全 文 ：黑龙江医药 He 江刀 r回 inga M曰 i c二 JO unr al V( 〕 1. 18 用. 1 2 005
紫外分光光度法测定薄叶莺尾中总异黄酮的含量
顾丛峰
哈药集团医药有限公司 ( 1 5 0 0 2 0 )
摘要 目的 : 建立紫外分光光度法测定薄叶著尾中总异黄酮的含量 。 方法 : 药材粉末经 80 % 乙醉提取 l,J 、 时后 ,
采用 紫外分光光度法 , 检测波长为26 4附对薄叶鸯尾中总异黄酮 的含量进行测 定 。 结果 : 采用该方法可以 准确地测
定薄叶鸯尾中总异黄酮的含量 , 鸯尾菩在3 . 妞一 20 . 64 阔耐范围 内峰吸光度与浓度线性关 系良好 ( r = 0 . 9 9 , n 二
5 )
, 样品平均 回收率为 102 . 5 % , 精度密 RS I〕为0 . 2 % (n 二 5 ) , 重复性 R S[ )为 4 . 2( n = 5) , 稳定性 R3 〕为0 . 2 % ( 6小时
内 ) 。 结论该方法简单 、准确 , 可用于薄叶聋尾中总异黄酮的含量测定 。
关键词 薄叶鸯尾 ; 总异黄酮 ; 紫外分光光度法
D e t e r 们n i n a t i o n o f t h e T o t a l F l a v o n o id e S i n I r i s
I e P t o P h y l l a b y U V S P e c t r o P h o t o m e t ry
G u Q 刀 lg f e眼 月“ r b i n P h a rm a e e u t i e a l G r o uP H o ld i n g C o . , L td ( 1 5 0 0 2 0 )
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3
.
5 样品测定 : 按供试品溶液制备项下操作制得样品溶液 ,
精密吸取 3m l样品溶液 , 分别置10 O n l量瓶中 , 按双波长吸收光
谱测定项下操作 , 在2 57 . Onl 与2 86 . s nr 波长处测得吸收度差
值△ A ,并按回归方程计算含量 ,结果见表 1 。
表 1 样品测定结果
批 号 平均含量 (标示量 ) RSL ) ( % )
0 4 0 1 0 5 98
.
2 0
.
3 2
0 3 1 1 2 2 9 7
.
1 0
.
2 5
0 3 1 1 2 9 99
.
8 0
.
2 1
图1 紫外吸收光谱图
1
、空白溶液
3
、咖啡因溶液
2
、对乙酞氨基酚溶液
4
、供试品溶液
3
.
4 回收率试验 : 精密称取已知含量的氨咖黄敏胶囊内容物
细粉适量 , 置25 伍记量瓶中 , 加入一定量的 I 对照品 ,按供试品
溶液制备项下操作制得供试品溶液 , 精密吸取溶液3 . 。 111置
10 加1 1量瓶中 , 照双波长吸收光谱测定项下操作 , 分别测得
25 7
.
o nl 与 2 86 . 5 m xl波长处吸收度差值△A , 并按回归方程计
算含量 , 结果平均回收率为 10 . 5 % , R SI〕 = 0 . 36 % ( n = 5) 。
4 讨论
现行标准所用的含量测定方法是以外指示剂来确定终
点 ,误差较大 , 易受各种因素的影响 。 而采用本法可较好地排
除其它成分的干扰 , 具有操作简便 , 结果准确等优点 , 可作为
控制产品质量的一种手段 。
参考文献
〔1〕 国家药品监督管理局北学药品地方标准上升国家标准第三册
〔别 , 2 0 0 2 . 3一2 6 3 .
