全 文 ：价铁血红蛋白转变为三价铁血红蛋白，破坏血红蛋白携氧能
力，造成脑和机体重要器官、组织供氧不足而死亡，一般具
有升高血浆血红蛋白量作用的受试物可以延长小鼠亚硝酸
钠中毒存活时间［4］，但 ADE 配伍组对亚硝酸钠中毒致小鼠
组织缺氧无明显的保护作用，提示香丹注射液 ADE 配伍组
不能改善血浆血红蛋白量。
根据香丹注射液 ADE 配伍组的高效液相图谱可知，其
主要化学成分量的多少依次为:丹参素 ＞ 迷迭香酸 ＞丹酚
酸 B ＞丹酚酸 D ＞丹酚酸 C ＞原儿茶醛。从 3 个缺氧模型实
验结果表明香丹注射液 ADE配伍组对小鼠全身性缺氧和异
丙肾上腺素所致的心肌缺氧有明显的改善作用，但关于其耐
缺氧的具体有效成分和机制还有待于进一步研究。
参考文献:
［1］ 杨 丽．香丹注射液的临床用途及其不良反应［J］． 中华实用
医药杂志，2004，14(4):60-61．
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［3］ 尹永芹，朱俊访，沈志滨，等．神经网络分析香丹注射液抗心肌
缺血有效成分的谱效相关性研究［J］． 中草药，2009，40(8):
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用的影响［J］． 石河子大学学报，2008，26 (4):477-479．
隔山消不同极性提取物抗菌作用实验研究
洪小凤1， 王 涛2， 施贵荣1， 王立云1， 李 辉1*
(1． 云南省大理学院药学院，云南 大理 671000;2． 云南省大理学院基础医学院，云南 大理 671000)
收稿日期:2010-10-15
基金项目:云南省教育厅科学研究基金项目(2010J052);2006 年大理州科研基金资助
作者简介:洪小凤(1984—)，女，硕士生，研究方向:中药药理。Tel:13887237453，E-mail:satan1885@ hotmail． com
* 通信作者:李 辉，男，教授，硕士生导师，研究方向:神经药理学。Tel:13013362361，E-mail:ynlih@ yahoo． com． cn
摘要:目的 观察隔山消乙酸乙酯提取物和丙酮提取物的抗菌活性。方法 采用试管稀释法测定上述提取物对各实验
菌株的最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)，采用纸片扩散法测定抑菌圈直径。结果 ① 隔山消提取物对各实
验菌均有不同程度的抑制作用，对葡萄球菌、痢疾志贺菌的抑制作用最强，乙酸乙酯部分 MIC值均为 0． 39 mg /mL，丙酮
部分均为 0． 78 mg /mL。同一种提取物对同一种菌的不同菌株表现出相近的抗菌活性。② 纸片扩散法结果显示两种提
取物均有明显抗菌作用，并且随着浓度降低抑菌圈直径逐渐减小，差异有统计学意义(P﹤ 0． 001)。结论 隔山消提取
物均具有良好的体外抗菌作用，乙酸乙酯部分抗菌作用强于丙酮部分。
关键词:隔山消提取物;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌;抗菌作用;抑菌圈;最小抑菌浓度
中图分类号:R285． 5 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2011)06-1052-03
紫地榆 Geranium strictipes Knuth，牻牛儿苗科老鹳草属
植物，药用部位为根，民间称隔山消。该药在《大理中药资源
志》、《中药大辞典》、《全国中草药汇编》等书籍中均有收载。
其在民间主要用于治疗厌食、肠炎、红白痢疾、消化不良等病
症［1］。已报道的化合物主要是鞣质类和酚酸类［2］，而对该
药的有关药理、毒理、临床应用、药材标准等方面的研究报道
都非常少。为了探讨隔山消在民间治疗肠炎、红白痢疾的药
理作用基础，本课题组前期对隔山消粗提取物的体内外抗菌
作用进行了初步研究，发现其具有显著的广谱抗菌作用［3］。
为此，我们进一步研究隔山消不同极性部位提取物对临床分
离的耐药菌株和常见致病菌的抑制作用。
1 材料与方法
1． 1 药材 隔山消，购自大理集盛大药房。经鉴定为牻牛
