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HPLC测定广西产匙羹藤叶中牛弥菜醇A含量



全 文 :[收稿日期] 2011-12-16
[基金项目] 广西自然科学基金项目(桂科自 0229044) ;广西
教育厅科研项目(桂教科 2001) ;广西中医学院重
点科研项目(ZD2004010)
[第一作者] 丘琴,博士研究生,从事药学和中药学的教学和科
研 工 作,Tel:0771-3124407,E-mail:qiuqin1239
@ 163. com
[通讯作者] * 甄汉深,教授,博士生导师,从事药学和中药学
的教学和科研工作,Tel:0771-2918239,E-mail:
8zhen@ 163. com
HPLC测定广西产匙羹藤叶中牛弥菜醇 A含量
丘琴1,2,甄汉深2* ,黄小秋2,黄培倩2,石琳2
(1. 成都中医药大学,成都 611137;2. 广西中医学院,南宁 530001)
[摘要] 目的:对广西产匙羹藤叶中牛弥菜醇 A 的含量进行测定,为科学评价及有效控制其质量提供依据。方法:采用
高效液相色谱法,以氨基柱 (4. 6 mm × 250 mm,5 μm)为色谱柱,流动相乙腈-水(87 ∶ 13) ,流速 1. 0 mL·min - 1,检测波长 207
nm。结果:牛弥菜醇 A 在 2. 4 ~ 12 μg 与峰面积成良好的线性关系(r = 0. 999 7) ,平均回收率为 101. 39%,RSD 0. 74%。结
论:所建立的方法准确,快速,灵敏度高,重复性好,可作为广西产匙羹藤叶的质量控制方法。
[关键词] 匙羹藤叶;牛弥菜醇 A;高效液相色谱法
[中图分类号] R284. 1 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9903(2012)09-0136-03
Determination of Conduritol A in Leaf of
Gymnema sylvestre by HPLC
QIU Qin1,2,ZHEN Han-shen2* ,HUANG Xiao-qiu2,HUANG Pei-qian2,SHI Lin2
(1. Chengdou University of Tradition Chinese Medicine,Chengdou 611137,China;
2. Guangxi Traditional Chinese Medical University,Nanning 530001,China)
[Abstract] Objective:To determine the content of conduritol A in the leaf of Gymnema sylvestre.
Method:HPLC was adopted,the separation was performed on a Thermo NH2 column (4. 6 mm × 250 mm,5
μm) ,acetonitrile-water (87∶ 13)was used as the mobile phase,the flow rate was 1. 0 mL·min - 1,the detection
wavelength was set at 207 nm. Result:The liner range of conduritol A was 2. 4-12 μg (r = 0. 999 7) ,the average
recovery rate was 101. 39%,RSD was 0. 74% . Conclusion:The method was accurate,sensitive,quick and
simple. It can be used as the quality control method of the leaf of G. sylvestre.
