全 文 ：紫外分光光度法测定细基丸茎和叶总异黄酮的含量
*
刘冰晶1，曾 靖1，李 超1，江智伟1，宋鑫明2
(1．赣南医学院药学院 江西省脑血管药理重点实验室，江西 赣州 341000;2．海南师范大学化学与化工学院
“省部共建”热带药用植物教育部重点实验室，海南 海口 571158)
摘 要:目的:测定细基丸茎、叶中总异黄酮的含量。方法:以染料木素为对照品，产生反应，采用紫外 －可见分光
光度法在 266 nm波长处测定样品的吸光度。结果:染料木素对照品在 0． 20 ～ 1． 60 μg /mL范围内呈良好线性关
系，回归方程为 C = 0． 003 9 A，R = 0． 999 9。细基丸茎和叶中的总异黄酮含量分别为 0． 120 2%和 0． 231 5%。结
论:本法操作简便，结果可靠，重复性好，可用作细基丸中总异黄酮的含量测定。
关键词:细基丸;总异黄酮;紫外分光光度法
中图分类号:O657． 32 文献标志码:A 文章编号:1001 － 5779(2012)06 － 0809 － 03
Ultraviolet Spectrophotometric Determination of Total Isoflavones
in the Stems and Leaves of Polyalthia cerasoides
LIU Bing-jing1，ZENG Jing1，LI Chao1，JIANG Zhi-wei1，SONG Xin-ming2
(1． College of Pharmacy，Gannan Medical University，Ganzhou，Jiangxi Provincical Key Lab of Cerebrovascular pharmacology
Ganzhou，Jiangxi 341000;2． College of Chemistry and Chemical Engineering，Hainan Normal University，Key Laboratory
of Tropical Medicinal Plant Chemistry of Ministry of Education;Hainan Normal University;Hainan 571158)
Abstract:Objective:To determine the content of the isoflavones in the stem and leaves of Polyalthia cerasoides． Meth-
ods:Genistein as the standard，used the ultraviolet spectrophotometric method to determine the content of the isoflavones
in the stems and leaves of P． cerasoides． Results:The calibration curve was linear(R =0． 999 9)in the range of 0． 000 5
～ 0． 004 5 μg /mL，and the curve was C = 0． 003 9 A，The content of stems was about 0． 120 2% and content of leaves
was about0． 231 5% ． Conclusion:The spectrophotometry is suitable for the determination of isoflavones from the stems
and leaves of P． cerasoides． This method was operated conveniently，the result was stable，and has good repeatability．
Key words:Polyalthia cerasoides;Total Isoflavones;Spectrophotometric method
细基丸(Polyalthia cerasoides Roxb)隶属番荔枝
科(Annonaceae) ，暗罗属(Polyalthia)植物，分布于云
南、广西、广东、海南，国外分布于东南亚［1］。异黄
酮类化合物是植物苯丙氨酸代谢过程中，由肉桂酰
辅酶 A侧链延长后环化形成以苯色酮环为基础的
酚类化合物，为广泛分布于高等植物的色素。预防
妇女更年期综合征、乳腺癌等女性易得癌症、心血管
疾病、早老性痴呆症，预防、改善骨质疏松、改善经期
不适，提高性生活质量，降低胆固醇，调节血脂，美
容、延缓衰老的作用［2 － 7］。而紫外分光光度法可用
于总异黄酮的含量测定［8］。本实验首次以染料木
素为对照品，利用紫外分光光度法测定细基丸茎和
叶中总异黄酮的含量，为细基丸的开发利用提供依
据。
1 仪器、试剂与材料
紫外可见分光光度计(日本 UV2600 spectropho-
tometer) ;EYEL4OSB －2100 旋转蒸发仪(日本，东京
理化) ;95%乙醇，无水乙醇和 NaOH 等均为国产分
析纯;染料木素标准品购自上海顺勃生物工程有限
公司(纯度大于 98． 0%)。
细基丸药材采自海南省昌江县霸王岭自然保护
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第 32 卷 第 6 期 赣 南 医 学 院 学 报 Vol． 32 NO． 6
2012 年 12 月 JOURNAL OF GANNAN MEDICAL UNIVERSITY DEC． 2012
* 基金项目:海南省自然科学基金(20604) ;赣南医学院校级项目(YB201116)
通讯作者:曾靖，男，教授，主要从事中药药理学研究。E-mail:zengjing61@ hotmail． com
区，经海南师范大学生命科学学院钟琼芯副教授鉴
定为 Polyalthia plagioneura Diels，标本现存于海南师
范大学热带药用植物化学教育部重点实验室。
2 实验方法
2． 1 对照品溶液的制备 准确称取 105 ℃干燥至
