全 文 ：收稿日期:2007-12-30;　修订日期:2008-03-26
基金项目:贵州省中药现代化专项资助项目(黔科合中药专字 [ 2007]
5021号);
北京大学天然药物及仿生药物国家重点实验室开发基金资助项目
作者简介:郭东贵(1977-),男(汉族),河南南阳人 ,现为贵州大学生命科学
学院在读硕士研究生 ,学士学位 ,主要从事天然产物活性成分研究工作.
＊通讯作者简介:周　英(1971-), 女(汉族),贵州贵阳人 , 现任贵州大学
生命科学学院副教授 ,博士学位 ,主要从事药物化学 、天然产物化学的研
究工作.
山慈姑体外抑菌活性的初步研究
郭东贵1 ,王　寒 1 ,朱晓鹤 1 ,周　英1, 2＊
(1.贵州大学生命科学学院 ,贵州 贵阳　550025;
2.北京大学·天然药物及仿生药物国家重点实验室 ,北京　100191)
摘要:目的 探讨山慈姑的体外抑菌活性。方法 将山慈姑提取物经大孔树脂(D-101)分离得到 4个组分 A, B, C和 D,
用倍比稀释法测定其抑菌活性。结果 金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)对组分 D有很强的敏感性 , MIC≤12.5mg/
ml, 对组分 B有中等强度的敏感性 , MIC为 12.5 ～ 25 mg/ml;白色念珠菌(Candidaalbicans, ATCC-10231)对组分 B和组
分 D有中等强度的敏感性 , MIC为 12.5 ～ 25 mg/ml, 大肠杆菌(Escherichiacoli)对各组分的敏感性都较低 , MIC>50 mg/
ml。结论 山慈姑提取物 B和 D对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌具有较强的抑菌效果。
关键词:山慈姑;　体外抑菌;　倍比稀释法;　最低抑菌浓度
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)03-0594-01
InitialStudyontheinvitroAntibacterialActivityofPseudobulbusCremastraeSeuPleiones
GUODong-gui1 , WANGHan1 , ZHUXiao-he1 , ZHOUYing1, 2＊
(1.ColegeofLifeScience, GuizhouUniversity, Guiyang550025, China;2.StateKeyLaboratoryofNatural
andBiomimeticDrugs, PekingUniversity, Beijing, 100191, China)
Abstract:ObjectiveTostudytheinvitrogrowthinhibitoryactivityofpseudobulbuscremastraeseupleionesonbacteria.MethodsTheextractfrompseudobulbuscremastraeseupleionewasseparatedbythewayofresincolumnchromatography(D-101)toobtain
fourconstituentsA, B, CandD, andtheirantibacterialactivitiesinvitroweredeterminedbydoubledilution.ResultsStaphylo-
coccusaureusshowedahighsensitivitytoconstituentD(MIC≤12.5 mg/ml), andamediumsensitivitytoconstituentB(12.5
mg/ml50mg/ml).ConclusionThe
constituentBandDfrompseudobulbuscremastraeseupleionehavegoodantibacterialactivityagainstStaphylococcusaureusand
Candidaalbicans.
Keywords:Pseudobulbuscremastraeseupleiones;　Antibacterialeffectinvitro;　Doubledilution;　MIC
　　山慈姑为兰科植物杜鹃兰 Cremastraappendiculata(D.Don)
Makino, 独蒜兰 Pleionebulbocodioides(Franch.)Rolfe或云南独蒜
兰 Pleioneyun-nanensisRolfe的干燥假鳞茎 , 前者习称 “毛慈
姑” ,后二者习称 “冰球子” [ 1] , 主产于贵州 、四川 、云南等长江以
南各省区。作为传统的中药材 ,山慈姑始载于唐 《本草拾遗》 ,具
有清热解毒 、消肿散结的功效。本文旨在探讨山慈姑的体外抑菌
作用 , 为进一步开发利用山慈姑奠定基础。
1 　材料与仪器
1.1　 材料 山慈姑由贵州信邦中药发展有限公司 GAP种植基
地提供。大孔树脂(D-101,天津化学试剂公司)。
1.2 　试剂 氯仿(AR, 四川鸿鹤精细化工有限责任公司), 醋酸
乙酯(AR,四川鸿鹤精细化工有限责任公司), 95%乙醇(AR, 重
庆川江化学试剂厂),蒸馏水(自制), 无菌水(自制)等。
1.3　菌种 金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大肠杆菌(Esche-
