全 文 ：海南木莲叶和枝总异黄酮的含量测定
鲍长余 1 ,范超君1 ,陈湛娟 1 ,毕和平 1, 2＊　
(1.海南师范大学化学与化工学院;海南海口 571158;2.海南师范大学“省部共建 -热带药用植物化学”教育部重点实验室 ,海南海口 571158)
摘要　[目的 ]测定海南木莲叶和枝中总异黄酮的含量。 [方法]以染料木素为对照品 ,采用紫外分光光度法在 266nm处测定样品的吸
光度。 [结果 ]染料木素对照品在 20～ 100μg时呈良好线性关系。其回归方程为C=0.003 9A, R=0.999 9。海南木莲叶、枝中总异黄酮
的含量为 0.240%和 0.078%。 [结论]该方法操作简便 ,结果稳定 ,重复性好 ,适合海南木莲叶和枝中总异黄酮含量的测定。
关键词　紫外分光光度法;海南木莲;总异黄酮
中图分类号　S567　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2011)25-15270-02
DeterminationofIsoflavonesintheLeavesandStemsofManglietiahainanensis
BAOChang-yuetal　(KeyLaboratoryofTropicalMedicinalPlantChemistryofMinistryofEducation, HainanNormalUniversity, Haikou,
Hainan571158)
Abstract　 [ Objective] TheaimwastodeterminethecontentoftheisoflavonesintheleavesandthestemsofManglietiahainanensis.[ Meth-
ods] Genisteinwasviewedasreferencesubstance, theultravioletspectrophotometricmethodwasusedtodeterminethecontentoftheisofla-
vonesintheleavesandbranchesofManglietiahainanensis.[ Results] Thecalibrationcurvewaslinearintherangeof0.000 5-0.004 5
μg/ml, andtheregressionequationwasC=0.003 9A, R=0.999 9, thecontentwas0.240% and0.078%.[Conclusion] Thespectropho-
tometrywassuitableforthedeterminationofisoflavonesfromtheleavesandbranchesofManglietiahainanensis.Thismethodoperatedconven-
iently, theresultwasstableandhasgoodrepeatability.
Keywords　 Ultravioletspectrophotometricmethod;Manglietiahainanensis;Isoflavones
基金项目　海南省教育厅资助项目(Hjkj2008-27);海南师范大学大学
生创新实验项目(081165814)。
作者简介　鲍长余(1980-),男 ,山东济宁人 ,硕士研究生 , 研究方向:
天然产物化学。 ＊通讯作者。
收稿日期　 2011-05-23
　　海南木莲(Manglietiahainanensis)为木兰科植物 ,为海南
特产 ,是集观赏与药用为一身的珍贵树种 ,当地称为龙楠树 、
绿楠 、绿兰等 ,主要分布于海南省定安 、保亭 、乐东 、琼中 、陵
水 、三亚 、东方等市县 [ 1-5] 。异黄酮类化合物广泛分布于豆
科植物 ,具有预防妇女更年期综合征 、乳腺癌 、心血管疾病 、
早老性痴呆症 、改善骨质疏松 、经期不适 ,提高性生活质量 ,
降低胆固醇 ,调节血脂预防心血管疾病 ,延缓衰老等作
用 [ 6-10] 。为充分利用海南木莲药用植物 ,笔者以染料木素为
对照品 ,利用紫外分光光度法测定海南木莲叶和枝中总异黄
酮酸的含量 [ 11-12] ,为海南木莲的开发利用提供理论依据。
1　材料与方法
1.1　仪器　紫外可见分光光度计(上海国美科学仪器制造
有限公司);EYEL4OSB-2100旋转蒸发仪(日本东京理化);
索式提取器等 。
1.2　试剂　95%乙醇 、无水乙醇均为国产分析纯;染料木素标
准品购自上海顺勃生物工程有限公司(纯度大于 98.0%)。
