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紫外分光光度法测定破布叶枝和叶总异黄酮的含量



全 文 :食 品 科 技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY食品安全与检测
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2012年 第37卷 第10期
破布叶(Microcos Paniculata L.)隶属椴树科
(Tiliaceae)破布叶属(Microcos),亦称蓑衣子、麻
收稿日期:2012-03-03 *通讯作者
基金项目:海南省自然科学基金项目(20804);海南省热带药用植物重点实验室资助项目;海南师范大学大学生创新实验项目。
作者简介:鲍长余(1980—),男,山东济宁人,硕士研究生,研究员,主要从事天然产物化学研究的工作。
布叶、烂布渣、布包木、破布树、薢宝叶[1],是
广东、广西和海南地区常用的民间药物,有清热
鲍长余1,2,刘冰晶1,2,毕和平1,2*,范超君1,2,陈湛娟1,2
(1.海南师范大学化学与化工学院,海口 571158;2.海南师范大学
“省部共建-热带药用植物化学”教育部重点实验室,海口 571158)
摘要:测定破布叶枝、叶中总异黄酮的含量。以染料木素为对照品,产生反应,采用紫外-可
见分光光度法在266 nm波长处测定样品的吸光度。染料木素对照品在0.20~1.60 g/mL范围内呈良
好线性关系,回归方程为C=0.0039A,r=0.9999。破布叶枝和叶中的总异黄酮含量分别为0.07%
和0.23%。本法操作简便,结果可靠,重复性好,可用作破布叶中总异黄酮的含量测定。
关键词:破布叶;总异黄酮;紫外-可见分光光度法
中图分类号:R 284 文献标志码:A 文章编号:1005-9989(2012)10-0260-04
Ultraviolet spectrophotometric determination of total isoflavones in the
stems and leaves of Microcos Paniculata L.
BAO Chang-yu1,2, LIU Bing-jing1,2, BI He-ping1,2*, FAN Chao-jun1,2, CHEN Zhan-juan1,2
(1.College of Chemistry and Chemical Engineering, Hainan Normal University, Haikou
571158; 2.Key Laboratory of Tropical Medicinal Plant Chemistry of Hainan Province, Haikou
571158)
Abstract: To determine the content of the isoflavones in the stem and leaves of M. Paniculata L.
Genistein as the standard, used the ultraviolet spectrophotometric method to determine the content of
the isoflavones in the stems and leaves of M. Paniculata L.. The calibration curve was linear (r=0.9993)
in the range of 0.0005~0.0045 μg/mL, and the curve was C=0.0039A. The content of stems was about
0.07% and content of leaves was about0.23%. The spectrophotometry is suitable for the determination of
isoflavones from the stems and leaves of M. Paniculata L.. This method operated convenientely, the result
was stable, and has good repeatability.
Key words: Microcos Paniculata L.; total Isoflavones; spectrophotometric method
紫外分光光度法测定破布叶枝和
叶总异黄酮的含量
DOI:10.13684/j.cnki.spkj.2012.10.016
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2012年 第37卷 第10期
解毒,消食积及解渴开胃的功效,常用于治疗感
冒、咽喉痛、食滞腹胀、黄疸和蜈蚣咬伤等[2-3]。
异黄酮类化合物是植物苯丙氨酸代谢过程中,由
肉桂酰辅酶A侧链延长后环化形成以苯色酮环为
基础的酚类化合物,广泛分布于高等植物。异黄
酮类化合物在预防妇女更年期综合征、乳腺癌等
女性易得癌症、心血管疾病、早老性痴呆症,预
防、改善骨质疏松、改善经期不适,提高性生活
质量,降低胆固醇,调节血脂,美容、延缓衰
老的作用[4-9]。本实验旨在通过含量测定检验破
布叶枝和叶中总异黄酮的含量,为其分离和成
分研究提供实验依据。而紫外分光光度法可用
于总异黄酮的含量测定[10-13]。本实验首次以染
料木素为对照品,利用紫外分光光度法测定破
布叶枝和叶中总异黄酮的含量,为破布叶的开
发利用提供依据。
1 仪器、试剂与材料
1.1 仪器
UV2600紫外可见分光光度计:日本Spectro-
photometer;EYEL4OSB-2100旋转蒸发仪:日本,
东京理化。
1.2 试剂
95%乙醇、无水乙醇、NaOH:国产分析纯;
染料木素标准品:上海顺勃生物工程有限公司(纯
度大于98.0%)。
1.3 材料
破布叶药材采自海南省三亚市,经海南师范大
学生命科学学院钟琼芯实验员鉴定为椴树科破布叶
属植物(M.Paniculata L)的枝和叶,标本现存于海南
师范大学海南省热带药用植物化学重点实验室。
2 实验方法
2.1 对照品溶液的制备
准确称取105 ℃干燥至恒重的染料木素对照
品10.0 mg,置于100 mL容量瓶中,加NaOH溶解
并稀释至刻度,摇匀,得浓度为0.100 g/L溶液,
精确移取溶液5.0 mL,定容至1000 mL,得浓度为
0.0005 g/L的对照品溶液。
2.2 供试品溶液的制备
将粉碎过的破布叶枝、叶于50 ℃烘箱干燥24
h,各准确称取2.00 g,用无水乙醇浸泡2 h,索式
提取8 h,回收乙醇,残留物放冷至室温,用0.01
mol/mL的NaOH溶解并定容至100 mL,枝、叶子提
取物准确吸取2.5 mL于100 mL容量瓶中,用NaOH
定容至刻度,摇匀,制得0.0500 g/L供试品溶液。
以下实验中均取1.0 mL上述溶液,用0.01 mol/
mL的NaOH配制成50 mL 0.001 mg/mL样品溶液进行
测量。
2.3 测定波长的选择
取染料木素对照品溶液(空白对照为不加对照
品的混合溶液,用NaOH稀释至刻度的混合溶液)
显色后,进行可见-紫外全波长扫描。结果表明,
对照品溶液在266 nm处有最大吸收峰(见图1),多
次重复,峰形一致且空白对照无干扰,故选择266
nm作为样品测定的波长。
标准曲线:C=0.0039A
式中:C为浓度,μg/mL;
A为吸光度。
相关系数:R=0.9999,线性范围为0.0005~
0.0045 μg/mL。

