华，博士，副研究员，主要从事药用植物生物技术研
究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｉｖｉｎｅｋｈ＠１６３．ｃｏｍ。
中华石蝴蝶（ＰｅｔｒｏｃｏｓｍｅａｓｉｎｅｎｓｉｓＯｌｉｖ．）为苦苣苔科石蝴
蝶属多年生草本植物，产于云南北部、四川和湖北西部，生于
低山阴处的石上。目前，苦苣苔科（Ｇｅｓｎｅｒｉａｃｅａｅ）植物在全世
界约有１４０属２０００余种，中国有５８属（其中 ２８属特产中
国）４６３种，从辽宁到海南均有分布，多数属、种分布于云南、
广西、广东等省（区）热带及亚热带石灰岩的陡崖上［１］。苦苣
苔植物很多品种花色艳丽，极具观赏价值。此外，芒毛苣苔
属、非洲紫苣苔属、大岩桐属，中国产的吊石苣苔、蚂蟥七、牛
耳朵等具有药用价值［２］。由于许多苦苣苔科植物分布区域
狭窄，对生长条件要求苛刻，加上民间的过度采挖，使许多苦
苣苔科植物的野生资源濒临绝种［３］。
中华石蝴蝶不仅花色美丽，可作为观赏花卉，同时也是一
种中药材，以全草入药，具有清热解表、健脾和胃等功效，可用
于治疗感冒、小儿疳积等症状［４］。本研究通过对中华石蝴蝶
—８９— 江苏农业科学 ２０１６年第４４卷第１２期
网络出版时间：2017-01-09 15:35:46
网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/32.1214.S.20170109.1535.009.html
组织培养的技术研究，探索行之有效的中华石蝴蝶繁殖技术
并通过仿生栽培，可以对其野生资源进行有效保护。试管开
花是利用组织培养技术使组培植物在离体环境下开花的一种
现象，不受季节的限制，可以通过控制相应的条件，让组培植
物进入开花时期［５］。中华石蝴蝶的试管开花可为人们对鲜
花日益增长的需求提供广阔的市场。因此，利用植物组织培
养技术对中华石蝴蝶进行培养并对其试管开花作初步探究，
研究其开花机制，具有重要的现实意义和应用价值。本研究
在中华石蝴蝶组织培养的基础上，进行无菌苗的试管开花诱
导，可为研究其花期生理和调控提供基础资料。
１ 材料与方法
１．１ 材料
中华石蝴蝶采取广西壮族自治区药用植物园科研基地内
健壮无病害的植株，选取其幼嫩的叶片为外植体。
１．２ 外植体消毒
将采回的外植体在流水下缓慢冲洗，并用软毛刷轻轻擦
拭去除表面的污垢，放入烧杯中，用适量浓度洗洁精溶液浸泡
１５ｍｉｎ后，再用流水冲洗１０ｍｉｎ。将材料移至超净工作台上，
用７５％乙醇表面消毒１５ｓ后用无菌水冲洗２次，再用０．１％
氯化汞溶液浸泡８ｍｉｎ，最后用无菌水浸泡冲洗５次，将氯化
汞溶液彻底洗出。在无菌器皿中将外植体与消毒液接触的伤
口切除，接种于诱导培养基中，以诱导出的丛生芽作为试验
材料。
１．３ 继代增殖
取无菌中华石蝴蝶丛生芽，接入添加不同浓度植物生长
调节剂６－ＢＡ、ＮＡＡ、ＩＡＡ的ＭＳ＋３０ｇ／Ｌ蔗糖＋４．０ｇ／Ｌ琼脂
的培养基中，调节培养基的 ｐＨ值为５．８，设置其培养条件为
平均光照度 １５００～２２００ｌｘ，光照时间 １２ｄ／ｈ，培养温度
（２５±３）℃，考察不同培养配方对中华石蝴蝶继代的影响。
１．４ 生根培养
挑取继代培养得到的增殖苗，单切丛生芽为单芽，接入添
加不同浓度的植物生长调节剂 ６－ＢＡ、ＮＡＡ的 ＭＳ＋蔗糖
３０ｇ／Ｌ＋琼脂４．０ｇ／Ｌ培养基中，另一部分接入添加１ｍｇ／Ｌ
活性炭的上述培养基中生根，设置其平均培养条件为光照度
１５００～２２００ｌｘ，光照时间１２ｄ／ｈ，培养温度（２５±３）℃，考察
不同培养基配方对中华石蝴蝶生根率的影响。
１．５ 植物生长调节剂对中华石蝴蝶诱导开花的影响
选取继代增殖的无菌苗，接种到ＭＳ培养基以及添加６－
ＢＡ、ＮＡＡ的ＭＳ培养基上，每种培养基中含有３０ｇ／Ｌ蔗糖、