1.3　材料　海南木莲采自海南省乐东尖峰岭森林公园 ,经
海南师范大学生命科学学院钟琼芯高级实验师鉴定为文兰
科木莲属植物海南木莲的叶和枝 ,标本现存于海南省热带药
用植物化学重点实验室。
1.4　方法
1.4.1　对照品溶液的制备。准确称取 110 ℃干燥至恒重的
染料木素对照品 10.0 mg,置于 100 ml容量瓶中 ,加 0.01
mol/ml的 NaOH定容 ,摇匀 ,得浓度为 0.100mg/ml溶液 ,精
确移取溶液 5.0 ml,定容至 1 000 ml,得浓度为 0.000 5
mg/ml的对照品溶液。
1.4.2　样品溶液的制备。将粉碎过的海南木莲叶和枝于
50 ℃干燥 24 h,各准确称取 2.00 g,用无水乙醇浸泡 2 h,再
用索式提取器提取 8 h,回收乙醇 ,残留物放冷至室温 ,用
0.01 mol/mlNaOH定容至 1 000ml,叶和枝提取物准确吸取
2.5ml于 100 ml容量瓶中 ,用 0.01 mol/mlNaOH定容 ,摇
匀 ,制得浓度为 0.050 0 mg/ml溶液。以下试验中均取 1.0
ml上述溶液 ,用 0.01 mol/mlNaOH配制成 50 ml0.001
mg/ml样品溶液进行测量。
2　结果与分析
2.1　测定波长　染料木素对照品溶液进行可见 -紫外全波
长扫描 ,随行空白对照。结果表明 ,对照品溶液在 266 nm处
有最大吸收峰(图 1),多次重复 ,峰形一致且空白对照无干
扰 ,故选择 266 nm作为样品测定的波长。
图 1　对照品紫外吸收峰
Fig.1　UVabsorptionspectrumofreferencesubstances
2.2　标准曲线　准确吸取对照品溶液 0.1、0.2、0.4、0.6、
0.8ml分别置于 5个 100 ml容量瓶中 ,将容量瓶放入 70 ℃
水浴中加热 15min,冷却至室温 ,用 0.01 mol/mlNaOH定容
至刻度 ,摇匀 。在 266nm处测定吸光度值 A。以染料木素含
量(μg/ml)为横坐标 ,吸光度值为纵坐标 ,得到标准曲线(图
2)。标准曲线:C=0.003 9A, 其中 C为浓度(μg/ml), A为
吸光度 。
相关系数:R=0.999 9,线性范围为 0.0005 ～0.004 5μg/ml。
责任编辑　李占东　责任校对　况玲玲安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2011, 39(25):15270-15271, 15274
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2011.25.200
图 2　标准曲线
Fig.2　Standardcurve
2.3　稳定性　取样品溶液 1.0 ml,按照 “2.2”操作 ,每隔 10
min测定 1次 ,结果见表 1,由表 1可知 ,该方法在 1 h内基本
稳定。
2.4　精密度　取同一批样品 ,进行 5次平行试验 ,测定含
量 ,结果见表 2。由表 2可知 ,叶提取物吸光度 RSD=1.27%
(n=5), 枝提取物吸光度 RSD=3.92%(n=5),表明精密度
良好。
2.5　加样回收率　取样品溶液 1.0 ml,按照 “2.2”操作 ,准
确加入一定量的的染料木素对照品 ,按含量测定条件测定 ,
结果见表 3。由表 3可知 ,叶提取物平均回收率为 104.31%,
RSD=2.31%, 枝提取物平均回收率为 102.13%, RSD
为 1.17%。
表 1　稳定性试验
Table1　Stabilitytest
溶液种类Solutiontypes
吸光度 Absorbance
0min 10min 20min 30min 40min 50min 60min
平均值Averagevalue RSD%
对照品 Referencesubstance 0.588 3 0.598 9 0.600 3 0.602 6 0.608 6 0.613 3 0.615 9 0.604 1 1.45
叶提取物Extractsofleaves 0.602 3 0.609 8 0.612 2 0.618 2 0.619 8 0.628 6 0.625 3 0.616 6 1.37
枝提取物Extractsofbranches 0.191 1 0.193 6 0.190 7 0.200 3 0.201 7 0.205 6 0.210 3 0.199 0 3.51
表 2　精密度试验
Table2　Precisiontest
提取物
Extracts
吸光度AbsorbanceNo.