DOI : 10. 14035 /j . cnki . hl jyy . 2005. 01. 002
黑龙江医药 He 江习翔打毗M汕c坛记 Ju o即司 v l o .8 1哟 . 120 5
莺尾属植物中所含特征性成分为异黄酮 ,故前人采用许
多分析方法对其中所含异黄酮成分进行定性鉴别与含量侧
定 。 曾采用的方法有紫外分光光度法 、薄层色谱扫描法 、方波
伏安分析法 、 RP一H日上法等 。 薄叶莺尾是四川当地习用生
药 , 具有积消 、泻下作用 , 但薄叶莺尾至今没有确切的质量标
准 。 为对其进行深入的研究和评价 ,作者采用紫外分光光度
法对薄叶鸯尾中的总异黄酮含量进行测定
1 仪器与试药
75 2紫外光栅分光光度计 (上海分析仪器制造厂 卜十万分
之一分析天平 (上海天平仪器厂 ) 。 莺尾昔对照品为自提 , 结
构经VU
、
IR
、
IH一 N M叹及 ’ 3C一N M叹等鉴定 , 纯度经 H P] 以二检测
达9 8 % 以上 。 其它试剂均为分析醇 。 药材样品均采自四川坟
)日, 分别为92 年样品 , 01 年居群 1 、 2样品 , 02 年居群 1 、 2 、 3样品 ,
共六份样品 , 均经鉴定为薄叶鸯尾 rI i: le tP oP hy la 的干燥根
茎 。
2 实验方法与结果
2
.
1 对照品及供试品溶液的制备
2
.
1
.
1 对照品溶液的制备 :
精密称取对照品莺尾普 0 . 86 加嗯 , 置于2 5 n d量瓶中 , 用
80 % 乙醇溶解并定容至刻度 , 摇匀 , 配制成 0 . 03 4如gn /耐的溶
液 。
2
.
1
.
2 供试品溶液的制备 :
精密称取薄叶莺尾药材粉末 ( 60 目 ) 3 0 1名 , 加 80 % 乙醇
2伍111 , 热回流提取 1小时 ,趁热过滤 。 放冷 ,置于25nI] 容量瓶中
定容 ,摇匀 。 精密量取知吐于1 (h d容量瓶中定容。
2
.
2 检测波长的选择
对照品溶液及供试品溶液在20 0一40 Onm 之间进行扫描 ,
发现均在 264 nl 附近有最大吸收峰 , 由于 2 64 nl 处吸收较强 ,
故试验中选择测定波长为264 nr 。
2
.
3 线性关系的考察
分别精密吸取 1 、 2 、 4 、 6 、 8 、 10 、 l a l议对照品溶液置于 5伍飞U
容量瓶中 , 加80 % 乙醇定容至刻度 ,摇匀 ; 以80 % 乙醇为空白
对照 , 于 264 nr 处测定吸收度 。 用最小二乘法以浓度 ( X , n 嗯/
时 )对吸收度 ( Y )进行线性回归 , 回归方程为 :
Y 二 46
.
6 1X 一 0
.
0 25 5 (R = 0
.
99 99 )
线性范围3 .妞 欠 10 一 3一 2 . 06 4 火 20 一场官司
2
.
4 提取方法的考察
2
.
4
.
1 提取溶剂对提取效率的影响
称取四季青药材粉末 ( 60 目 ) 3伍 I名 , 分别加 90 % 乙醇 、
8 0 % 乙醇 、 70 % 乙醇 , 60 % 乙醇 、水 、 甲醇 2伍ilT , 按 “ 2 . 1 . 2项 ” 下
操作制备供试品溶液 。 以各自的溶剂为空白 , 于 264 nr 处测
定吸收度 ,按标准曲线计算总异黄酮含量 ( 以莺尾普计 ) 结
果见表4一:2
结果表明 ,提取溶剂以80 % 乙醇最好 。
2
.
4
.
2 提取时间对提取效率的影响
称取薄叶莺尾药材粉末 ( 60 目 ) 3 0 1艰 , 加80 % 乙醇 20r n l ,
按照 “ 2 . 1 . 2项” 下操作 , 分别加热回流0 . 5 、 1 、 2 、 3 、 4 、 h5 〕 以
80 % 乙醇为空白对照 , 于2 64 nm处测定吸收度 , 按标准曲线计
算总异黄酮含量 (以莺尾昔计 ) 。 结果见表4一 3
1乞b . 4 一 2 凡汉d t of 五沃加 e t盛o n 〔n = 3J
出1劝巴止 P , 兄 r (。落 ) 周以城冶叭 G角 t面 st (% ) M政旧 Cb n t e n ts ( % )
一一 一 -~ ~ ~ ~ , ~ ~ 户~ ~ , ~ ~ ~ 目 . 气, , ~
25
.
8 0
。
41 6 9
.
1 7
禅 3 .0 0 ’ O ,钧8 9 .一 . 2029 . 7 0 . 4花 9 . 082 8 . 8 0 . 的7 7沼 6乙醇 2 7 . 9 .0 39 1 .8 0 . 8 . 0 6
3 1
.
1 0
.