richiacoli)由中国微生物菌种保藏中心提供 ,白色念珠菌(Candidaalbi-
cans)由广东省微生物研究所微生物菌种保藏中心提供。
1.4　培养基 营养肉汤固体培养基:蛋白胨 10g,牛肉膏 3g,氯
化钠 5 g,琼脂 15 g, 定容至1 000 ml, pH值调至 7.0;沙氏固体培
养基:葡萄糖 20 g, 蛋白胨 10 g, 酵母膏 5 g, 琼脂 15 g, 定容至
1 000 ml, pH调节 5.0。液体培养基组成除了不加琼脂外 , 与相
应的固体培养基相同。
1.5　仪器 高低温恒温培养箱(上海一恒科技有限公司),旋转
蒸发仪(BUCHIR-200), SHZ-D(III)循环水式真空泵(河南省
巩义市予华仪器有限公司),电子天平(OHAUS),净化工作台(上
海市纯昱科学仪器有限公司), 真空冷冻干燥机(LABCONCO),
超低温冰箱(海尔), 双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用
仪器有限公司 TU-1901)。
2 　方法
2.1 　样品的制备 取粉碎后的山慈姑 100 g,用 70%乙醇浸提 3
次 , 72 h/次 , 合并提取液 , 减压浓缩至适量 , 依次用氯仿 、醋酸乙
酯萃取后 ,取水层减压浓缩 , 浓缩液用 95%乙醇溶解 , 过滤 ,滤渣
以蒸馏水 、25%乙醇 、50%乙醇 、75%乙醇为流动相 , D-101为固
定相得到四组分 ,分别减压浓缩 、冷冻干燥后得组分 A(水洗脱
物), B(25%乙醇洗脱物), C(50%乙醇洗脱物)和 D(75%乙醇
洗脱物)。
2.2 　菌种培养 金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌用营养肉汤培养基
(组成成分见上)活化培养 , 白色念珠菌采用沙氏培养基(组成成
分见上)活化培养 ,分别将各菌种浓度调至 OD600≈1[ 2] ,备用。
2.3 　最低抑菌浓度(MIC)的测定 取 A、B、C、D四组分各 100
mg溶于 1 ml无菌水中使其充分溶解后 , 用细菌过滤器过滤 , 取
滤液 0.3ml,用相应的液体培养基倍比稀释 [ 3]成样品浓度分别为
50, 25, 12.5mg/ml和 6.25mg/ml。取稀释后的样品各 300 μl, 分
别加入活化的菌悬液 30 μl(OD600≈1)后培养 16 h, 培养温度为:
金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌为 35℃, 白色念珠菌为 27℃。培养后
分别取 100 μl均匀涂布在相应的固体培养基上 , 在各自的温度
下恒温培养 24 h, 并以相应溶剂作对照 , 测定其最小抑菌浓度
(MIC)[ 4] 。
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 3期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.3　
3 　结果
3.1　 实验结果 山慈姑不同组分对金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌
和白色念珠菌的 MIC结果见表 1。
表 1　山慈姑不同组分的最低抑菌浓度 mg· ml-1
实验样品 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 白色念珠菌
A >50 >50 >50
B 12.5～ 25 >50 12.5 ～ 25
C >50 >50 >50
D ≤6.25 >50 12.5 ～ 25
对照组 >>50
3.2 　分析 目前国内外尚无统一中草药对细菌的 MIC标准 ,结
合本实验结果 , 笔者参照同类实验 [ 5]的标准作为判断指标 , 金黄
色葡萄球菌 、大肠杆菌和白色念珠菌对山慈姑各组分表现出不同
的敏感性:
金黄色葡萄球菌对组分 A和 C的敏感性较弱 , MIC>50 mg/
ml;对组分 B有较强的敏感性 , 12.5 mg/ml组分 D有很强的敏感性 , MIC≤6.25mg/ml。
大肠杆菌对山慈姑各组分的敏感性都较弱 , MIC>50
mg/ml。
白色念珠菌对组分 A和 C的敏感性较弱 , MIC>50 mg/ml;
对组分 B和 D有较强的敏感性 , 12.5 mg/ml4 　结论
中药抗菌药物具有安全性高 、不易引起耐药性等特点 , 使中
药抗菌药物的研究与开发越来越受到人们的重视。山慈姑作为
中药抗菌药物之一 ,由于地理和气候等条件的影响 , 其野生资源
越来越匮乏 ,本实验用大孔树脂层析柱将山慈姑提取物分段 , 以
致病细菌和真菌为测试菌种进行研究 , 研究发现 , 山慈姑提取物
中组分 B和 D对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌表现出较强的抑
菌活性 , 初步确定了山慈姑的抗菌性能和抗菌活性的有效组分 ,
为进一步完善其抗菌谱 、寻找活性成分以及更合理地开发利用奠
定基础 。
参考文献:
[ 1 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005:23.
[ 2 ] 　李兆鹏 ,张　栩 ,徐　斌.重组大肠杆菌高密度发酵中乳糖诱导表
达 hBLyS[ J].过程工程学报 , 2005, 5(4):446.