[Key words] Gymnema sylvestre;conduritol A;HPLC
匙羹藤又名金刚藤、武靴藤、羊角藤,为广西民
间用药,具有清热解毒、祛风止痛功效,用于风湿关
节痛、痈疖肿毒、毒蛇咬伤[1-2]。牛弥菜醇 A 是匙羹
藤降血糖的主要有效成分之一。韦建华等[5]研究
表明牛弥菜醇 A 能明显降低四氧嘧啶性糖尿病小
鼠的血糖值,增强正常小鼠的负荷糖耐量,对抗肾上
腺素引起的小鼠血糖升高。目前采用 HPLC 测定匙
羹藤叶中牛弥菜醇 A 的含量未见有公开报道,本实
验采用 HPLC 对广西产匙羹藤叶中的牛弥菜醇 A 进
行了含量测定,为广西匙羹藤叶质量控制方法的建
立提供了科学依据。
1 材料
1. 1 仪器 Agilent 1100 高效液相色谱仪,含在线
真空脱气机,高压四元梯度泵,标准自动进样器,智
能化柱温箱,可变波长检测器,HP1100 色谱工作站;
BP211D 型电子分析天平(德国赛多利斯) ,KQ-
200VDB 型双频数控超声波清洗器(昆山市超声仪
器有限公司) ,Millipore Simlicity-185 超纯水器(美国
密里博公司)。
1. 2 试药 匙羹藤叶采于广西南宁地区(安吉、邕
·631·
第 18 卷第 9 期
2012 年 5 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 18,No. 9
May,2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.09.023
宁、武鸣、隆安、崇左、扶妥) ,经广西中医学院梁子
宁副教授鉴定为萝藦科植物匙羹藤 Gymnema
sylvestre(Retz.)Schult 的干燥叶;牛弥菜醇 A 对照品
(自制,纯度大于 98%) ;甲醇,乙腈为色谱纯,水为
高纯水,其余试剂为分析纯。
2 对照品牛弥菜醇 A 的纯度测定
mp:139 ~ 141 ℃。牛弥菜醇 A 的 IR 见图 1。
可见-紫外光谱见图 2。
图 1 牛弥菜醇 A 的 IR(测定条件:KBr 压片)
图 2 牛弥菜醇 A 可见-紫外光谱
在薄层色谱中,用 3 个展开系统,6 个不同浓度
的梯度点样,对牛弥菜醇 A(1 g·L - 1)进行纯度检
查,均为单一斑点,未见杂质斑点;在 HPLC 中,用两
种不同的流动相系统乙腈-水(90:10) ;甲醇-水(88∶
12)对牛弥菜醇 A(5 g·L - 1)进行纯度检查,结果测
定对照品质量分数分别为 99. 04%,98. 84%,符合
化学对照品要求。
3 方法与结果
3. 1 色谱条件 色谱柱为氨基柱(汉邦公司,4. 6
mm × 250 mm,5 μm) ,流动相乙腈-水(87 ∶ 13) ,流
速 1. 0 mL·min - 1,检测波长 207 nm,进样量 10 μL。
在此色谱条件下,样品在与对照品相对应的保留时
间出现相同的色谱峰,且分离度良好,见图 3。
3. 2 对照品溶液的制备 精密称取牛弥菜醇 A 对
照品 15. 00 mg,加 50% 甲醇溶解,并定容至 25 mL
量瓶中,即得(每 1 mL 含牛弥菜醇 A 0. 6 mg)。
3. 3 供试品溶液的制备 取匙羹藤叶粉末约 0. 5
g,精密称定,精密加入 25. 00 mL 50%甲醇,称重,超
1. 牛弥菜醇 A
图 3 牛弥菜醇 A 对照品(A)及匙羹藤叶供试品(B)HPLC
声提取 30 min,放冷,补重,滤过,滤液进行离心,取
上清液即得。
3. 4 线性关系的考察 分别精密吸取 3. 2 项下牛
弥菜醇 A 对照品溶液(0. 6 g·L - 1)1,2,3,4,5 mL,
置 5 mL 量瓶中,并分别用甲醇稀释至刻度,精密吸
取 20 μL 进样。以牛弥菜醇 A 峰面积为纵坐标
(Y) ,以牛弥菜醇 A 质量为横坐标(X) ,进行线性回
归,绘制标淮曲线,得回归方程为 Y = 318. 73X +
72. 98(r = 0. 999 7)。结果表明牛弥菜醇 A 在 2. 4
~ 12 μg 呈良好的线性关系。
3. 5 精密度试验 取对照品溶液,连续进样 5 次,
每次进样 10 μL,对峰面积进行考察,峰面积的 RSD
0. 37%,结果表明仪器精密度良好。
3. 6 稳定性试验 取同一供试品溶液,分别于 0,