4 58 合。岛
2 8 6 0 47 1 9
,
30
9 0% 乙醇 29 . 8 0 . 48 0 9 . 09 9 . 24
2 5
.
9 0
.
4 2 6 9
.
3 4
2 9
.
0 0
.
5 5 6 10
.
7 4
80 % 乙醇 2 6 . 3 0 . 5 2 3 1 1 . 17 1 0 . 80
2 8
.
7 0
.
5 3 6 1 0
.
48
2 8
.
5 0
.
4 5 6 9
.
0 5
7 0 % 乙醇 2 7 . 2 0 . 4 5 2 9 . 4 1 9 . 19
2 8
.
9 0
.
4 6 6 9
.
1 1
3 1
.
4 0
.
4 2 9 7
.
7 6
6 0 % 乙醇 3 2 . 8 0 . 4 4 3 7 . 6 5 7 . 5 2
3 1
.
4 0
.
3 9 3 7
.
1 4
3 0
.
7 0
.
3 0 3 5
.
7 3
水 2 6 . 3 0 . 2 7 2 6 . 0 6 5 、 9 4
3 0
.
1 0
.
3 1 4 6
.
0 4
aT b
.
4 一 3 R es u l t o f E次t r a t lo n ( n = 3 )
T im e ( h ) R解r ( g ) A卫均。门〕 t io n 肠 n t e n t ( % ) M肋 n Q 〕n 戈e n招 ( % )
2 8
.
9 0
.
4 8 3 9
.
4 3
0
.
5 3 2
.
0 0
.
56 3 9
.
8 5 0
.
9 6 9
3 2
.
2 0
.
5 6 2 9
.
7 8
2 9
.
0 0
.
55 6 10
.
7 4
1 2 6
.
3 0
.
5 2 3 1 1
.
1 7 10
.
8 0
2 8
.
7 0
.
5 3 6 10
.
4 8
2 8
.
5 0
.
5 4 0 10
.
6 3
2 2 9
.
4 0
.
5 7 3 1 0
.
9 1 1 0
.
5 0
2 8
.
4 0
.
5 0 2 9
.
9 5
2 8
.
4 0
.
5 6 1 1 1
.
0 6
3 3 0
.
7 0
.
5 7 8 1 0
.
5 3 1 0
.
6 5
3 1
.
4 0
.
5 8 2 1 0
.
3 7
3 1
.
0 0
.
5 8 5 1 0
.
5 5
4 3 2
.
1 0
.
5 9 9 1 0
.
42 10
.
0 2
2 7
.
4 0
.
5 2 1 1 0
.
6 9
3 1
.
4
2 7
.
6
0
.
6 0 3 10
.
72
0
.
5 3 9 10
.
96 10
.
8 8
2 7
.
1 0
.
5 2 9 1 0
.
9 6
黑龙江医药 H e正刀刊打iag nN l edi c i neo J t叨al 碳 )l
.
1 8阳 . 1 20 0 5
结果表明 , 提取 1小时即可将总异黄酮基本提取完全 。
根据以上结果 ,确定提取条件为80 % 乙醇提取 1小时即
可 。
2
.
5 重复性实验
称取样品粉末3。 1瑶 ,按以上确定提取方法 ,按 “ 2 . 1 . 2项 ”
平行制备 5份样品 , 以80 % 乙醇为空白对照 , 在 264 nl 下进行
测定吸光度 ,结果见表 4一 4 。
肠 b . 4 一 4 R es u lt o f P a r a lle l T比 t ( n = 5 )
从 ) . B孙祀 r ( g ) 川翔印石以 1 bC net 北 ( % ) R S D ( % )
1 2 9
.
0 0
.
5 5 6
`
1 0
.
7 4
计算加样回收率 。 结果见表4一 7 。
aT b
.
4 一 7 R es u lst o f R田w e yr
2 6
.
3
2 8
.
7
0
.
5 2 3 1 1
.
1 7
0
.
5 3 6 1 0
.
48 4
.
2
3 5
.
4 0
.
7 1 1 1 1
.
15
29J4
5 2 8
.
9 0
.
52 1 10
.
13
结果表明 ,该方法重复符合要求 。
2
.
6 精密度实验
取同一份对照品溶液 ,在 2 64 nl 处测定其吸光度 , 连续测
定5次 。 结果见表 4一5
工〕b . 4 一 5 R es u lts of A e e t ir a e y T 比 t
月葱 〕取i o n R S D ( % )
1 0
.