[ 3 ] 　徐修礼 ,杨佩红 ,孙怡群 ,等.真菌药敏纸片扩散法实验与应用研究
[ J] .临床检验杂志 , 2006, 24(4):278.
[ 4 ] 　陈枝岚 ,谢守珍.14种中草药体外抗白念珠菌作用研究 [ J] .医药
导报 , 2006, 25(8):765.
[ 5 ] 　周　英 ,段　震 ,李　燕 ,等.花松萝的体外抑菌活性实验研究 [ J] .
中国民族民间医药杂志 , 2007, 87(4):230.
收稿日期:2008-01-27;　修订日期:2008-04-30
基金项目:兰州理工大学校基金(No.SB05200403)
作者简介:张应鹏(1970-),男(汉族),甘肃合水人 ,现任兰州理工大学石
油化工学院副教授 ,博士学位 ,主要从事有机与药物化学研究工作.
藏药川西獐牙菜挥发性化学成分及抑菌活性研究
张应鹏1 , 杨云裳 1 , 刘　宇 1 , 马兴铭2
(1.兰州理工大学石油化工学院有机与药物化学研究所 ,甘肃 兰州　730050;
2.兰州大学基础医学院 ,甘肃 兰州　730000)
摘要:目的 研究川西獐牙菜挥发油的化学组成及其抑菌活性。方法 采用水蒸气蒸馏法提取挥发油 , 用 GC-MS进行成
分分析;选择金黄色葡萄球菌 、枯草芽孢杆菌 、伤寒沙门氏菌 、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌为代表菌种 , 对挥发油的抗菌
活性进行了初步研究。结果 分离出 88种成分 , 鉴定出 61种化合物 ,其峰面积相对含量约占挥发油总量的 91.32%。川
西獐牙菜挥发油的主要组分为二十六烷(12.88%), 二十八烷(17.83%), 1-碘 -十六烷(7.27%), 11-十烷基-二十一烷
(5.47%), 2-十二烷氧基 -乙醇(3.04%), 2-环己基 -十一烷(2.19%), 1-碘 -十八烷(3.21%), 四十四烷(5.47%),
二十九烷(4.29%), 11-十烷基 -二十一烷(5.47%), 三十烷(3.17%)等。结论 川西獐芽菜挥发油对金黄色葡萄球菌 、
大肠埃希菌和伤寒沙门氏菌有抑菌活性。
关键词:川西獐牙菜;　挥发油;　气相色谱 -质谱;　抑菌活性
中图分类号:R282.710.3;Q949.754.6　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)03-0595-03
StudyonChemicalCompositionandAntibacterialActivityofEssentialOilfromTibetan
FolkMedicineSwertiamussotiFranch
ZHANGYing-peng1＊ , YANGYun-shang1 ,LIUYu1 , MAXing-ming2
(1.InstituteofOrganic＆ MedicinalChemistry, SchoolofPetrochemicalEngineering, LanzhouUniversityof
Technology, Lanzhou730050, China;2.SchoolofBasicMedicalSciences, LanzhouUniversity, Lanzhou
730000, China)Abstract:ObjectiveTostudythechemicalcompositionoftheessentialoilfromSwertiamussotiFranch.MethodsTheessen-
tialoilwasobtainedbyhydrodistilation.ChemicalcomponentswereanalyzedbyGC-MS.Antimicrobialactivityofthevolatile
oilonStaphylococcusaureus, Bacilussubtilis, Salmonellatyphimurium, Escherichiacoli, Pseudomonasaeruginosawaspreliminarily
tested.Results 88 compoundswereisolatedandidentifiedrepresenting82.12% ofthetotaloil.Themainconstituentsoftheoil
wereHexacosane(12.88%), Octacosane(17.83%), 1-iodo-hexadecane(7.27%), 11-decyl-heneicosane(5.47%), 2 -
(dodecyloxy)-ethanol(3.04%), 2-cyclohexyl-undecane(2.19%), 1 -iodo-octadecane( 3.21%), Tetratetracontane
(5.47%), Nonacosane(4.29%), 11-decyl-heneicosane(5.47%), Triacontane(3.17%).ConclusionTheantibacterialactivity
ofessentialoilissignificanttoStaphylococcusaureus, Escherichiacoli, andSalmonelatyphimurium.
Keywords:SwertiamussotiFranch;　Essentialoil;　GC-MS;　Antimicrobialactivity
　　川西獐牙菜 SwertiamussotiiFranch, 龙胆科獐牙菜属 , 一年生
草本 ,高 15 ～ 60cm,主根黄色 , 生于海拔 3 600 ～ 3 800m的山坡 、
灌丛草地 、林缘 、河滩等 [ 1] , 在我国四川的西部 , 西藏及甘肃的海
西 、海北 、黄南 、玉树 、果洛等地区均有分布。川西獐芽菜也称为
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.3 时珍国医国药 2009年第 20卷第 3期