全 文 ：四川食品与发酵
SichuanFoodandFermentation
1993年,Stierle[1]等首先从短叶红豆杉的韧皮部
中分离到一株能产紫杉醇的内生真菌。随后研究者
在多种植物中分离到能产生与宿主相同或相似生
理活性代谢产物的内生菌,如产长春碱的长春花内
生菌等[2]。
重楼主要药用成分为甾体皂甙,具有止血、止
痛、抗肿瘤、免疫调节和抗生孕等多种生理活性,是
云南白药、宫血宁等多种药物的主要原料,其需求
量很大[3]。由于重楼的引种驯化和组织培养没有取
得突破性进展,重楼原料供不应求,寻找新的、可再
生的重楼替代资源成为必然[4]。周立刚[5]等从滇重楼
中分离得到发酵培养物含甾体化合物的内生真菌。
本文根据本实验室从华重楼(Parispolyphylachi-
nensisFranch)中分离得到 2株可发酵产生重楼甾
体皂甙的细菌,通过对TLC检测发现菌株 SS01和
SS02的发酵液与重楼总皂甙有颜色相同、迁移率相
当的显色带(斑)[6],所以可以认为其中含有重楼的
类似物,故通过水解成薯蓣皂甙元的方法[7]对发酵
产物皂甙元做定性的检测并用比色法定量检测。
1 材料和方法
1.1 材料试剂
本实验室筛选分离的两株含重楼类似物菌株,
薯蓣皂甙标准品(中国药检所)。
1.2 培养基
发酵培养基:液体马铃薯培养基。
两株华重楼内生菌的发酵产物中薯蓣皂甙的检测
任 智,张晓喻,冯定胜,王一丁 *
(四川师范大学生命科学学院,成都 610068)
摘要:本实验室从华重楼(ParispolyphylachinensisFranch)的地下块茎中分离出107株内生菌,经TLC筛选检测,菌
株SS01和SS02可产生甾体皂甙,通过水解发酵液检测到薯蓣皂甙元成分的存在,并通过比色法测定其含量。
关键词:华重楼;内生菌;薯蓣皂甙元
中图分类号:Q939.95 文献标识码:A 文章编号:1671-6892(2006)04-0054-0003
TestofDiosgeninintheZymophyticProductionofTwo
EndophytesfromParisPolyphylaChinensis
RENZhi,ZHANGXiao-yu,FENGDing-sheng,WANGYi-ding*
(ColegeofLifeScience,SichuanNormalUniversity,Chengdu610068)
Abstract:107kindsofendophyteswereisolatedfromtheundergroundstemsofParipolyphylachinensis,inwhichSS01
andSS02strainscouldproducesteroidaldiosgeninswhichwerescreenedbyTLC.
KeyWords:Parispolyphylachinensis;endophyte;diosgenin
收稿日期:2006-06-06
第42卷(总第132期)
1.3 样品制备
将菌株接种于发酵培养基中,培养2d~3d,将发
酵液抽滤,在滤液中加入20mol/L2mol/L的盐酸溶
液水解 2h,放冷后用石油醚萃取 3次,每次 20mL,
合并萃取液水洗至中性,旋转蒸发挥干石油醚,用
氯仿溶解于5mL容量瓶中(供TLC鉴定用)。
1.4 标准液的制备
精称薯蓣皂甙元标准品25mg,用氯仿溶解,定
容到50mL。
1.5 薯蓣皂甙及其甙元的TLC鉴定
以硅胶 G—0.5%CMC(1:5)铺板,自然干燥后放
入105℃烘箱活化30min。展开剂为氯仿:甲醇:水
(调整混合比例),显色液为10%磷钼酸、5%硫酸乙
醇溶液,将样品和标准品点样TLC鉴定。
1.6 酵液中的薯蓣皂甙元的含量的测定
1.6.1 标准曲线的制备:取上述标准液 0.15ml,
0.20ml,0.25ml,0.30ml,0.35ml,0.40ml于且塞试管中
置水浴上挥发去溶剂,然后加高氯酸 10ml,置 65℃
水浴不断振荡15min,取出冷却至室温,于406nm处
检测吸光值,以高氯酸为空白。
1.6.2 样品测定:精确称取样品各 0.1ml,在上述相
同条件下测定吸光值。
2 结果
2.1 薯蓣皂甙元的TLC鉴定结果
通过调整氯仿:甲醇:水的比例从 65:30:5到
100:0:0得到最佳比例为95:5:0,TLC的结果为
2.2 发酵液中的薯蓣皂甙元含量的测定
标准曲线的绘制
样品的吸光值分别为0.295和0.321。
根据标准曲线可以得出样品的薯蓣皂甙元
的含量样品1为0.0082mg/ml
样品2为0.0088mg/ml
3 讨论
通过 TLC的鉴定结果,可以知道,在分离得到
的两株菌株的发酵产物的水解物中含有薯蓣皂甙
元,故可推断其代谢产物中含有薯蓣皂甙,如果在
今后的工作中再通过优化发酵条件,提高代谢物的
产量,使通过生物发酵的方式来生产薯蓣皂甙成为
可能,而且通过后面的研究,在其代谢产物中仍有
其它种类的皂甙可能被确定。
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任 智 等:两株华重楼内生菌的发酵产物中薯蓣皂甙的检测 55