儿苗科植物紫地榆 Geranium strictipes Knuth的干燥根。
1． 2 供试菌株 金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、大肠埃希
菌、痢疾志贺菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、质控菌金黄
色葡萄球菌 ATCC25923、大肠埃希菌 ATCC25922，均由大理
学院基础医学院病原微生物教研室惠赠。
所有 31 株临床分离金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和铜
绿假单胞菌来自大理州医院住院病人和门诊病人。根据菌
落形态、革兰染色特点和胶乳凝集试验，经 VITEK-32 全自动
微生物分析仪 GPI 鉴定卡(法国生物梅里埃公司生产)做菌
株鉴定。共鉴定出 MRSA13 株、产超广谱 β 内酰胺酶(ES-
BLs)大肠埃希菌 15 株、铜绿假单胞菌 1 株。
1． 3 培养基 MH琼脂(杭州天和微生物试剂有限公司，批
号:090817);MH肉汤(杭州天和微生物试剂有限公司，批
号:090526)。
1． 4 仪器设备 AV-3070 垂直型超净工作台(TELSTAR)，
2501
2011 年 6 月
第 33 卷 第 6 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
June 2011
Vol． 33 No． 6
隔水式恒温培养箱(上海一恒科技有限公司)，YXQ-LS-50SII
型立式压力蒸汽灭菌器(上海博讯实业有限公司医疗设备
厂)。
1． 5 实验方法
1． 5． 1 耐药菌株的筛选 采用液体稀释法，参照 NCCLS /
CLIS2006 标准判断结果［4］。
1． 5． 2 药物的提取 取隔山消 10． 95 kg，粉碎后用 85%乙
醇回流提取 3 次。合并提取液减压浓缩得乙醇浸膏 3． 58
kg。浸膏用甲醇溶解后，用 80 ～ 100 目硅胶拌样，过硅胶柱
层析，然后分别用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯和丙酮洗脱，
浓缩各组分得石油醚部分、三氯甲烷部分、乙酸乙酯部分、丙
酮部分。因石油醚部分和三氯甲烷部分量太少，此次实验只
做乙酸乙酯部分及丙酮部分。临用前取乙酸乙酯和丙酮部
分低温冷冻干燥成粉末，再用适当溶剂配制成所需浓度。
1． 5． 3 抑菌圈试验菌片的制备 将定性滤纸制成 6 mm 直
径的圆片，高压蒸汽灭菌，干燥保存备用。取处理好的滤纸
片放入灭菌培养皿内，每 100 片纸片滴加隔山消提取液 100
μL，对照组滴加 100 μL溶剂，每片含生药量约为 2． 57 mg。
1． 5． 4 细菌悬液的制备［5-6］ 将所有供试菌株分别接种于
MH琼脂平板上，置 37 ℃恒温培养箱培养 24 h 活化，待用。
挑取琼脂平板上形态相同的菌落，用灭菌生理盐水校正菌液
浓度，使其相当于 0． 5 麦氏比浊标准，再用 MH 肉汤稀释至
含菌量约 107CFU /mL。稀释后的菌液在 15 min内接种。
1． 5． 5 MIC及 MBC 的测定［5-6］ 取灭菌小试管 15 支为一
组。其中每组第 13、14、15 管分别标上“肉汤对照”、“检测
菌对照”、“溶剂对照”。每支试管分别加入 MH 肉汤 2 mL。
配制隔山消乙酸乙酯提取物和丙酮提取物原液浓度为 100
mg /mL。用吸管吸取药液 2 mL放入第 1 管内，混匀后吸取 2
mL放入第 2 管，同样混匀后吸出 2 mL放入第 3 管。依此法
逐管进行稀释至第 12 管。各管药物浓度分别为 50、25、
12． 5、6． 25、3． 125、1． 56、0． 78、0． 39、0． 20、0． 10、0． 05 mg /
mL，除“肉汤对照”管外其余各管均加入菌液 0． 1 mL，放入
37 ℃恒温培养箱中培养 24 h，取出，观察生长情况。在对照
管符合要求的情况下，以肉眼未见生长的最低药物浓度为隔
山消对细菌的 MIC。再从未见细菌生长的试管中取 0． 02