1 2 3 4 5
平均值
Averagevalue
RSD
%
叶提取物Extractsofleaves 0.610 3 0.615 2 0.600 8 0.624 3 0.608 8 0.611 9 1.27
枝提取物Extractsofbranches 0.189 9 0.190 3 0.198 5 0.201 3 0.210 9 0.198 2 3.92
表 3　加样回收率试验
Table3　Recoverytest
编号Serialnumber
样品折算总异黄酮含量Totalisoflavonescontentofthesampletranslation∥μg
加入对照品量Addreferencesubstance∥μg
测得量Measuredvolume∥μg
回收率Recoveryrate∥%
平均回收率Averagerecoveryrate∥% RSD∥%
叶 Leaves 1 119.00 100 210.60 103.99 104.31 2.38
2 119.80 100 201.80 108.92
3 120.30 100 215.90 102.04
4 118.70 100 213.90 102.24
5 119.90 100 210.80 104.32
枝 Branches 1 37.79 50 85.65 102.49 102.13 1.17
2 38.01 50 85.76 102.62
3 38.26 50 86.04 102.58
4 38.61 50 88.79 99.79
5 37.91 50 85.22 103.16
2.6　样品含量　准确量取 3份海南木莲枝 、叶样品各 1.0
ml,按 “2.2”操作 ,将容量瓶放入 60℃水浴中加热 15 min,冷
却至室温 ,用 0.01 mol/mlNaOH定容到刻度 ,摇匀 。在 266
nm处测定吸光度 ,代入标准曲线方程 ,计算含量。由表 4可
知 ,海南木莲叶中总异黄酮含量为 0.240%, RSD为 1.13%,
其枝总异黄酮含量为 0.078%, RSD为 1.63%。
表 4　海南木莲总异黄酮含量
Table4　TotalisoflavonescontentinManglietiahainanensis
样品
Samples
吸光度 Absorbance
1 2 3
平均值
Averagevalue RSD∥%
总异黄酮含量
Totalisoflavonescontent∥%
平均值
Averagevalue∥%
叶 Leaves 0.613 3 0.618 2 0.601 8 0.611 1 1.13 0.24 0.240
0.615 8 0.606 7 0.600 9 0.607 8 0.240
0.628 6 0.609 6 0.621 3 0.619 8 0.25
枝 Branches 0.193 8 0.189 6 0.194 7 0.192 7 1.63 0.078 0.078
0.203 6 0.197 3 0.201 3 0.200 7 0.081
0.197 7 0.190 1 0.201 6 0.196 5 0.077
3　结论与讨论
目前总异黄酮类化学成分含量的测定多采用紫外分光
法和高效液相色谱法 [ 13] ,后者试验操作复杂 ,易受各种试剂
　 (下转第 15274页)
1527139卷 25期　　　　　　　　　　　　　　　　鲍长余等　海南木莲叶和枝总异黄酮的含量测定
图 4　上样流速对树脂吸附量的影响曲线
Fig.4　Influencecurveofflowrateonadsorptioncapacity
图 5　样品液浓度对吸附量的影响曲线
Fig.5　Influencecurveofsamplesolutionconcentrationonad-
sorptioncapacity
表 2　验证试验结果
Table2　Resultsofverificationtest
试验编号TestNo.
乙醇洗脱液干浸膏重Weightofdryextractinethanoleluent∥mg
固形物中总皂苷含量Contentoftotalsaponinsinsolid∥mg
黄芪总皂苷收率YieldoftotalsaponinsinRADIXASTRAGALI∥%
1 495 259 52.6
2 488 251 51.4
3 492 258 52.4
平均值 Average 491.7 256 52.1
2.2.6　样品液浓度对吸附的影响。由图 5可知 ,提取液浓
度过高或过低 ,都可能影响树脂与总皂苷的相互作用。因
此 ,确定样品液浓度为 0.1 g/ml。
　　综上所述 , AB-8型大孔树脂富集纯化黄芪总皂苷的最
优条件为:采用黄芪提取液浓度为 0.1 g/ml上柱 ,上样量为
3BV,流速为 1.0 ml/min,解吸时先用 4 BV蒸馏水淋洗 ,再
用 4 BV50%乙醇解吸 ,收集 50%乙醇洗脱液 ,得黄芪总皂苷
提取物浸膏 ,黄芪总皂苷收率可达 52.1%。
2.3　验证试验　由表 2可知 ,大孔树脂 AB-8对黄芪总皂苷
有较好的分离纯化效果。
3　讨论
大孔树脂时应在宽敞的容器中使树脂充分溶胀 ,才能装
柱 ,上柱时速度应该均匀 ,以免影响层析 ,同时为避免装柱时
产生气泡 ,应边装柱边轻轻敲打柱子 ,装完后 ,放置 24 h,使
其沉淀均匀。
黄芪具有增强免疫 、代谢 、降压及利尿作用 ,黄芪皂苷是
其主要生理活性部分。采用大孔树脂法分离皂苷 ,远远优于
常规萃取法 ,大孔吸附树脂可以反复使用 ,耗能少 ,成本低 ,
洗脱液质量好 ,洗脱高峰集中。杂质含量低 ,得到的黄芪皂
苷含量高。
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(上接第 15271页)
用量 、反应温度 、反应时间等因素的影响 。该试验直接以无
水乙醇作为溶剂 ,采用该方法进行测定 ,测得海南木莲叶和
枝中总异黄酮含量分别为 0.240%和 0.078%。该方法简便 ,
结果稳定 ,重复性好 。
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