４．０ｇ／Ｌ琼脂，培养条件为平均光照度１５００～２２００ｌｘ，光照
时间１２ｄ／ｈ，培养温度（２５±３）℃，在培养期间观察植物的生
长情况并记录试验结果。
１．６ 继代培养对中华石蝴蝶试管开花的影响
设计１组继代试验，中华石蝴蝶试管苗每４０ｄ转接至继
代培养基中继代培养１次，比较连续继代、只继代１次对中华
石蝴蝶试管开花的影响。
２ 结果与分析
２．１ 继代增殖
切取诱导出的芽，将其接种在不同外源激素配比的继代
增殖培养基中，每天观察接入芽发生的微小变化，大概１０ｄ
后开始有新芽出现，一段时间后芽苗的数量慢慢增多，于６０ｄ
后统计芽的增殖系数。表 １表明，ＭＳ＋１．０ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋
０２ｍｇ／ＬＮＡＡ＋０．１ｍｇ／ＬＩＡＡ培养基中华石蝴蝶的长势最
好，增殖倍数高，芽粗壮，叶色翠绿，部分出现幼根但比较弱。
从试验结果可以看出，中华石蝴蝶的增殖率会受到６－ＢＡ含
量的影响，在０～１．０ｍｇ／Ｌ范围内，在低含量时芽的生长速度
相对较慢；随着６－ＢＡ含量的增大，芽的增殖倍数不断增大，
有效芽苗的数量也不断增加；但当 ６－ＢＡ含量大于
１．０ｍｇ／Ｌ，达到１．５ｍｇ／Ｌ时，芽苗相对长势比较弱，部分出现
玻璃化现象，有效的芽苗数量减少，表明６－ＢＡ含量过高反
而抑制了中华石蝴蝶的生长。较好的芽苗生长情况见图１。
表１ 不同培养基对中华石蝴蝶继代的影响
编号 ６－ＢＡ含量（ｍｇ／Ｌ）
ＩＡＡ含量
（ｍｇ／Ｌ）
ＮＡＡ含量
（ｍｇ／Ｌ）
增殖
倍数 芽形态特征
１ ０．５ ０．１ ０．１ ４．８ 细，长势较慢
２ ０．５ ０．２ ０．２ ６．２ 粗，芽黄绿色
３ ０．５ ０．４ ０．４ ４．４ 细，绿色
４ １．０ ０．１ ０．２ ７．８ 粗壮，翠绿色
５ １．０ ０．２ ０．４ ７．１ 较粗，绿色
６ １．０ ０．４ ０．１ ５．５ 粗，黄绿色
７ １．５ ０．１ ０．４ ５．１ 粗，绿色
８ １．５ ０．２ ０．１ ４．７ 细，绿色
９ １．５ ０．４ ０．２ ４．８ 细，出现玻璃化
２．２ 生根培养
将继代培养得到的增殖苗单切丛生芽为单芽接入不同植
物生长调节剂含量的生根培养基中，一部分接入添加
１．０ｍｇ／Ｌ活性炭的上述培养基中。表２结果表明，中华石蝴
蝶在上述培养基中均能生根，但在 ＭＳ＋０．５ｍｇ／ＬＩＢＡ＋
０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ＋１．０ｇ／Ｌ活性炭培养基上生根效果最好，植
株长势较好，平均的生根数为１８条／株，平均根长３．６２ｃｍ，
生根率达到１００％，生根苗相对粗壮，利于试管苗的移栽。其
中ＩＢＡ影响苗的生长，当培养基中只添加 ＩＢＡ时生根数较
少，根较细、弱，质量不好。ＮＡＡ、活性炭对生根有促进作用，
两者同时配合使用时，生根效果最好（图２），但 ＮＡＡ含量过
高，对生根也会产生抑制作用。
２．３ 不同植物生长调节剂对中华石蝴蝶试管开花的影响
以ＭＳ培养基为空白对照，剪取长势良好的中华石蝴蝶
无菌试管苗，接种于研究试管开花的培养基中，比较在基本培
养基中添加６－ＢＡ、ＮＡＡ激素对中华石蝴蝶试管开花的影
—９９—江苏农业科学 ２０１６年第４４卷第１２期
表２ 不同培养基对生根的影响
编号 ＩＢＡ含量（ｍｇ／Ｌ）
ＮＡＡ含量
（ｍｇ／Ｌ）
活性炭含量
（ｍｇ／Ｌ）
接种数
（个）
平均每株生
根数（条）
平均根长
（ｃｍ）
１ ０．１ ０．０ ０．０ ２０ ３ １．７６
２ ０．１ ０．１ ０．０ ２０ ８ ２．１１
３ ０．１ ０．１ １．０ ２０ １０ ２．８９
４ ０．５ ０．０ ０．０ ２０ ４ ２．６７