5 2 2
0
.
5 2 0
0
.
5 2 0
0
.
5 1 9
5 0
.
5 2 1
结果表明 , 仪器精密符合要求 。
2
.
7 稳定性实验
取样品适量 , 按 ,’2 . 1 . 2项 ”制备供试品溶液 , 以80 % 乙醇
为空白对照 ,在26 4 nl n 下进行测定 , 每隔 1小时测定一次 ,连续
测5小时 。 结果见表4一6 。
飞b b . 4 一 6 R es u lt o f S t a bil yt T比 t
护几1犯 ( hr ) 越即咧lon RSD ( % )
1 0 0
.
4 8 9
2 1 0
. 峨8 9
3 2 0
.
4 9 0 0
.
5
4 3
.
0
.
49 2
5 4 0
.
4 9 3
6 5 0
.
4 9 5
结果表明 , 样品溶液在 5小时内稳定 。
2
.
8 加样回收率实验
精密称取薄叶莺尾药材粉末 ( 60 目 )约20 伍1名 ( 5份 ) , 分别
加对照品适量 , 加2 0 n l l甲醇 , 加热回流 ,放冷 , 用甲醇定容到
25I n l
, 摇匀 。 以80 % 乙醇为空白对照 , 在2 64 nl 下进行测定 ,
I飞队吧 r (为 n扭 in司 A应】代】 凡山记 R叨 v e r y N巨u l p 已。〕 v e yr
R S D
( g ) (
11砚 ) ( n套 ) ( 11名 ) ( % ) ( % )
3 1
.
8 3
.
4 3 44 0
.
8 1 0
.
7 6 9 3
.
8
3 0
.
6 3
.
3 04 8 0
.
9 6 1
.
0 2 1 0 6
.
3
2 8
.
9 3
.
12 12 0
.
7 1 0
.
78 1 0 9
.
8 10 2
.
5 6
.
1
2 9
.
4 3
.
17 5 2 1
.
2 5 1
.
3 0 10 4
.
0
3 2
.
5 3
.
5 1 1
.
64 1
.
62 9 8
.
8
回收率 ( % ) = 〔(测得量 一药材原含量 ) /加入量〕 * 10 %
结果表明 , 该方法加样回收率良好 , 符合分析要求 。
2
.
9 样品测定
精密称取薄叶莺尾药材粉末 ( 60 目 )约 3 0n 名 . 加 80 % 乙
醇 , 加热回流 , 放冷 , 于 25 n d容量瓶中定容 , 摇匀 。 精密量取
1司溶液于 1 (h l容量瓶中 ,稀释至刻度 。 所得溶液于2 64 nm 处
测定吸收度 。 按照标准曲线计算总异黄酮含量 (以莺尾普
计 ) ,结果见表4一 8 。
工 l b . 4 一 8 R es u lt o f l b r a l l阳 fla 、叼 n e s
R耀 r ( m g ) a l月〕rtP oln G 〕 n t e ll t s ( % )
9 2年样品 3 5 . 7 0 . 9 0 6 13 . 9 8
0 1年居群 1 3 5 . 2 0 . 63 0 9 . 9 8
0 1年居群 2 3 1 . 6 0 . 6 0 5 1 0 . 6 9
0 2年居群 1 3 2 . 3 0 . 6 9 6 1 1 . 9 7
02年居群2 3 5 . 4 0 . 7 1 1 1 1 . 15
02年居群3 3 2 . 8 0 . 7 0 4 1 1 . 9 2
3 讨论
3
.
1 异黄酮成分为薄叶莺尾根茎中的主要成分 , 与其它异黄
酮成分相比 ,莺尾昔的含量比其它的异黄酮高很多 , 所以采用
莺尾普为标准品来计算总异黄酮的含量 。
3
.
2 样品测定结果表明 , 6份薄叶莺尾样品中总异黄酮的含
量都在 10 % 以上 ,其中92 年药材总异黄酮含量最高 , 01 年居群
1的总异黄酮含量最低 。
3
.
3 有关薄叶莺尾中总异黄酮的含量测定方法没有报道
本文采用紫外分光光度法对薄叶鸯尾中总异黄酮的含量进行
测定 ,是一种方便有效的含量测定方法 , 为对薄叶莺尾进行全
面质量评价提供了一定的科学依据 。
收稿日期 : 2 0 0 4一 1 0一 0 7