2,4,6,8,10,12,16,24 h 进样分析,记录色谱图,对
峰面积进行考察,计算峰面积的 RSD 0. 5%,表明供
试品溶液在 24 h 内稳定。
3. 7 重复性试验 取样品 6 份,分别按 3. 3 项下供
试品溶液的制备方法制备供试品溶液,按 3. 1 项下
的色谱条件进行测定,并计算其牛弥菜醇 A 含量,
结果牛弥菜醇 A 的平均含量为 42. 59 mg·g - 1,RSD
0. 61%,该方法重复性良好。
3. 8 加样回收率试验 取约 0. 25 g 匙羹藤叶(牛
弥菜醇 A 含量为 42. 59 mg·g - 1)粉末 6 份,精密称
定,分别精密加入牛弥菜醇 A 对照品适量,按供试
品溶液制备方法制备,并按上述色谱条件进行测定,
计算牛弥菜醇 A 加样回收率。结果牛弥菜醇 A 的
平均回收率为 101. 39%,RSD 0. 74%,见表 1。
3. 9 样品含量测定 样品按不同地点(广西南宁
地区:安吉、邕宁、武鸣、隆安、崇左、扶妥)取样。分
别取匙羹藤叶粉末 6 份,按 3. 3 项下供试品溶液制
备方法制备,并按上述色谱条件进行测定,结果见
表 2。
·731·
丘琴,等:HPLC 测定广西产匙羹藤叶中牛弥菜醇 A 含量
表 1 牛弥菜醇 A 的加样回收率试验
No. 称样量 / g 样品含量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD /%
1 0. 2486 10. 69 10. 52 21. 35 101. 32
2 0. 2585 11. 01 10. 52 21. 65 101. 14
3 0. 2555 10. 88 10. 52 21. 61 101. 10 101. 39 0. 74
4 0. 2510 10. 69 10. 52 21. 46 102. 32
5 0. 2508 10. 68 10. 52 21. 43 102. 18
6 0. 2576 10. 97 10. 52 21. 52 100. 29
表 2 匙羹藤叶中牛弥菜醇 A 含量测定(n = 3)
样品 称样量 / g 样品含量 /mg·g - 1 RSD /%
安吉 0. 500 9 44. 09 1. 58
邕宁 0. 500 7 41. 97 0. 71
武鸣 0. 500 3 42. 58 0. 94
隆安 0. 500 6 42. 59 0. 16
崇左 0. 501 0 42. 97 0. 84
扶妥 0. 500 4 43. 34 0. 26
4 讨论
通过全波长扫描得到牛弥菜醇 A 在 207 nm 有
最大吸收,因此选择 207 nm 为检测波长。
对于牛弥菜醇 A 的 HPLC 测定,曾采用乙腈-水
和甲醇-水流动相系统,经对比试验表明,乙腈-水
(87∶ 13)分离效果好,适于本品的含量测定;曾采用
超声提取法,回流提取法和索氏提取法考察牛弥菜
醇 A 最优的提取方法,结果表明超声提取法提取的
效率最高,且简便快速。
[参考文献]
[1] 江苏新医学院 .中药大辞典 . 上册[M]. 上海:上海人
民出版社,1977:2461.
[2] 《全国中草药汇编》编写组 . 全国中草药汇编 . 下册
[M].北京:人民卫生出版社,1978:573.
[3] Porchezhian E,Dobriyal R M. An overview on the
advances of Gymnema sylvestre:chemistry,pharmacology
and patents[J]. Pharmazie,2003,58(1) :5.
[4] 甄汉深,梁洁,吴怀恩,等 . 匙羹藤的研究进展[J].广
西中医学院学报,2004,7(1) :63.
[5] 韦建华,甄汉深,丘琴,等 . 匙羹藤有效成分牛弥菜醇
A 降血糖作用研究[J]. 中国中药杂志,2008,33
(24) :2961.
[责任编辑 蔡仲德]
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第 18 卷第 9 期
2012 年 5 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 18,No. 9
May,2012