    




­ON

    




­ON
         






≿Ꮢf ®HN- 

图1 对照品紫外吸收峰图
图2 标准曲线图
3 结果
3.1 标准曲线的绘制
准确吸取对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8
mL分别置于5个100 mL容量瓶中,将容量瓶放入
70 ℃水浴中加热15 min,冷却至室温,用0.01 mol/
mL的NaOH定容,摇匀。在266 nm波长处测定吸
光度值A。以染料木素含量(μg/mL)为横坐标,吸
光度值为纵坐标,作图2得到标准曲线,由其回归
方程得知该线性方程相关度非常高,即测量精度
较高。
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3.2 稳定性实验
取样品溶液1.0 mL,按照“2.4”项下操作,
每隔10 min测定1次,结果列为表1,RSD%较小,
表明本方法在1 h内基本稳定。
表1 稳定性实验
溶液种类
吸光度
0 min 10 min 20 min 30 min 40 min 50 min 60 min
对照品 0.5883 0.5989 0.6003 0.6026 0.6086 0.6133 0.6159 0.6041 1.45
枝提取物 0.1903 0.1906 0.1967 0.1907 0.1948 0.1937 0.1995 0.1937 1.67
叶子提取物 0.6012 0.6045 0.6107 0.6111 0.6119 0.6206 0.6447 0.6149 2.18
3.3 精密度实验
表2 精密度实验
提取物
吸光度编号
平均值 RSD/%1 2 3 4 5
枝提取物 0.1759 0.1839 0.1869 0.1893 0.1789 0.1829 2.525
叶子
提取物 0.6322 0.6162 0.6128 0.6243 0.6488 0.6269 2.053
取同一批样品,进行5次平行实验,测定含
量,结果见表2,枝提取物吸光度RSD=2.52%,叶
子提取物吸光度RSD=2.05%,表明精密度良好。
3.4 加样回收率实验
准确称取5份已知含量的破布叶枝、叶粉末
各2.00 g,准确加入一定量的染料木素对照品,按
“2.2”项方法制备供试品溶液,按含量测定条件
测定(结果见表3)。结果表明,枝提取物平均回收
率为99.41%,RSD=1.23%,叶子提取物平均回收
率为101.59%,RSD=0.95%。
表3 加样回收率实验
编号 样品折算总异黄酮含量/μg
加入对照
品量/μg 测得量/μg 回收率/% 平均回收/% RSD/%

1 35.45 50 86.56 98.72
99.41 1.23
2 34.56 50 85.96 98.83
3 37.11 50 87.04 100.1
4 38.16 50 87.97 97.94
5 35.34 50 84.12 101.43

1 131.1 100 232.6 99.31
101.59 2.04
2 128.8 100 219.8 104.92
3 120.3 100 215.9 102.04
4 118.7 100 219.9 99.45
5 128.9 100 223.8 102.23
3.5 样品含量测定
准确称取3份破布叶枝、叶子粉末各2.00 g,
按“2.2”项方法制备供试品溶液。从上述3份供
试品溶液中各取1.0 mL,70 ℃水浴中加热15 min,
冷却至室温,用0.01 mol/mL的NaOH定容,摇匀。
在266 nm波长处测定吸光度值,代入标准曲线方
程,计算含量,见表4,结果破布叶枝总异黄酮含
量为值为0.07%,RSD=0.95%(n=3)。其叶子中总异
黄酮含量为值为0.23%,RSD=1.24%(n=3)。
4 结论
目前总异黄酮类化学成分的含量测定多采
用HPLC法和比色法,HPLC法[14]实验操作较为复
杂,受流动相试剂的用量、反应温度、反应时间
等诸多因素影响较为大。本实验直接以染料木素
作为标准品,进行测定,结果表明破布叶枝、叶
子中总异黄酮含量分别为0.07%和0.23%,表明枝
中含量较少,分离较困难,叶中比例稍高。该方
法简便可靠,结果稳定。
参考文献:
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册)[S].广州:广东科学技术出版社,2004:66
表4 含量测定结果
编号
测定值
平均值 总异黄酮含量/%
平均值
/%1 2 3
枝提
取物
1 0.1909 0.1922 0.1876 0.1902 0.0742
0.072 0.1906 0.1873 0.1925 0.1901 0.0741
3 0.1926 0.1907 0.1846 0.1893 0.0738
叶子
提取物
1 0.6050 0.6068 0.5818 0.5979 0.2332
0.232 0.6192 0.6048 0.5807 0.6016 0.2346
3 0.6055 0.5891 0.6189 0.6045 0.2358
平均值 RSD/%
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2012年 第37卷 第10期
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