恒重的染料木素对照品 10． 0 mg，置于 100 mL 容量
瓶中，加 NaOH溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为
0． 100 g /L 溶液，精确移取溶液 5． 0 mL，定容至
1 000 mL，得浓度为 0． 000 5 g /L的对照品溶液。
2． 2 供试品溶液的制备 将粉碎过的细基丸茎、叶
于 50 ℃烘箱干燥 24 h，各准确称取 2． 00 g，用无水
乙醇浸泡 2 h，索式提取 8 h，回收乙醇，残留物放冷
至室温，用0．01 mol /mL的NaOH溶解并定容至100 mL，
茎、叶子提取物准确吸取 2． 5 mL 于 100 mL 容量瓶
中，用 NaOH定容至刻度，摇匀，制得 0． 050 0 g /L供
试品溶液。
以下实验中均取 1． 0 mL上述溶液，用 0． 01 mol /mL
的 NaOH配制成 50 mL 0． 001 mg /mL样品溶液进行
测量。
2． 3 测定波长的选择 取染料木素对照品溶液，
(空白对照为不加对照品的混合溶液，用 NaOH稀释
至刻度的混合溶液)显色后，进行可见紫外全波长
扫描。结果表明，对照品溶液在 266 nm处有最大吸
收峰(见图 1) ，多次重复，峰形一致且空白对照无干
扰，故选择 266 nm作为样品测定的波长。
3 结 果
3． 1 标准曲线的绘制 准确吸取对照品溶液 0． 1，
0． 2，0． 4，0． 6，0． 8 mL分别置于 5 个 100 mL容量瓶
中，将容量瓶放入 70 ℃水浴中加热 15 min，冷却至
室温，用 0． 01 mol /mL的 NaOH定容，摇匀。在 266 nm
波长处测定吸光度值 A。以染料木素含量(μg /mL)
为横坐标，吸光度值为纵坐标，作图 2 得到标准曲
线，得其回归方程 C = 0． 003 9 A，相关系数:R =
0． 999 9，线性范围为 0． 000 5 ～ 0． 004 5 μg /mL。
3． 2 稳定性实验 取样品溶液 1． 0 mL，按照
“2． 4”项下操作，每隔 10 min 测定一次，结果表明
茎、叶提取物在 1 h 内稳定，RSD%分别为 2． 37%，
2． 04%。
图 1 对照品紫外吸收峰图
标准曲线:C =0．003 9 A，其中C为浓度(μg/mL)，A为吸光度。
相关系数:R =0．999 9，线性范围为0．000 5 ～0．004 5 μg/mL。
图 2 标准曲线图
3． 3 精密度实验 取同一批样品，进行 5 次平行实
验，测定含量，茎提取物吸光度 RSD = 1． 324%，叶
子提取物吸光度 RSD =1． 738%，表明精密度良好。
3． 4 加样回收率实验 准确称取 5 份已知含量的
细基丸茎、叶粉末各 2． 00 g，准确加入一定量的染料
木素对照品，按“2． 2”项方法制备供试品溶液，按含
量测定条件测定(见表 1)。结果表明，茎提取物平
均回收率为 98． 66%，RSD = 1． 97%，叶子提取物平
均回收率为 102． 21%，RSD =2． 03%。
3． 5 样品含量测定 准确称取 3 份细基丸茎、叶子
粉末各 2． 00 g，按“2． 2”项方法制备供试品溶液。
从上述 3 份供试品溶液中各取 1． 0 mL，70 ℃水浴中
加热 15 min，冷却至室温，用 0． 01 mol /mL 的 NaOH
定容，摇匀。在 266 nm 波长处测定吸光度值，代入
标准曲线方程，计算含量，见表 2，结果细基丸茎总
异黄酮含量值为 0． 120 2%(n = 3)。其叶子中总异
黄酮含量为值为 0． 231 5%(n = 3)。
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赣 南 医 学 院 学 报 2012 年
表 1 稳定性实验
溶液种类
吸光度(A)
0 min 10 min 20 min 30 min 40 min 50 min 60 min 平均值 RSD(%)
叶提取物 0． 597 9 0． 621 3 0． 589 2 0． 594 4 0． 582 3 0． 599 3 0． 601 9 0． 598 0 2． 04
枝提取物 0． 302 0 0． 312 6 0． 311 3 0． 298 3 0． 301 3 0． 306 5 0． 292 4 0． 292 4 2． 37
表 2 含量测定结果
编号
测定值
1 2 3 平均值
总异黄酮含量
%
平均值
%
茎提取物
1 0． 312 2 0． 300 2 0． 310 2 0． 307 5 0． 121 3
2 0． 309 8 0． 312 4 0． 299 8 0． 307 3 0． 119 8 0． 120 2
3 0． 309 6 0． 312 0 0． 300 6 0． 307 4 0． 119 7
叶子提取物
1 0． 598 9 0． 590 3 0． 592 2 0． 593 8 0． 231 7
2 0． 597 4 0． 590 4 0． 587 7 0． 591 8 0． 230 8 0． 231 5
3 0． 593 4 0． 602 3 0． 589 6 0． 595 1 0． 232 2
4 结 论
目前总异黄酮类化学成分的含量测定多采用
HPLC法和比色法，考虑到重量法适合对原料药材
进行定量鉴别，实验操作复杂，受各种试剂的用量、
反应温度、反应时间等诸多因素影响较为显著。本
实验直接以染料木素作为标准品进行测定，结果表
明细基丸茎、叶子中总异黄酮含量分别为0． 120 2%
和0． 231 5%。该方法简便可靠，结果稳定，相比其
它文献报道测量异黄酮含量的方法［9］减化了实验
步骤，缩短了实验时间，同样达到很好的信度。本
实验表明，本方法也可作为该药材质量评估的一种
检测手段。
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(收稿日期:2012 － 09 － 19)
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6 期 刘冰晶，等 紫外分光光度法测定细基丸茎和叶总异黄酮的含量