mL于相应培养基的琼脂平板上作次代培养，培养过夜，观察
有无细菌生长。平皿上计数少于 5 个菌落的最低药物浓度
为隔山消对细菌的 MBC。
实验中应用金黄色葡萄球菌 ATCC25923 和大肠埃希菌
ATCC25922 作为质控菌株。
1． 5． 6 K-B实验法 用无菌棉签蘸取 0． 5 麦氏比浊标准的
菌悬液，在管内壁将多余菌液旋转挤去后在琼脂表面均匀涂
布，然后将含药纸片贴于琼脂表面。置 37 ℃恒温培养箱孵
育 18 ～ 20 h后观察结果，测量抑菌圈直径。各稀释液的每
项抑菌圈实验均平行重复 6 次。
结果判断:抑菌圈直径大于 6 mm 者为有抑菌作用，小
于或等于 6 mm 者判为无抑菌作用。溶剂对照组应无抑菌
圈产生，否则试验无效。
2 结果
2． 1 隔山消提取物对各供试菌株的 MIC和 MBC测定
隔山消乙酸乙酯提取物和丙酮提取物对各实验菌株的
MIC和 MBC测定结果见表 1。
表 1 隔山消提取物对各实验菌株的 MIC
及MBC结果
菌株
乙酸乙酯提取物
/(mg /mL)
MIC MBC
丙酮提取物
/(mg /mL)
MIC MBC
金黄色葡萄球菌 0． 39 3． 125 0． 78 1． 56
MRSA 0． 39 1． 56 ～ 3． 125 0． 78 0． 78 ～ 3． 125
白色葡萄球菌 0． 39 1． 56 0． 78 3． 125
大肠杆菌 6． 25 12． 5 25 50
产 ESBLs大肠杆菌 6． 25 12． 5 6． 25 ～ 12． 5 25 ～ 50
痢疾志贺菌 0． 39 1． 56 0． 78 3． 125
铜绿假单胞菌 3． 125 6． 25 6． 25 12． 5
铜绿分离株 3． 125 6． 25 6． 25 12． 5
枯草芽孢杆菌 1． 56 6． 25 3． 125 12． 5
ATCC25923 0． 39 3． 125 0． 78 1． 56
ATCC25922 6． 25 12． 5 12． 5 50
由表 1 结果显示，隔山消提取物对各实验菌株均有不同
程度的抑制作用，对葡萄球菌、痢疾志贺菌的抑制作用最强，
乙酸乙酯部分 MIC值均为 0． 39 mg /mL，丙酮部分均为 0． 78
mg /mL。对枯草芽孢杆菌作用次之，乙酸乙酯部分 MIC值为
1． 56 mg /mL，丙酮部分为 3． 125 mg /mL。
2． 2 隔山消提取物纸片扩散法的抑菌实验结果
由表 2 可知，100、50、25 mg /mL的乙酸乙酯和丙酮提取
物对 MRSA及标准菌株均有明显抑制作用，并且随着浓度降
低抑菌圈明显缩小(与对照组比较，P ﹤ 0． 001)。乙酸乙酯
提取物抑菌圈大于相应浓度的丙酮提取物，差异有统计学意
义(P﹤ 0． 001)。各相应浓度抑菌圈直径与 ATCC25923 比
较没有明显差异。
表 2 隔山消提取物对 13 株MRSA菌株的抑制作用
药物
剂量
/(mg /mL)
抑菌圈直径 /mm
MRSA ATCC25923
对照组 － － －
乙酸乙酯提取物 100 12． 56 ± 0． 23﹡ 11． 42 ± 0． 49﹡
50 10． 85 ± 0． 31﹡ 10． 08 ± 0． 38﹡
25 8． 71 ± 0． 49﹡ 8． 83 ± 0． 76﹡
丙酮提取物 100 11． 01 ± 0． 29﹡ 10． 50 ± 0． 45﹡
50 9． 91 ± 0． 28﹡ 9． 59 ± 0． 58﹡
25 8． 53 ± 0． 24﹡ 8． 67 ± 0． 26﹡
注:“ －”表示无抑菌圈。与对照组比较，﹡ P﹤ 0． 001。
表 3 结果显示，隔山消提取物 50、25、12． 5 mg /mL 3 个
浓度对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、痢疾志贺菌、枯草杆
菌有不同程度的抑菌效果。
3 讨论
目前，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)及产超广谱
β内酰胺酶(ESBLs)的肠杆菌科细菌已成为一些大型综合
3501