５ ０．５ ０．１ ０．０ ２０ １５ ３．０４
６ ０．５ ０．１ １．０ ２０ １８ ３．６２
７ １．０ ０．０ ０．０ ２０ ４ ２．７３
８ １．０ ０．５ ０．０ ２０ １１ ３．０１
９ １．０ ０．５ １．０ ２０ １６ ３．４１
响。表３表明，中华石蝴蝶在不添加任何激素的 ＭＳ培养基
中能够正常生长，但不能进行试管内开花，培养一段时间后，
试管苗会出现黄化的现象；在ＭＳ培养基中分别添加激素６－
ＢＡ、ＮＡＡ，试管内开花率明显高于对照培养基 ＭＳ，在只添加
激素６－ＢＡ的基本培养基中，花序比较纤细、幼弱，而当同时
添加２种激素时，中华石蝴蝶试管开花率最高，花开得更大、
更伸展，花色相对艳丽（图３）。结果说明，６－ＢＡ、ＮＡＡ激素
配合使用，对中华石蝴蝶的试管开花有促进作用。
表３ 激素对中华石蝴蝶试管开花的影响
编号 ＭＳ ６－ＢＡ含量（ｍｇ／Ｌ）
ＮＡＡ含量
（ｍｇ／Ｌ）
接种数
（个）
开花率
（％）
１ ＭＳ ０．０ ０．０ ２０ ０
２ ＭＳ ０．２ ０．０ ２０ ５
３ ＭＳ ０．０ ０．２ ２０ ７
４ ＭＳ ０．２ ０．２ ２０ １０
２．４ 继代培养对中华石蝴蝶试管开花的影响
设计１组试验，比较不同继代培养次数对中华石蝴蝶试
管开花的影响。分别剪取中华石蝴蝶持续继代、只继代１次
的无菌试管苗，接种在利于试管开花的 ＭＳ＋０．２ｍｇ／Ｌ
６－ＢＡ＋０．２ｍｇ／ＬＮＡＡ培养基中，连续培养３个月，观察并
记录试验结果。结果显示，减少继代培养的次数利于试管开
花，继代１次的中华石蝴蝶的开花率明显高于持续继代的，表
明持续继代会抑制中华石蝴蝶的试管开花。
３ 讨论与结论
在组织培养的过程中，培养基中不同生长调节剂的配比
是诱导植物产生芽、根的关键因素［６］。不同的植物在组织培
养中所需要激素的种类和含量是不同的，同大多数苦苣苔科
植物一样，培养基中细胞分裂素、生长素的含量和配比对中华
石蝴蝶组织培养中芽的增殖和生根起着决定性的作用。
６－ＢＡ是目前使用广泛的细胞分裂素，其含量在合适的范围
内才有利于植物的生长，过高会抑制植物生长而出现玻璃化，
过低则不利于芽苗增殖。ＩＡＡ是促进细胞分裂和生长的内源
性激素，在中华石蝴蝶的组织培养过程中，添加６－ＢＡ的同
时配合ＮＡＡ、ＩＡＡ使用，并使其达到合适的比例，才能达到较
为理想的效果。在本试验中，中华石蝴蝶的继代增殖在ＭＳ＋
１０ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０．２ｍｇ／ＬＮＡＡ＋０．１ｍｇ／ＬＩＡＡ培养基中
较好，增殖倍数高，芽苗粗壮且颜色翠绿。在培养基中添加活
性炭可有效防止褐变，提供生根的暗环境，降低培养基中的盐
离子浓度或吸附利于生根的物质［７］。中华石蝴蝶在添加活
性炭的ＭＳ＋０．５ｍｇ／ＬＩＢＡ＋０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ＋１．０ｇ／Ｌ活性
炭培养基中生根率达到１００％。
中华石蝴蝶在ＭＳ培养基中可以生长但不能进行试管开
花，说明激素是中华石蝴蝶开花所需要的条件，在培养基中加
入６－ＢＡ可以促进开花，因为植物在开花分化时，细胞分裂
素是必不可少的［８］。当培养基中只添加单一的激素时，诱导
试管开花率相对都比较低，在试验中发现，６－ＢＡ配合使用
一定量的生长激素 ＮＡＡ时能使试管开花率提高。这也进一
步说明细胞分裂素与生长素的组合使用可产生更利于中华石
蝴蝶试管开花的交互作用效果。本试验成功诱导了中华石蝴
蝶试管开花，但开花率仍需要进一步提高，关于其开花的调控
机制尚须深入研究。
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—００１— 江苏农业科学 ２０１６年第４４卷第１２期