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表 3 隔山消提取物对各实验菌株的抑制作用
药物 剂量 /(mg /mL)
抑菌圈直径 /mm
金葡菌 白葡菌 痢疾 枯草 绿脓 大肠
乙酸乙酯 50 8． 17 ± 0． 94 10． 89 ± 1． 08 18． 33 ± 0． 52 8． 50 ± 0． 35 － －
提取物 25 7． 22 ± 0． 75 10． 00 ± 0． 43 16． 25 ± 0． 88 7． 21 ± 0． 58 － －
12． 5 6． 67 ± 0． 25 10． 06 ± 0． 30 15． 83 ± 0． 26 6． 63 ± 0． 31 － －
丙酮 50 6． 89 ± 0． 22 10． 33 ± 0． 71 17． 17 ± 0． 26 － － －
提取物 25 6． 61 ± 0． 22 10． 44 ± 0． 53 15． 11 ± 0． 33 － － －
12． 5 6． 50 ± 0． 00 10． 21 ± 0． 39 14． 22 ± 0． 26 － － －
注:“ －”表示无抑菌圈。
医院最常见的医院感染菌。同时又表现为多重耐药性，给临
床治疗带来了极大的困难。
本课题组在前期实验中发现隔山消总提取物具有较强
的广谱抗菌作用，因此拟定对其抗菌活性部位进行进一步追
踪。实验结果显示，隔山消总提取物经硅胶柱层析得到的乙
酸乙酯部分和丙酮部分对各菌株均显示出不同程度的体外
抗菌活性，尤其是对葡萄球菌科细菌及痢疾志贺菌的抑制作
用最强。整体来讲，乙酸乙酯提取物抑制细菌生长的作用较
丙酮提取物略强。同一种提取物对 MRSA、产 ESBLs大肠埃
希菌的不同菌株表现出相近的抑菌活性。并且，隔山消提取
物对临床分离株和教学用的实验菌株也表现出相近的抑制
作用。
本次实验结果显示，隔山消两种提取物对 MRSA均有很
强的抗菌活性，尤其是乙酸乙酯部分。目前，本课题组正针
对乙酸乙酯部分进行进一步的分离及活性追踪，以期筛选出
抗菌活性更强的天然抑菌剂。
参考文献:
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乌饭树叶总黄酮体外抗氧化活性
蔡凌云1，2
(1． 贵州省凯里市 凯里学院环境与生命科学学院，贵州 凯里 556011;2． 四川省南充市西华师范大学生命
科学学院;西华师范大学生命科学学院，西南野生动植物资源保护教育部重点实验室，四川 南充 637002 )
收稿日期:2010-09-13
基金项目:贵州省教育厅自科项目［黔教科(2010078)］;贵州省凯里学院重点项目(2009Z0903);西南野生动植物资源保护教育部重点实
验室开放基金(XNYB-0903)资助
作者简介:蔡凌云(1972—)，女，高级实验师，硕士，主要从事天然产物提取、分离和结构鉴定研究。Tel:15185627292，E-mail:cail-
ingyun2005@ sina． com
摘要:目的 研究乌饭树叶总黄酮的体外抗氧化活性。方法 用对羟基自由基和对 DPPH 自由基清除率和来考察其总
黄酮的体外抗氧化活性大小。结果 乌饭树叶总黄酮抗氧化能力强，对 DPPH 自由基和羟基自由基的 EC50 分别为
22． 30 mg /L和 38． 00 mg /L。结论 乌饭树叶是一种良好的天然抗氧化剂来源。
关键词:乌饭树;DPPH自由基;羟基自由基;抗氧化活性
中图分类号:R284． 2 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2011)06-1054-04
乌饭树 Vaccinium bracteatum Thunb为杜鹃花科 Erioaoe-
ae越桔属 Vaccinium植物，据《中药大辞典》载，乌饭树叶具
有益精气、强筋骨、明目、止泄的功用，内含有花青素、β-谷甾
醇、熊果酸、蓝黑色素(主要成分是槲皮素)、异荭草素、对羟
基桂皮酸、内消旋肌醇、α-亚麻酸、乌索酸、齐墩果酸、三十一
烷及鞣质等成分。乌饭树叶具有促进视红素再合成，Vp 样
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Vol． 33 No． 6